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《 生物化学实验 》

《 生物化学实验 》. 课程简介 生物化学课程是一门与生物技术相关的专业基础必修课，本实验课程是附属于该课程的一个教学环节，开设操作性、验证性、综合性等实验项目，实验内容主要进行生物分子（蛋白质、核酸、糖、维生素）的定性、定量测定和分离提取制备，学习酶活性和维生素的测定方法等实验，涉及了生物化学的基本实验技术及典型仪器设备。通过实验有助于学生加深对生物化学的基本知识和基本理论的理解，掌握生物化学的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术。. 目 录. 实验一 氨基酸的分离鉴定 —— 纸层析法 ( 操作性 ) 4 学时

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《 生物化学实验 》

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  1. 《生物化学实验》

  2. 课程简介 生物化学课程是一门与生物技术相关的专业基础必修课，本实验课程是附属于该课程的一个教学环节，开设操作性、验证性、综合性等实验项目，实验内容主要进行生物分子（蛋白质、核酸、糖、维生素）的定性、定量测定和分离提取制备，学习酶活性和维生素的测定方法等实验，涉及了生物化学的基本实验技术及典型仪器设备。通过实验有助于学生加深对生物化学的基本知识和基本理论的理解，掌握生物化学的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术。

  3. 目 录 • 实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法(操作性) 4学时 • 实验二 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度(操作性) 3学时 • 实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳(验证性) 5学时 • 实验四 动物肝肝脏DNA的分离与鉴定(操作性) 3学时 • 实验五 血液中葡萄糖的测定(操作性) 3学时 • 实验六 血清中总胆固醇的测定(操作性) 4学时 • 实验七 唾液淀粉酶活性的观察(综合性) 4学时 • 实验八 维生素C的定量测定(操作性) 4学时 • 实验九 脂肪酸的β-氧化 (操作性)4学时

  4. 实验十 琼脂糖胶电泳法分离乳酸脱氢同工酶 (操作性)4学时 • 实验十一 酪蛋白的制备 (操作性)4学时 • 实验十二 肝脏谷丙转氨酶活力测定 (综合性)3学时

  5. 实验一氨基酸的分离鉴定——纸层析法 【实验目的】 1.掌握纸上层析的一般原理和操作方法。 2.了解氨基酸的特征性颜色反应。 3.学会分析未知样品的氨基酸成分。 【实验原理】 纸上层析法是分配层析法中的一种，常以滤纸为惰性支持物。纸上层析法是分离、鉴定和定量测定氨基酸、糖类、抗生素等有机物质的一项重要而简便的分析方法。所用设备简单、操作方便，使用样品少，分离效果好，为近

  6. 代生物化学分析中重要技术之一。此法广泛地应用于科研和生产分析工作中。代生物化学分析中重要技术之一。此法广泛地应用于科研和生产分析工作中。 纸上层析的原理：常以水和有机溶剂作为展层剂；水和有机溶剂互溶后形成两个相：一个是饱和了有机溶剂后的水相，一个是饱和了水后的有机溶剂相。由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和力，而与有机溶剂的亲和力相对较弱，因此我们认为水相为固定相，有机溶剂相为移动相。由于物质的极性大小不同，在两相中分配比例有所差异。极性小的物质在有机相中分配较多，随有机相移动较快；而极性大的物质在水相中分配较多，移动相对较慢，从而将极性不同的物质分开。一般来说，在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf

  7. 值。 Rf值的定义为： Rf =(原点到层析斑点中心的距离)/（原点到溶剂前沿的距离） 用纸层析鉴定样品时，一般都与标准品相比较。若没有标准品，可选择文献记载的该物质层析条件，根据文献Rf值进行鉴定。 【实验试剂与器材】 1、溶剂系统 （1）碱相溶剂：正丁醇:12%氨水:95%乙醇＝13:3:3（体积比）

