1 / 55

Diagnosticul de laborator in infectii urinare si genitale

Diagnosticul de laborator in infectii urinare si genitale. Prof. Dr. Olga Mihaela Dorobat. Tractul urinar. Organ steril – exceptie uretra Rezista invaziei bacteriene Secretor mucoasa produce mediatori solubili-proteina Tamm-Horsfall adera la pilii bacteriilor/impiedica aderarea IgA

argyle
Download Presentation

Diagnosticul de laborator in infectii urinare si genitale

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Diagnosticul de laborator in infectii urinare si genitale Prof. Dr. Olga Mihaela Dorobat

  2. Tractul urinar Organ steril – exceptie uretra Rezista invaziei bacteriene • Secretor • mucoasa produce mediatori solubili-proteina Tamm-Horsfall adera la pilii bacteriilor/impiedica aderarea • IgA • Lactoferina restrictioneaza cantitatea de Fe • Lipocalin necesara bacteriilor • Peptide constitutive/ inductibile- actiune bactericida β defensive - produse de epiteliul renal α defensine – produse de leucocitein cursul inf. urinare cathlicidine – peptide antimicrobiene

  3. Raspuns imun celular • mediatori ai inflamatiei IL-6 si IL-8 • cu actiune chemotactica pentru neutrofile • Receptori prezenti la suprafata celulelor • TLR4 controleaza producerea de chemokine si citokine • TLR2 stimuleaza producerea de TNFα • TLR5 recunoaste flagelina bacteriana • TLR11 previne infectiile tract urinar Urina – lichide, dieta, medicatie Mediu bun de cultura Bacteriile –aerobe cresc bine anaerobe nu cresc vagin – cresc

  4. Bacteriile • Supravietuire • Crestere in urina • Aderare la mucoasa • Reziste la scurgereaurinii Tract urinar superior Steril- rata scurgerii 0.35ml/min Bacteriileadera – uroepiteliu, pietre Tract urinar inferior – Mediu static de cultura Mucusulinhibaaderarea Descuamarea IgA. IgG – inhibaaderarea

  5. Recoltare • Jet mijlociu - Recipient steril –Ø 5cm Instruire toaleta locala Moment –dimineata /3- 4h de la ultima mictiune Inaintea administrarii de antibiotice Nr.probe 1/zi 1-2 la barbat 2-3 la femeie F.subclinice • Punga sterila- nn, sugar • Punctie suprapubiana –nn, sugari, femei, suspiciune bacterrii anaerobe • Cateter – reduce riscul contaminarii probei bolnavi neooperanti…. • Cateter permanent - Nu din punga, cu seringa din sonda

  6. PRELUCRARE IMEDIATA max 2h • PASTRARE – 40C • Consevare – acid boric – 24 h la TC Urocultura Metoda ansei calibrate Calibrare anse 0,01ml Ø 5mm Din 0,1 ml 10 anse 0,001 ml Ø 2,5 mm100 anseDilutii - 0,1 din dil. 1/10 CLED ± gel sange

  7. Examen microscopic I Urina necentrifugata - camera de numarat • Nr.leucocite /μl sau mm3 • Nr.hematii /μl Piurie ≥ 10 leucocite/ mm3 10x106 leucocite/l * Centrifugare – se pierd 20 - 80% celule Frotiu colorat Gram – 0,001 ml Ø 2,5 mm 1 bacterie/camp >105 UFC/ml 1 leucocit/camp Piurie *European Urinalysis Guidelines

  8. Examen microscopic II • Celule epteliale –scuamoase –marker –tehnica recoltare necoprespunzatoare • Exceptie – gravide- crescuta exfolierea celulelor epiteliale • Celule epiteliale mici rotunde • Celule urotheliale • Celule epiteliu tubular renal greu de deosebit indica leziune renala

  9. Citire - interpretare • Limita – bacteriurie semnificativa se bazeaza: • Simptome clinice • Specie bacteriana • Numarul de specii izolate • Metoda de recoltare • Sex • Infectii tract urinar necomplicate majoritatea o specie Flora normal din uretra/org.genitale - contaminanti

