1 / 12

PROMĚNLIVOST BAKTERIÍ Fenotypové změny Genotypové změny Přenos genů Konjugace Transdukce

PROMĚNLIVOST BAKTERIÍ Fenotypové změny Genotypové změny Přenos genů Konjugace Transdukce Transformace Extrachromosomální přenos Restrinkce , oprava DNA Genové manipulace. Historicky – názor o úplné plejomorfii Později monomorfismus Relativně velká proměnlivost bakterií:

Download Presentation

PROMĚNLIVOST BAKTERIÍ Fenotypové změny Genotypové změny Přenos genů Konjugace Transdukce

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. PROMĚNLIVOST BAKTERIÍ • Fenotypové změny • Genotypové změny • Přenos genů • Konjugace • Transdukce • Transformace • Extrachromosomální přenos • Restrinkce, oprava DNA • Genové manipulace

  2. Historicky – názor o úplné plejomorfii • Později monomorfismus • Relativně velká proměnlivost bakterií: • reakce na vnější podmínky • rychlost množení • haploidní chromosom • Obecné genetické zákony platí i pro bakterie • Nyní bakterie významný objekt genetiky • Geny:chromosomální x extrachromosomální • Změny: • zasahující genotyp – jsou dědičné • zasahující fenotyp (= umožnění fenotypové realizace vlastnosti)

  3. Fenotypové změny • Mají dočasný ráz • Reakce na vnější podmínky • Zasahují celý soubor (většinu buněk) • adaptivní enzymy – indukce enzymu substrátem • velikost buňky • přítomnost bičíků • disociace kolonií= změny morfologie kolonií spojené i se změnami některých vlastností, např.: • S – hlenovité – toxičtější, odolnější • R – drsné - méně virulentní i nižší toxicita • (u streptokoků 6 fází)

  4. Genotypové změny – mutace • změny v uspořádání nukleotidů v DNA • Delece – zařazení- přesmyk… 1 či více párů • Mutace: spontánní x indukované • Mutageny - zvyšují frekvenci mutací: • chemomutageny (bromouracil…), radiační mutace (UV a γ záření) • Projev mutací vzhledem k haploiditě okamžitý (není recesivita) • Letální mutace znamenají okamžitou smrt buňky • Mutace - • dědičné (při replikaci přechází informace do dceřiných buněk) • diskontinuální (nárazovité) • řídké, zasahují malý počet jedinců, pravděpodobnost 1:106-109 • specifické – zasahují určitý determinovaný znak • nezávislé • mohou být spontánní (není známa příčina)

  5. Přenos genů U vyšších organismů – sexuální procesy (zygota nositelem vlastností obou rodičů) U bakterií sexuální procesy nejsou Alternativou „parasexuální“ procesy Pro většinu hub důležitá součást životního cyklu 1. Konjugace= předání informace donora akceptorovi Podmínky: - rozdílnost buněk (přítomnost F plasmidu), sex-pily Etapy: - sex-pily vytvoří kanálek - F plasmid se „otevře“ (DNA není již kruhovitá) - jedno vlákno koncem 5´vstupuje do akceptora (může být přerušeno) - replikace – vznik 2. vlákna Hfr konjugace:Plasmid je součástí chromosomu a při přestupu může přenést i část chromosomální informace

  6. Konjugace: Hfr konjugace:

  7. 2. Transdukce= přenos genetické informace vektorem V přírodních podmínkách je hlavní vektor virus, který „omylem“ během své replikace přijal DNA hostitele Další vektory: plasmidy, kosmidy (umělé) Přenášena jen malá část DNA Pravděpodobnost: 1:106-108 Tři typy příjmu:- rekombinantní= fragment DNA se váže na chromosom - abortivní– DNA nevstupuje do chromosomu - plasmidový

  8. 3. Transformace= buňka recipienta přijímá volnou DNA z vnějšího prostředí a zabudovává ji do chromosomu Pravděpodobnost menší – DNA relativně velká a může být v buňce rozložena endonukleasami vstup možný pro malý fragment (2000-5000 nukleotidových párů) 4. Extrachromosomální přenos genů= přenos zabezpečený plasmidy zvláště R Plasmid = dodatečná genetická informace Autoreplikační jednotka nezávislá na replikaci chromosomální DNA Výrazné zvýšení genetické variability Při dělení buňky variabilita přechodu plasmidů do dceřinných buněk; možná i ztráta (curing)

  9. Oprava DNA, restrinkce = schopnost buňky opravit změněnou (poškozenou) DNA = podpora homeostase poškozený nukleotid (např. guanin metylací, či thymin zdvojením) je rozpoznán a změna je enzymaticky odstraněna bakterie mají regulační systém pro opravy = SOS regulon

  10. Genové manipulace= řízená a cílená změna genomu • převážně založeno na transdukci • Fáze: • Získání genu • rozštěpení genomu donora restrinkčními endonukleasami (restrinktasami) • prostřednictvím mRNA – slouží jako matrice pro synthesu DNA reversní transkriptasou • synthesa genu podle jeho mapy (DNA synthetiser) • nákup genu • Výběr vhodného vektoru • nejčastěji R plasmid, nutná přítomnost vhodných markerů (resistence na antibiotika), • mapa plasmidu (znalost míst, kde je DNA plasmidu „otevřena“ restrinktasami • Konstrukce rekombinantního plasmidu • otevření plasmidu restrinktasou • vložení genu ligasou • výsledek: směs rekombinantních a původních plasmidů • Konstrukce rekombinantní buňky • plasmidy vstupují do buněk akceptora • výsledek: směs 3 typů buněk: • původní + s nezměněným plasmidem + s rekombinantním plasmidem • Výběr rekombinantní buňky • založen na využití márkerů • Klonování rekombinantní buňky • namnožení se sledováním stability nové vlastnosti • Vytvoření podmínek pro expresi genu • optimalizace prostředí a vnějších podmínek pro fenotypové uplatnění genu

  11. Použití plasmidu pro klonování: 1. štěpení BAMHI restrinktasou 2. DNA ligasa 3. transformant resistentní A + T 4.transformant resistentní A citlivýT PSTI AMP RESIST.

  12. Detekce rekombinantní bakterie (3 možnosti): - 0 nerezistentní - TC + AMP (pův. plasmid) - AMP (rekombinantní plasmid)

More Related