  8. （2）酸相溶剂：正丁醇:80%甲酸:水＝15:3:2（体积比）（2）酸相溶剂：正丁醇:80%甲酸:水＝15:3:2（体积比） 2、显色贮备液：0.1%水合茚三酮丙酮溶液 3、V（0.1%硫酸铜）:V（75%乙醇）=2:38溶液。 4、混合氨基酸溶液6mg/ml。 5、滤纸。 6、烧杯10ml（×1）。 7、剪刀。 8、层析缸（×2）。 9、微量注射器10μl （×1）或毛细管。 10、电吹风（×1）。 11、722型（或7220型）分光光度计。

  9. 【实验步骤】 1．纸的处理 取18 cm长、18 cm宽的滤纸一张，离底边2 cm处用铅笔轻轻划一条与底边平行的线，并等距离的在线上定点样点(原点)划圈，使圈的直径小于0.5 cm。 2．点样 在每个圈下用铅笔记上每种氨基酸的代号（混合样可写M），然后用毛细管吸取样品，轻轻地点到相应的氨基酸圈内，待晾干或用冷风吹干后再点1次。每个样品共点2次。 3．层析 将点好样的滤纸纵向卷起来，点样面向里，点样点

  10. 位于一端，用针线缝成筒状，不要使滤纸两边接触(见图1)。位于一端，用针线缝成筒状，不要使滤纸两边接触(见图1)。 将培养皿中放入2／3量的展层剂，放入层析缸中，然后将滤纸直立于层析缸的培养皿中，样品端向下垂直放置，切勿使展层剂浸到样品点，开始层析。 当溶剂前沿到达离上端2 cm处，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿，晾干。 图1 滤纸的缝合

  11. 4．显色 用喷雾器向滤纸上均匀喷洒0.1%茚三酮，晾干后，将滤纸放入烘箱中(80-100℃)，烘烤5分钟后，滤纸上即显出紫红色的氨基酸斑点。用铅笔描出斑点轮廓(见图2)。 图2.层析谱1．原点；2．层析点；3．溶剂前沿

  12. 5 ．计算 用尺量出原点到斑点中心距离以及原点到溶剂前沿距离，计算各标准氨基酸和混合氨基酸的Rf值。 【注意事项】 (1)在整个操作过程中，手只能接触滤纸边缘，否则手指上的氨基酸会造成滤纸上众多斑点。 (2)在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。 (3)展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。 (4) 点样斑点不能太大（其直径应小于0.5cm），防止氨基酸斑点重复；吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。 (5)根据目的、要求，选择合适溶剂系统。

  13. 实验二 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 【实验目的】 学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方法。 【实验原理】 考马斯亮蓝测定蛋白质含量是利用蛋白质--染料结合法的原理，定量测定微量蛋白质浓度快速、灵敏的方法。 考马斯亮蓝G-250存在着两种不同样色形式，红色-棕黑色和蓝色。染料与蛋白质结合后有红色-棕黑色和蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，测定595 nm吸光的增加量，可以测定与其结合的蛋白质的量。

  14. 蛋白质与染料结合速度很快，2min就可以反应完全，并可以稳定1h，蛋白质-染料复合物有很大的消光系数，使得测定蛋白质浓度是灵敏度很高。测定范围为10-100μg蛋白质，微量测定时达到1-10μg蛋白质。此反应反复性好精度高，线性关系好。蛋白质与染料结合速度很快，2min就可以反应完全，并可以稳定1h，蛋白质-染料复合物有很大的消光系数，使得测定蛋白质浓度是灵敏度很高。测定范围为10-100μg蛋白质，微量测定时达到1-10μg蛋白质。此反应反复性好精度高，线性关系好。 【实验试剂与器材】 1、标准蛋白液（0.1mg/ml）0.2g结晶牛血清白蛋白用 0.9%NaCl 稀释到2000ml。 2、0.9%NaCl 3、考马斯亮蓝试剂：100mg考马斯亮蓝G250溶于50ml 5%乙醇中，加100ml85%磷酸，蒸馏水稀释 1000ml，滤纸过滤。 4、待测蛋白：人血清，用前用0.9%NaCl稀释200倍。