  10. Interpretarea cantitativa a cresterii

  11. Citire - interpretare • > o specie- interpretarea conditionata: • Daca o specie este dominanta • Cum a fost recoltata - jet mijlociu / cateter cronic • Prezenta de leucocite / celule epiteliale • Simptome clinice • Istoric • Infectie adevarata cu 2-3 specii poate aparea • A se repeta - purtători sondă • Trei sau > specii - de obicei se raporteaza “cultura mixta”

  12. Citire - interpretare • Interpretare Kass 1957 - 95% femei cu pieleonefrita ≥ 105 UFC/ml Pozitiv specificitate > sensibilitate < • Femei - Infectii acute simptomatice -o singura specie >102 –104 UFC/ml + piurie + răspuns terapeutic ≥ 103 UFC/ml specificitate > sensibilitate > <105 UFC/ml – farasimptome obisnuit contaminare • Barbaţi ≥ 104 UFC/ml > sensibilitatea fără sa < specificitatea Infectii acute necomplicate Infecţii complicate ≥105 UFC/ml

  13. Citire - interpretare Pielonefrita – 80% ≥ 105 UFC/ml 10-15% 104 - 105UFC/ml Bacteriurie asimptomatica 2 probe ≥ 105 UFC/ml Levuri < 103 UFC/ ml C.albicans* 104 UFC/ml Stafilococi* – 5.104UFC/ml Identificare / antibiograma – clasic/ automat Rezultat 48h / 24h Neconcordanta frotiu/cultura –incubare -48h *Buiuc D, Negut M- Tratat de microbiologieclinica –ed II

  14. Cauze posibile pentru o concentratie scazuta de bacterii* • Stadiul initial al infectiei • Diureza mare • Simptome urgente (timp scurt de incubatie in vezica) • Prezenta antibioticelor in urina • pH-ul scazut al urinii • Crestere bacteriana inceata • Proba contaminata *European Urinalysis Guidelines

  15. METODE ALTERNATIVE I Sistemul Dipslide • 2 medii CLED /Mac Conkey……. • Sensibilitate 92-95,5%, specificitate 97,2-100% • Corespunzator pentru ID Gram negativi E.coli • Probleme legate de ID • Enterococi, stafilococi – S.saprophyticus • Unele sp.Pseudomonas nu cresc • Probleme legate de cantitate • Inoculul nu este reproductibil • Numaratoarea nu este sigura • La concentratii mari crestere conflenta – necesita subcultivare

  16. METODE ALTERNATIVE II Medii cromogene – rezultat la 24 h-identificare Enterococcus E.coli P.mirabilis

  17. METODE ALTERNATIVE III Multistix– 8 parametri – • Leucocite – activ. esterazică -decelare >10 leucocite/ml • Nitraţi – maj. patogeni reduc nitraţii – nitriţi 106UFC/ml Neg. - streptococi, enterococi Impreună – sensibilitate 79% Specificitate Leucocite 87%, Nitrati 100% Proteine Sange Glucoza Corpi cetonici pH Densitate 2 min – citire pe urina proaspat emisă

  18. METODE ALTERNATIVE IV • Reactia catalazei – 2ml urină + 4 pic. H2O2 10% 2 min. Bule gaz + reactie pozitivă • Bioluminiscenţa – adenosin trifosfatul – sensibilitatea 93%, specificitatea 78% Test screening Fals neg. Stafilococi, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas • Metode automate Flowcitometrie

  19. Erori in efectuarea uroculturii I • Recoltarea din primul jet de urina • Recoltare la < 4h de la utima mictiune • Recoltarea in recipiente nesterile • Trimiterea unei probe din toata cantitatea de urina • Pastrarea > 2 h la TC pana la prelucrare • Utilizarea de medii lichide • Utilizarea urinii centrifugate pentru insamantare • Folosirea de anse cu calibru neverificat • Culturi de rutina pentru bacterii anaerobe

