1 / 7

Podsumowanie - wykład 2

Podsumowanie - wykład 2. Struktura kwasów nukleinowych ( DNA i RNA) Dwuniciowa helisa DNA ( typy helis DNA) Rodzaje i funkcje RNA (podział funkcyjny; wielkość cząsteczek) Właściwości kwasów nukleinowych

amber
Download Presentation

Podsumowanie - wykład 2

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Podsumowanie - wykład 2 • Struktura kwasów nukleinowych ( DNA i RNA) • Dwuniciowa helisa DNA ( typy helis DNA) • Rodzaje i funkcje RNA (podział funkcyjny; wielkość cząsteczek) • Właściwości kwasów nukleinowych • - stabilność, wpływ niskiego i wysokiego pH, denaturacja chemiczna, denaturacja termiczna, gęstość) • 5. Metody izolacji kwasów nukleinowych (założenia i etapy) • 6. CTAB dla DNA, TRIZOL (TRI) dla RNA; zestawy komercyjne • 7. Ocena stopnia czystości i ilości preparatów DNA i RNA • Pomiary spektrofotometryczne • Elektroforeza w żelu agarozowym;

  2. TYPY HELIS DNA Forma B - DNA – prawoskrętna, zidentyfikowana przez Watsona i Cricka występuje in vivo w każdym DNA; Forma A - DNA – prawoskrętna, powstaje w warunkach niskiej wilgotności, jej struktura jest szersza i krótsza niż formy B in vivo hybrydach DNA-RNA Dwuniciowe helisy A, B, Z Forma Z - DNA – lewoskrętna, powstaje w dwuniciowym DNA, w którym zasady pirymidynowe i purynowe występują po sobie na przemian np. CGCGCG; w normalnym DNA tworzy się b. rzadko. A B Z

  3. IZOLACJA CAŁkowitegoDNA Izolacja DNA z zastosowaniem fenolu i chloroformu; Izolacja z wysoleniem białek Izolacja poprzez związanie znośnikiem, odmycie zanieczyszczeń i uwolnienie DNA ( zestawy komercyjne – izolacja DNA na kolumienkach)

  4. ETAPY IZOLACJI DNA • Fizyczne zniszczenie struktury tkankowej i komórkowejmateriału biologicznego, tzw. homogenizacja. • Uwolnienie DNA - DNA chroniony jest w komórce w różnych błonowych strukturach subkomórkowych, takich jak np.: jądro, mitochondria. W celu degradacji błon komórkowych i białek, do buforów ekstrakcyjnych dodawane są różne detergenty. • Usunięcie zdegradowanych elementów komórkowych. • Oddzielenie DNA (wytrącanie) od związków użytych na wcześniejszych etapach izolacji, (detergentów, soli). • Przygotowanie DNA do przechowywania.

  5. IZOLACJA CAŁKOWITEGO RNA Metoda izolacji wg Chomczyńskiego i Sacchi (1987) ZASADA: Izotiocyjanian guanidyny należy do substancji najefektywniej denaturujących białka. Jest on także silnym inhibitorem rybonukleaz. Metoda ta opiera się na ekstrakcji izotiocyjaninem guanidyny i mieszaniną fenol/chloroform w środowisku kwasowym.

  6. Czystość preparatów DNA i RNA Czystość preparatów DNA i RNA można określić obliczając stosunek: A260/A280nm; Czysty DNA ma A260/A280 nm= 1.8; czysty RNA = 2.0; Wartość A260/A280 = 1.5 oznacza zanieczyszczenie białkiem w około 50 %.

  7. Elektroforeza w żelu agarozowym Polisacharyd oczyszczany z glonów morskich (krasnorostów); Agaroza Właściwości agarozy / żelu agarozowego: -transparentność –dobrze widoczne rozdzielane fragmenty - brak obecności DNaz /RNaz - niski punkt topnienia - wysoka wytrzymałość żelu - wysoka rozdzielczość produktów PCR oraz fragmentów DNA w zakresie 100 -10 000 pz( szeroki zakres stężeń) - bardzo niskie tło fluorescencji przy barwieniu bromkiem etydyny

More Related