  15. 5、漩涡混合器 6、移液管0.5ml（×2），1.0ml（×2），5ml（×1） 7、分光光度计 8、试管1.5cm×15cm (×8) 9、量筒100ml(×1) 10、电子分析天平 11、试管架(×1) 【实验步骤】 一、标准曲线线的绘制 取7支干净试管，按下表进行编号并加入试剂。以A595为纵坐标，标准蛋白质年浓度为横坐标，绘制标准曲线。

  16. 二、未知样液的测定 另取一干净试管，加入样品1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处比色，读取吸光度。在标准曲线上查找蛋白质浓度。 【注意事项】 1、如果测定的要求很严格，可以在试剂加入5-20min内测 定吸光度，在这段时间内样色很稳定。 2、测定中，蛋白质-染料复合物会吸附在比色皿上，实验 证明可以忽视。测定完后可以用乙醇洗干净。

  17. 【思考题】 1、根据一下要求选择一种或者几种蛋白质定量测定蛋白 质浓度。 （1）样品不容易溶解，但要求结果很准确。 （2）要求在半天内测定60个样品。 （3）要求很迅速的测定一系列试管（30只）中溶液的蛋 白质浓度 2、试着比较该法与其他几种方法的优缺点。

  18. 实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 【实验目的】 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和操作过程。 【实验原理】 血清中各种蛋白质的等电点不同，在pH8.6的巴比妥缓冲液中，各种蛋白质所带的净电荷量不相等，加上蛋白质分子大小不相同，在电场中移动的速度就不等，例如，白蛋白等电点比其他蛋白质低，在pH8.6时带的负电荷比其他蛋白质多，加上白蛋白的分子较小，因此在电场中比其他蛋白质移动速度快。这样，血清蛋白质在醋酸纤维素薄膜上就可以形成区带，用以分离和分析蛋白质。

  19. 【实验试剂与器材】 （一）仪器 1、电泳仪； 2、电泳槽； 3、恒温水浴箱； 4、721型分光光度计 （二）材料 1、人血清或鸡血清 2、醋酸纤维素薄膜 （三）试剂 1、0.05 mol/L巴比妥钠-HCL缓冲液（pH8.6）：取巴比妥钠10.3 g，加蒸馏水约800 ml溶解后，加入lmol/L

  20. HCL 9.55 ml，补加蒸馏水至 1000 ml，测试其 pH应 为 8.6。 2 、染色液：取氨基黑 10B 1.0 g，磺基水杨酸 10 g，加冰 醋酸20ml，蒸馏水 400ml，摇匀溶解。 3、漂洗液：2.5％醋酸 4、洗脱液：0.02 mol/L NaOH溶液 5、透明液：无水乙醇7份，冰醋酸3份混合即成。

  21. 【实验步骤】 1．薄膜准备 2．点样 3．电泳

  22. + α2 β γ 白蛋白(A) 4．染色和漂洗 5．薄膜和透明 6．定量 （1）洗脱法 注意！白蛋白因加入NaOH的量比其他管多，其光密度值应乘以稀释倍数，得到数值再代入上式中计算。 α1

  23. （2）光密度计法 （3）用本法定量，正常人数值为： 白蛋白 54.0 % ~ 73.0 % 540 ~ 730 g/L α1球蛋白 2.8 % ~ 5.1 % 28 ~ 51 g/L α2球蛋白 6.3% ~ 10.6 % 63 ~ 106 g/L β球蛋白 5.2 % ~11.0 % 52 ~ 110 g/L γ球蛋白 12.5 % ~ 20.0 % 125 ~ 200 g/L

  24. 【注意事项】 1．醋酸纤维素薄膜的质量对结果影响很大，最好选用同一批号、薄膜厚度均匀、质量良好的醋酸纤维素薄膜。 2．血清或其他电泳样品应新鲜。 3．点样应细窄、均匀、集中。点样量不宜过多，点样位置要合适。 4．盐桥要放置平整，保证电场均匀。 5．电泳槽盖应密封，盖内空间不宜过大。 6．较低温度下电泳一般能获得较好的图谱，故室温不宜过高。 7．选择合适的缓冲液离子强度。