  20. Erori in efectuarea uroculturii II • Utilizarea de sisteme miniaturizate cu suprafete mici de medii gelozate care nu permit obtinerea unui numar suficient de colonii • Efectuarea sistematica a antibiogramelor din direct din urina • Neincubarea placilor necrescute la 24h timp de 48h in conditiile in care s-au observat bacterii / leucocite la ex.microscopic direct • Necorelarea nr/ml si a felului bacteriilor cu starea clinica a bolnavului

  21. PIELONEFRITA Debut - bruscFebră 39-400C oscilantă FrisoaneDurerelombară Simptomemictionale - arsuri pot lipsidisurie polakiurie FemeiPersoane in vârstăBărbati- uzual initial prostatita Obstructii –litiaza, apoi inf. urinarăGg, tumori - compresiuni Aderente, stricturiureter, Reflux vezico-uretral Ex. Urina – leucocite – piurie – nu intotdeauna Lipsa – indiciulocalizare –bazinet Faraatingereparenhim renal Ex.gravide - bacterii – E.coli, Proteus, Klebsiella Complemantar – Hemocultura –pozitiva Nr.leucocite >, VSH >, Uree, Creatinina

  22. Infecţii urinare joase CISTITE Urgenţa, frecvenţa Femei în perioada de activ. sexuală Polakiurie 10-20 % cel puţin odată / viaţă Disurie 5 % inf recidivante < 21 zile Dureri suprapubiene aceeaşi bacterie cistalgia reinfecţie > 21 zile Febra – absenta bacterii diferite Diagnostic diferential – inf ginecologice inf digestive

  23. Infecţiiurinarejoase CISTITE • Patogenie • Contaminare din apropiere – intestin, genital • Incapacitatea de a goli complet vezica • Ex. urinii –indispensabil – • leucocite ≥ 10 / mm3 • bacterii ≥ 105 UFC /ml........... ≥ 103 UFC /ml E.coliS.saprophyticus Streptococ B Enterococcus • Supraveghere – La 2 zile de la oprire tratament 2 - 4 săptămâni pt. depistare recidive

  24. Infecţia urinară la gravide Factorifavorizanţicompresiecăiurinaredilatareuretereimunodepresieoarecare Frecventă 5-10 % Nu este banală/ benignă Multeasimptomatice Polakiuriaconfundă Durereasuprapubianăsarcina Risc – copil– n. prematură, hipotrofiefetala inf. neonatale(meningita, sepsis) mama - pieleonefrită

  25. Infecţiaurinară la gravide • Inf. urinară bine tolerată 6-7 luni - neglijata brusc – tablougrav- 8-9 lună nastere – fat mort mama – soc septic Necesaradepistaresistematică • Febra - Ex. urină - Hemocultură

  26. Infecţia urinara la copil 0,2% .........5,8% spitalizaţi 0-2 luni (nn) – urmare tulburarilor digestive, fără febră – primele 10 zile > baieţi – malformaţii, megaureter, sindrom de jonctiune, diverticul vezical 2 luni - 6 ani – frecventa > predominant fete febra 50%, tulburari digestive 25% enuresis, falsa albuminurie

  27. Infecţia urinară la purtatori de sondă permanentă Infecţia – 8% - I zi Schimbare – 2 luni – 17% - II zieroziuni 75% - III zi bacteriemie100% - IV zi febra - soc Pentru retenţie acută de urină –sonda nu > 48 h Ex. urină – febra - cu o săptămână inaintea schimbării

  28. Infecţia urinară la persoanele in varstă 10 – 20 % Factori favorizanţi Femei – cistocel,diabet, tulburari neurologice reziduu Barbati - adenom prostată,scleroza col vezical vezical Intervenţii chirurgicale Adenocarcinom Polipi vezicali Ureterotomie Extirpare calculi

  29. Vezica neurologică Malformaţii congenitale – spina bifida Tumori Accidente – secţiune medulară Reziduu vezical asociat Reflux vezico-uretral Favorizează infecţia urinară  Pseudomonas Proteus Insuficienţă renală Pielonefrită E.coli

