Introdução/Objetivos

1. + CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA MANANA SULFATAÇÃO QUÍMICA AVALIAÇÃO DE UMA FUCOMANOGALACTANA QUIMICAMENTE SULFATADA COMO HEPARINÓIDE Aline Guimarães SantanaBolsista PROBEM/PRAE - UFPR Orientador: Prof. Dr. Thales R. Cipriani /Co-orientador: Drª. Ana Helena P. Gracher Introdução/Objetivos • Caracterização química realizada previamente [Carbonero, et. al., 2008]; • Os testes de aPTT e de inibição da α-Trombina e fator Xa foram realizados previamente e mostraram uma atividade anticoagulante in vitro do FmgLe-S1. A hemostasia é um processo fisiológico entre pró-coagulação, anticoagulação e fibrinólise [Araújo, 2012]. Desequilíbrios nesse processo podem causar graves distúrbios tanto hemorrágicos como pró-trombóticos [Gracher, 2010]. Estudos atuais mostram que os polissacarídeos sulfatados podem apresentar atividade sobre a hemostasia, tanto ativando quanto inibindo o processo de coagulação. O objetivo desse trabalho é avaliar a atividade de uma fucomanogalactana quimicamente sulfatada sobre a hemostasia. Fig. 2- EFEITO DE FmgLe-S1 NA TROMBOSE VENOSA EM RATOS. PBS ou FmgLe-S1 foram administrados pela artéria carótida. Após cinco min de circulação tromboplastina foi injetada e após 20s foi feita a estase do segmento de isolado da veia cava abdominal. Após 20 min de estase o trombo formado foi removido, seco e pesado. Resultados foram expressos como % do peso do trombo. Fig 1 - ATIVIDADE DE FmgLe-S1 SOBRE A COAGULAÇÃO. Plasma coletado em citato foi incubado na presença e ausência de FmgLe-S1 e CaCl2. (10 nM/µL) O teste é realizado lendo as absorbâncias a 405 nm por 20 minutos. Fig 3 - EFEITO DE FmgLe-S1 NA ATIVAÇÃO DO FATOR XII. Plasma foi incubado na presença e ausência de FmgLe-S1. Após 1 min. a 37º C foi adicionado substrato cromógeno específico para Fator XII ativado. Resultados expressos como T1/T0, sendo a absorbância em 405 nm na presença (T1) e ausência de polissacarídeo (T0) na mistura de incubação. Fig 4 –AGREGAÇÃO PLAQUETÁRIA. Porcentagem de agregação plaquetária na presença de salina ou duas diferentes concentrações de FmgLe-S1. No teste de aPTT, FmgLe-S1 se mostrou é capaz de retardar a coagulação assim como no teste de recalcificação quando presente em altas concentrações, além de ativar o fator XII da cascata de coagulação. No entanto, in vivo, no teste de trombose venosa FmgLe-S1 não apresentou nenhuma atividade, assim como no teste de agregação plaquetária ativado por ADP. Esses resultados nos permitem observar que o mecanismo de hemostasia é complexo e envolve vários componentes, além do que, ainda não foi possível concluir se a ativação do fator XII e inibição da coaguaçãoin vitroé específica. • ARAÚJO, C. A., Modificações químicas em carragenanas: estudo comparativo de diversos padrões de sulfatação na atividade anticoagulante. Curitiba, 2012. Dissertação (Mestrado em Ciências – Bioquímica) – Setor de Ciências Biológicas, Universidade Federal do Paraná. • CARBONERO, E. R.; GRACHER, A. H. P.; KOMURA, D. L.; MARCON, R.; FREITAS, C.S.; BAGGIO, C.H.; SANTOS, A.R.S.; TORRI, G.; GORIN, P. A. J.; IACOMINI, M. Lentinus edodes heterogalactan: antinociceptive and anti-inflammatory effects. Food Chem., v. 111, p. 531-537, 2008. • GRACHER, A.H.P. Avaliação do potencial anticoagulante e antitrombótico de polissacarídeos nativos e quimicamente sulfatados de basidiomicetos. Curitiba, 2010. Tese (Doutorado em Ciências – Bioquímica) – Setor de Ciências Biológicas, Universidade Federal do Paraná; ATIVIDADE BIOLÓGICA • aPTT • ENSAIO DE INIBIÇÃO DA α-TROMBINA • OU FATOR Xa • TROMBOSE VENOSA • AGREGAÇÃO PLAQUETÁRIA • ENSAIO DE ATIVAÇÃO DO FATOR XII • TESTE DE RECALCIFICAÇÃO - RMN - GC-MS