  25. 8．两电泳槽内缓冲液面应在同一水平。 9．要控制好电流，电压和电泳时间。 10．电泳槽内缓冲液可以多次使用。但操作时应尽量减少缓冲液的污染、水分蒸发、pH及离子强度的改变，并应防止霉菌的滋长。 11．染色、漂洗及洗脱时间要控制好，才能获得重复性良好的定量结果。 【思考题】 1. 电泳后，泳动在最前面的为何种蛋白质？分析原因。 2. 点样时，置于电场的正极还是负极，为什么？

  26. 实验四 动物肝肝脏DNA的分离与鉴定 【实验目的】 学习常用的DNA分离方法 。 【实验原理】 在浓氯化钠(1-2mol/L)溶液中，脱氧核糖蛋白的溶解度很大，核糖蛋白的溶解很小。在稀氯化钠 (0.14mol/L)溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白 从样品中分别抽提出来。     将抽提的核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理，

  27. DNA(或RNA)即与蛋白质分开，可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。向溶液 中加入适量乙醇，DNA即析出。      为了防止DNA(或RNA)酶解，提取时加入EDTA(乙二胺四乙酸）。 【实验试剂与器材】 1．5mol/LNaCl溶液：将292.3g NaCl溶于水，稀释至 1000ml。 2． 0.14mol／ＬNaCl-0.15mol／ＬEDTA-Na溶液： 溶 8.18gNaCl及37.2gEDTA－Na于蒸馏水，稀释至 1000ml。

  28. 3．25％SDS溶液：溶25g十二烷基硫酸钠于100ml 45％乙醇。 ４．0.015mol/LNaCl-0.0015mol／Ｌ柠檬酸三钠溶液,氯化 钠0.828g及柠檬酸三钠0.341g溶于蒸馏水,稀释至 1,000ml。 5 ．氯仿-异戊醇混合液:氯仿:异戊醇=24:1(V/V)。 6 ． 1.5mol/LNaCl-0．15mol／Ｌ柠檬酸三钠溶液:   氯化 钠82.8g及柠檬酸三钠34.1g溶于蒸馏水,稀释至 1,000ml。 7 ． 3mol/L乙酸钠-0.001mol／ＬEDTA-Na溶液：称取 乙 酸钠408g、EDTA-Na0.372g溶于蒸馏水,稀释至 1,000ml。 8 ．70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇。

  29. 9 ． 二苯胺试剂。 10 ． 1mol／Ｌ过氯酸溶液，将10ml过氯酸(70%)用蒸馏 水稀释至11ml。 11 ．实验材料与仪器  大白鼠肝脏、匀浆器、离心机5000r/min、量筒 50ml(×1)、25ml(×1)、10ml(×1)、吸管 5ml(×2)、水浴锅、真空干燥器。

  30. 【实验步骤】 1．  DNA的分离纯化：    （1）将新鲜猪肝用0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液洗去血液，剪碎，加入50 ml0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液,置匀浆器中研磨.待研磨成糊状后，将糊状物离心10min(4000r/min)，弃去上清液，沉 淀用0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液洗二、三次。所得沉淀为脱氧核糖核蛋白制品。    （2）向上述沉淀物加入0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液，使总体积为44ml，然后滴加25%SDS溶液3ml，边加边搅拌。加毕，置60℃水浴保温 10min(不停搅拌)溶液变得粘稠并略透明，取出冷至室温。此步操作

  31. 系使核酸与蛋白质分离。 （3）加入5mol／ＬNaCl溶液10ml，使NaCl最终浓度达到1mol/L，搅拌10min，加入约一倍体积的氯仿-异戊醇混合液，振摇 20min，离心10min(4000r/min )。去掉沉淀，上层清夜徐徐加入1．5—2倍95%乙醇，DNA沉淀即析出，用玻棒慢慢搅动，则DNA丝状物即缠在玻棒上。    （4）将DNA粗品置于27ml0.15mol/LNaCl-0.0015mol/柠檬酸三钠溶液中，再加入3ml1.5mol/L NaCl-0.0015mol/柠檬酸三钠溶液，搅匀，加入一倍体积氯仿-异戊醇混合液，振摇10min，离心(4000r /min，10min)，倾出上层液(沉淀弃去)，加入1.5倍体积95%乙醇，DNA即沉淀析出。离心，弃去上清液，沉淀

