1 / 16

קביעת רצף של חומצות אמיניות בחלבון

קביעת רצף של חומצות אמיניות בחלבון. 1. קביעת קבוצות קצה 2. Fragmentation = שבירה למקטעי פפטידים 3. שימוש בשיטת אדמן ל פירוק מלא של מקטעי פפטידים וקביעת רצף של פפטיד קצר 4. בנייה מחודשת של החלבון באמצעות חפיפת מקטעים. קביעת קבוצת קצה באמצעות דנסיל-כלוריד. identification of N-terminus.

avon
Download Presentation

קביעת רצף של חומצות אמיניות בחלבון

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. קביעת רצף של חומצותאמיניות בחלבון 1. קביעת קבוצות קצה 2. Fragmentation = שבירה למקטעיפפטידים 3. שימוש בשיטת אדמן לפירוק מלא של מקטעיפפטידים וקביעת רצף שלפפטידקצר 4. בנייה מחודשת של החלבון באמצעות חפיפת מקטעים

  2. קביעת קבוצת קצה באמצעותדנסיל-כלוריד identification of N-terminus זיהוי קצה N dansyl chloride dabsyl chloride שניהריאגנטים הנ”ל מגיבים באופן ספציפי עם קבוצת אלפאאמינוומסמנים את הקצה בצבעיםפלורוסצנטים

  3. identification of N-terminus זיהוי קבוצת קצה N באמצעות DNFB (ריאגנטסנגר ע”ש החוקר שהשתמש בו לראשונה למטרה זו) DNFB , פלואורו-דיניטרובנזן מגיב עם קבוצות אלפא אמינו בלבד ומקנה לתוצר צבע צהוב.

  4. דוגמה נוספת לסימון קבוצת קצה N fluorescent labeling of proteins fluorescamine

  5. Edman degradation פירוק אדמן - סכמה כללית peptide labeling cleavage another cycle

  6. סימון קצה N Edman degradation פירוק אדמן - סכמה כללית peptide Labeling סימון cleavage another cycle

  7. חומצה מהולה והקשרהפפטידיהראשון נשבר Edman degradation פירוק אדמן - סכמה כללית peptide labeling סימון Cleavage חיתוך another cycle

  8. בידודהפפטידשנשאר ושוב סימון הקצה Edman degradation פירוק אדמן - סכמה כללית peptide labeling cleavage another cycle - סיבוב נוסף

  9. …ושוב הידרוליזה חלשה של הקשר פירוק אדמן - סכמה כללית peptide labeling cleavage another cycle

  10. Edman degradation פירוק אדמן - נוסחאות ותגובות + phenylisothiocyanate peptide N-terminus

  11. Edman degradation פירוק אדמן - נוסחאות ותגובות + phenylisothiocyanate peptide N-terminus coupling step PITC coupled to peptide

  12. Edman degradation פירוק אדמן - נוסחאות ותגובות PITC coupled to peptide cleavage step + amino acid derivative new N-terminus

  13. Edman degradation פירוק אדמן - נוסחאות ותגובות amino acid derivative rearrangement phenylthiohydantoin (PTH) derivative of R1

  14. חקר המבנה הראשוני - בעיות לתרגול ביוכימאי השתמש באנזיםכימוטריפסיןלפירוקאוקטאפפטיד התקבלו שניהפפטידיםהבאים: Gly-Trp Arg-Thr Lys-Ser-Glu-Phe א. הציעו דרך אפשרית להפרדה בין שני המקטעים ונמקו אותה. ב. על סמך תוצאות אלה מהו הרצף שלהפפטיד? השתמשו בכלי המצגת לבנייתהפפטיד המשוער. ג. נמקו תשובתכם.

  15. חקר המבנה הראשוני - בעיות לתרגול בכדי לבסס את השערתוהביוכימאיהשתמשבטריפסיןלפירוק אותופפטיד. התקבלו שלושת המקטעים. הבאים: Ser-Glu-Phe-Gly-Trp-Arg Thr Lys א. הציעו דרך להפרדה בין המקטעים ונמקו. ב. האם תוצאות אלה תומכות בממצאים הקודמים? נמקו.

  16. 1. הורמוןפפטידי קטן כולל את החומצות האמיניותAla , Asp, Met, Arg, ו- Tyr . 2. הכמותהמולרית שלAlaהינה בערך פי שתיים מהכמות של כל אחת מהחומצותהאחרות. 3. המשקל המולקולרי של הפפטיד מוערך בתחום 600 - 800 גרם/מול. 4. לאחר טיפול בריאגנט סנגר והידרוליזה חומצית, התקבלDNP-Ala . 5. לאחר טיפול בקרבוקסיפפטידאז A(אנזים החותך קשרים פפטידים מצדCשלהפפטיד), במשך תקופה קצרה, התקבלוMet ו- Alaביחס מולרי של שלוש לאחד (על כל 3 מתיונין התקבלו 1 אלאנין).6. לאחר עיכול עם כימוטריפסין, התקבלו שני פפטידים קטניםAו- B. 7. באלקטרופורזה ב- pH 6.6 פפטידAנע לקראת הקתודה ואילוBנע לאנודה, בערך במרחקים דומים. 8. על סמך הבליעה שלו ב- nm 280 ניתן להסיק ש- AמכילTyr .א. מהו רצף שיירי החומצות האמיניות בפפטיד המקורי?ב. הציעו בדיקות נוספות (אין להציע את שיטת אדמן) שיוכלו לאשר את מסקנותיכם, תוך ציון התוצאות הצפויות. חקר המבנה הראשוני - בעיות לתרגול

More Related