  30. Izolare patogeni specifici • Mycobacterium tuberculosis • Recoltare -3 zile - 50ml • Centrifugare 15min. 13000g*- Tratare -idem sputa • Frotiu Ziehl-Neelsen - Cultivare -Lowenstein • Salmonella typhi • Jet mijlociu 20ml - centrifugare 3000g 30 min • Insamantare selenit - trecere Mac Conkey, SS.. • Leptospira • Jet mijlociu 20ml - centrifugare 3000g 30 min • Insamantare Korthof cu 200-400 μg/ml fluorouracil/ml – 300C – 30 zile *Buiuc D, Negut M - Tratat de microbiologie clinica –ed II

  31. Secretia uretralaRecoltare –prelucrare ♂ • La ≥ 2h după micţiune • Scurgere spontana -tampon • Fara - se inseră tampon fin alginat/ dacron –2-4 cm • se roteşte, se lasă câteva sec., se retrage • Pentru Trichomonas – inainte de prima mictiune • se imerseaza in 1ml sol salina izotona 370C • examinare rapida • Pentru ex.microscopic • efectuarea frotiurilor si fixare imediat dupa recoltare

  32. Secretia uretralaRecoltare –prelucrare ♂ • N.gonorrhoeae • insamantare imediata pe placa –mediu la 370C • mediu transport Stuart /Amies • Chlamydia trachomatis • mediu conservant SPG sau 2SP -2ml • Congelare -700C •  Micoplasme • Bulion tripticaz soia 2ml – 40C zile, -700C ani • Urina matinala primii 10ml, 100ml WC, 10ml • Diferentiere uretrita/cistita

  33. Secretia uretralaExaminare microscopica • Frotiu Gram • Normal – flora mixta, levuri extracelular • Coci Gram negativi intracelular – N.gonorrhoeae • Frotiu Giemsa • Incluzii Chlamydia trachomatis • Preparat proaspat – I proba • Trichomonas Geloza chocolat, mediu Thayer Martin - N.gonorrhoeae Incubare atm 5% CO2 ID Testare sensibilitate Cultivare

  34. Secretia uretralaProbe urina • Examen macroscopic Filamente mucus –in prima proba sugereaza • Examen microscopic Centrifugare 300g – 5 min Sediment –lama/lamela X400 Leucocite ≥15/camp in prima proba indica

  35. Diagnostic • Chlamydia trachomatis • Cultivare • ELISA • imnunofluorescenta • Tehnici moleculare • Mycoplasma/ Ureaplasma • Seturi comerciale izolare/ identificare (cantitativa) • Serologie • Mycoplasma genitalium • Evidentierea ADN-ului -urina

  36. Studiu 2007 SUA tineri • Mycoplasma genitalium depaseste prevalenta gonoreei – devine a 3-a cauza BTS • 4,2% Chlamydia • 2.3% Trichomonas • 1,0 % M. genitalium • 0.4 % N. gonorrhoeae Boskey E,  About.com Guide Updated May 24, 2009

  37. Prostatite Probe - dimineata • Primii 5-10 ml urina • Urina din jetulmijlociu • Secretieprostatadupamasaj • Primul jet dupamasajprostata Examencitobacteriologic Cuantificareabacteriilor – gelozasange + Mac Conkey Prostatitabacteriana– nr.bacterii 10X in proba 3 si 4 ≥ 10 leucocite/camp -marire x400

  38. Prostatite • Tuseu rectal orientează • Agenti etiologici E.coli 10-20 % Alte enterobacterii – Proteus, Enterococcus Klebsiella S.aureus discutabil – U. urealyticum S. saprophyticusC. trachomatis

  39. EPIDIDIMITE • Clinic • tumefiere dureroasa-unulaterala- scrot • Scurgere uretrala • Iritatie tract urinar • Diagnostic – examinare • Prelevat de electie – cultura din ureter • Prima urina si jet mijlociu • Aspirat din epididim sau testicol dupa dezinfectia pielii cu dezinfectant chirurgical • Agenti etiologici • C.trachomatis N.gonorrhoeae • Enterobacteriaceae , Pseudomonas > 35 ani • M.tuberculosis