  32. (粗DNA）。操作步骤 重复处理一次。    （5）将上步得沉淀溶于27ml0.015mol/LNaCl-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液中，然后以线状徐徐加入2倍95%乙醇，边加边搅， 取出丝状DNA，依次用70%、80%、95%及无水乙醇各洗一次，真空干燥。 2、鉴定：用二苯胺法测定DNA

  33. 实验五 血液中葡萄糖的测定 【实验目的】 （1）理解血糖在生物体内的重要意义。 （2）掌握Folin-Wu法测定血糖含量的原理和方法。

  34. 【实验原理】 葡萄糖是血液主要的糖类，因此测血糖含量就是测血液中葡萄糖的含量。测定血液中葡萄糖的含量，即测复杂组分中一种物质的量，根据生化实验基本技术的原理，可采用分光光度法（比色法）进行测定。 血液中的葡萄糖与碱性硫酸铜溶液共热，铜离子即被血液中的葡萄糖还原成氧化亚铜，后者又可使钼酸试剂还原成低价的钼蓝（蓝色）。血糖的含量与产生的氧化亚铜成正比，氧化亚铜的量与形成的钼化合物的量成正比，可以用比色的方法进行测定。

  35. 【实验试剂与器材】 1、标准葡萄糖溶液 （1）1%（m/V）葡萄糖母液 称取葡萄糖1.0g，溶于蒸馏水中，然后用100ml容量瓶定容至刻度。 （2）标准葡萄糖溶液 用移液管吸取1%葡萄糖母液1.0ml，放入100ml容量瓶内，然后定容至刻度。 2、碱性硫酸铜溶液（A、B液） （1）A液：称取无水碳酸钠35.0g，酒石酸钠13.0g及碳酸氢钠11.0g，用蒸馏水溶解，然后用1000ml容量瓶定容至刻度。 （2）B液：称取硫酸铜5.0g，用蒸馏水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度，加几滴浓硫酸作为保存剂。

  36. 碱性硫酸铜（现配现用）。 取A液25ml，B液5ml，混合后，再用A液定容至50ml，摇匀。该混合液在4℃冰箱里可保存数日，如果暴露于阳光下，数小时即失效。 3、酸性钼酸盐溶液 称取钼酸钠104.6g，置烧杯中用蒸馏水溶解，倒入500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，然后移入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静置数小时。置于1000ml容量瓶中，缓慢加入85%（V/V）H3PO4225ml，边加边摇匀。再加入25%（V/V）硫酸150ml，置暗处至次日，用空气将剩余的溴赶去，加入冰乙酸75ml，摇匀，加蒸馏水稀释至1000ml，贮存于

  37. 棕色瓶中。 4、10％（m/V）钨酸钠溶液 5、0.33mol/L硫酸溶液 6、动物血（家兔心脏取血） 7、分光光度计 8、血糖管 9、奥氏吸管 10、水浴锅 11、表面皿

  38. 【实验步骤】 1.无蛋白血滤液的制备 先在烧杯中加0.8g左右的抗凝剂（草酸钾或草酸钠），从家兔心脏取血10ml放入烧杯，振荡摇匀。 用奥氏吸管吸取已加抗凝剂的全血1ml，缓缓放入20ml锥形瓶中，加水7ml，摇匀，血液变成红色透明时加10％钨酸钠1ml，摇匀，再加 0.33mol/L 硫酸，随加随摇，加完放置5～15min，至沉淀由鲜红变为暗棕色，滤纸过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于0.1ml全血。 2.血糖的测定 取具25ml刻度的血糖管3只，编号，用奥氏吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第一只血糖管中，于第二只

