PEI 和 PEG 对细胞毒害作用的探究

1. PEI和PEG对细胞毒害作用的探究 展示者：李苏 3070701016 同组成员：王诗豪 3070701056

2. 实验目的和要求 MTT法测定聚乙烯亚胺（PEI）的细胞毒性 MTT法测定PEG的细胞毒性

3. “细胞毒性” 在学术文献中的定义 根据欧洲标准化组织CEN1992年30号文件的定义,细胞毒性是指由产品、材料及其浸渍物所造成的细胞死亡、细胞溶解和细胞生长抑制。

4. 实验原理 进入机体 外来化学物质 小剂量对机体影响甚微 大剂量造成机体严重后果，甚至导致死亡

5. 细胞内线粒体酶作用 甲臜 DMSO 溴化噻唑蓝四氮唑 MTT 570nm测定吸光度 吸光度值与细胞数量呈正相关

6. 细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法： MTT、XTT（一种线粒体脱氢酶的作用底物）法： 利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测。 LDH（乳酸脱氢酶）的方法： 通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性。 其它酶方法： 如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等。

7. 实验步骤 1、细胞接种，将293T细胞接种到96孔板上，每孔约5000个细胞。 2、细胞培养，将培养板放入CO2孵箱，在37℃、5% CO2及饱和湿度条件下，培养至实验所需的细胞数量（一般为16小时）。 3、吸去培养液，用PBS清洗细胞，加入无血清培养液，在细胞孔中分别加入PEI溶液和PEG溶液，加入PEI的试样使得每孔中PEI的浓度分别为0，5，10，25，50，100，200µg/mL ，加入PEG的试样使得每孔中PEG的浓度分别为0，0.16，0.8，4，20，100，500mg/mL，每孔液体的总体积在200µL。（注意每种浓度都为三复孔，并要有不加任何PEI的对照孔至少3孔） 4、分别孵育0.5，1，2，3小时。

8. 5、吸去培养液，每孔加入90 l 无血清培养液和10 l的5mg/mL MTT溶液，37℃孵育2－3小时。 6、翻板法弃去液体，每孔加入100 l DMSO，在震荡器上震荡10分钟。 7、在酶标仪上570nm波长测OD值。 8、统计数据。

9. 实验结果

15. 心得、体会 1 在这个实验中，针对不同时间梯度要注意控制不同的时间，以达到实验预期。 2 实验中一定要设置空白对照。 3 本实验的主要目的一是熟练原来曾经学过的操作，二是对于科学研究有一个初步的认识。对于科学研究有一个较为明了的认识。