  40. ORHITE • Adeseori virale - V.urlian,Coxsakie B, • Prelevate intraoperatoriu • Examinare • Microscopica • Cultivare bacterii aerobe • Agenti etiologici • E coli K.pneumoniae P.aeruginosa • Stafilococi Streptococi

  41. Tract genital feminin Superior – steril bacteriologic Inferior – contaminat cu flora –piele / tract digestiv • Variaţii Vagin/ cervix Vârsta Ciclul Graviditate Imunodepresie Flora influenţată de estrogeni • Nou-nascut –6 săpt- estrogeni de la mamă – lactobacili • Pană la pubertate-floră de pe piele - Stafilococi cg. neg, difteromorfi, bacterii / fecale - E.coli • Dupa pubertate – predomina lactobacilii • Menopauza- lacobacili <, nr.mare enterobacterii

  42. Femeia adulta • In absenta infectiei 106-109 bacterii/gram secretie vaginala Frecventa izolarii speciilor Portaj obisnuit Portaj frecvent Portaj exceptional

  43. Vaginite- vaginoze Recoltare secretie • 3 tampoane fund de sac vaginal posterior Prelucrare • Tampon 1- in 0,5 ml solutie salina isotona 370C • Examinare lama/lamela x100 x400 • Trichomonas, levuri inmugurite, pseudofilamente • Raportul PNM/ celule epiteliale • Reactie inflamatorie • Intensa - Trichomonas • Discreta – Candidoza • Absenta- vaginoza • Tampon 2 – Frotiu Gram

  44. Interpretarea frotiu Gram pentru vaginoza bacteriana Numar bacterii/camp microscopic imersie Nugent modificat 4+ = >30 3+ = 6 -12 Interpretare SCOR 2+ = 1 – 5 0 – 3 Flora normala 1+ = <1 4 – 7 Flora modificata 0 = 0 7 -9 Vaginoza bacteriana

  45. Vaginite- vaginoze • Tampon 3 • Cultivare pentru Candida- Sabouraud cu cloramfenicol sau mediu cromogen • La solicitare cultura pentru • N.gonorrhoeae • S.aureus- in sindromul socului toxic • evidentierea toxinei –ELISA, reverse pasive latex agglutination • Streptococcus pyogenes • Streptococcus agalactiae • Listeria monocytogenes • Shigella spp.- fetite • Enterobacteriile nu se comunica- fac parte din flora normala a vaginului

  46. Caractere diagnostice pentru vaginite si vaginoza Testul Whiff= testulaminelor volatile 10% KOH

  47. Vulva Recoltare-durere, eritem, edem • Curatirea cu sol. 0.85% NaCl • Exsudat/ eritem cu tampon –pentru culturi levuri • Vezicule – • Rupte –colectare lichid cu tampon • Aspirat cu seriga cu ac 26-27gauge • Cruste – se indeparteaza • Tampon umezit sol. 0.85% NaCl • Examinare • Microscopica – Trichomonas Gram- reactie inflamatorie, bacterii • Cultivare – pentru S.aureus, S.pyogenes ……..

  48. Streptococ grup B • Evidentiere la gravide s 35-37 gestatie • Recoltare - tampon vaginal • Metoda de electie • Bulion LIM (Todd Hewitt) • colistin 10μg/ml, ac nalidixic 25 μg/ml • Bulion Trans Vag • Trecere pe geloza sange • Latex aglutinare • Insamantare directa mediu Granada • 20-60% dintre pozitivi • Necesita atm. anaeroba

  49. Streptococ grup B Dificultati • Inhibitia cresterii in prezenta Enterococcus –LIM • 2% nu produc hemoliza • 3-4% nu produc pigment • Clasic rezultatul 48 ore Metode moleculare • AccuProbe • Cepheid Real time PCR

More Related