  39. 血糖管中加2ml标准葡萄糖溶液。第三只血糖管中加血糖管中加2ml标准葡萄糖溶液。第三只血糖管中加 2ml蒸馏水。然后各加2ml新配置的碱性硫酸铜溶液，同时置沸水浴内煮6min，取出，在流水中迅速冷却，各加入4ml酸性钼酸盐溶液，1min后以蒸馏水稀释至25ml，混匀，倒入比色杯，用722型风光光度计于420～440nm波长比色（先以空白管调节零点，然后测标准管和样品管）。 3.计算 按下式计算100ml全血中所含的血糖质量（mg）。 m＝A1×C0÷A0÷0.1×100 式中：m：100ml血中所含的糖质量

  40. C0：标准葡萄糖溶液浓度 A1：样品溶液吸光度 A0：标准溶液吸光度 【注意事项】 1.欲得准确结果，所取血液的量必须准确。如果由吸 管中放出血液的速度太快，会有大量血液粘在吸管内壁，容量不准，所以一般放出1ml血液所用的时间不应少于1min。 2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，在适当酸度时，使血红蛋白变性、沉淀。如血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍混浊，可在钨酸与血混合液中加入10％硫酸1～2滴，待变为暗棕色后

  41. 再滤。 3.血液中除葡萄糖外，尚有其他还原性物质，所以实验结果可能偏高20%～30%。 【思考题】 1．移液管使用时应注意哪些问题?2．全血中除了葡萄糖还有哪些还原性物质?

  42. 实验六 血清中总胆固醇的测定 【实验目的】 学习血清胆固醇的检测方法 。 【实验原理】 胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质对550nm波长的光有最大吸收，可用比色法定量测定。100ml样品中胆固醇含量在400mg之内与吸光度呈良好线性关系。

  43. 【实验试剂与器材】 1、邻苯二甲醛试剂 2、90%醋酸 3、混合酸 4、标准胆固醇贮液（1mg/ml） 5、标准胆固醇应用液（0.1mg/ml） 6、人血清 7、试管 8、吸管 9、容量瓶 10、烧杯 11、电子分析天平 12、722型（或7220型）分光光度计

  44. 【实验步骤】 1、标准曲线的绘制 取清洁干燥试管5支，编号，按表加入试剂。 加毕，混匀，静置10min，以550nm波长比色测定，以吸光度值为纵坐标，胆固醇含量为横坐标，做标准曲线。

  45. 2、样品的测定 取2支清洁干燥试管，编号后，按表加入试剂。 显色时要避免高温，采用混合酸液反应时温度不会升得太高，一般在4~32℃时，颜色能稳定2h。 加毕，混匀，静置10min，于550nm波长比色，以对照管校正零点，对照标准曲线即知100ml样品中总胆固醇含量（mg）。

  46. 实验七 唾液淀粉酶活性的观察 【实验目的】 酶是化学本质为蛋白质的生物催化剂。其活性受到很多因素的影响，如温度、pH值以及抑制剂激活剂等。通过本次的实验观察，同学们应该更加深刻的理解理论课上所讲的酶促反应动力学的内容。

  47. 【实验原理】 在本实验中，以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精分子，最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖。它们遇碘呈不同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不显颜色。 淀粉在唾液淀粉酶的作用下水解： 淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖及少量葡萄糖遇I2分别呈现： 蓝色→紫色→红色→不显色

  48. 由于在不同温度，不同pH，或者在有激活剂或抑制剂存在的条件下唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断，从而可了解上述诸因素对酶活性的影响。由于在不同温度，不同pH，或者在有激活剂或抑制剂存在的条件下唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断，从而可了解上述诸因素对酶活性的影响。 【实验试剂与器材】 1、试剂0.5%淀粉溶液0.3% NaCl溶液0.3% CuSO4溶液 碘液2、仪器：恒温水浴锅

  49. 【实验步骤】 1.  唾液淀粉酶的制备(1)  提取：实验者先用水漱口清洁口腔，然后含一小口（约5mL）蒸馏水于口中轻嗽一、二分钟。(2)  稀释：将酶提取液用水定容至100mL。作为唾液淀粉酶的样品液。（由于不同人或同一人不同时间收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀释倍数可以是50～300倍，甚至超过此范围。）2. 温度对酶活性的影响 取3支试管，编号后各加入淀粉溶液2毫升。将第l、2号试管放入37℃恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水

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