1 / 26

PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME

PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME. Oleh : Reza Aditama 20509022. Agenda. Pendahuluan Tata Nama Struktur Mekanisme Reaksi Regulasi Purifikasi dan Karakterisasi Aplikasi. Pendahuluan.

derron
Download Presentation

PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. PROLINE-SPECIFIC AMINOPEPTIDASE ENZYME Oleh : Reza Aditama 20509022

  2. Agenda • Pendahuluan • Tata Nama • Struktur • Mekanisme Reaksi • Regulasi • Purifikasi dan Karakterisasi • Aplikasi

  3. Pendahuluan • Aminopeptidase Enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis atau pemutusan asam amino terminal dari protein atau peptida • Pada kingdom hewan dan tanaman banyak ditemukan aminopeptidase • Aminopeptidase essensial untuk : • - Protein maturation • - Degradasi peptida hormonal dan non-hormonal

  4. Reaksi yang dikatalisis oleh Aminopeptidase aminopeptidase Peptida  Peptida (lebih pendek)

  5. Klasifikasi Aminopeptidase Terdapatbeberapaklasifikasiuntukenzimaminopeptidasediantaranyaadalahberdasarkan : • Jumlahasam amino yang diputusdari NH2 terminal substrat. co/ aminopeptidase, diaminopeptidase - Efisiensidariasam amino yang diputusdarisuatu protein ataupeptida. co/ Leucineaminopeptidase, prolinaminopeptidase • pH optimum untukaktivitasnya (basa, asam, ataunetral) - Ion ataulogam yang diikatpadaenzim

  6. Prolin Aminopeptidase • Prolin Aminopeptidase Enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis atau pemutusan spesifik terhadap residu prolin pada suatu protein atau peptida • Ukuran protein bervariasi •  Isolasi dari E.Coli : 49.650 Da • Jumlah residu : 440

  7. Distribusi Prolin Aminopeptidase D.F. Cunningham, B. O’ConnorrBiochimica et Biophysica Acta 1343 (1997) 160–186

  8. Tata Nama NC-IUBMB 3. Hydrolases 3.4 Acting on peptide bonds (peptidases) 3.4.11 Aminopeptidases 3.4.11.9 Xaa-Pro aminopeptidase

  9. Struktur Prolin Aminopeptidase • Homologimiripdengan AMPM • 4 subunit : A,B,C,D • Ion Mn2+ • 440 residuasam amino Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)

  10. Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) Folded Prolin Aminopeptidase Terdiri dari 2 domain : Domain I (1-174) : 6 β-sheet dan 4 α-helix Domain 2 (175-440) : 6 β-sheet dan 7 α-helix

  11. Active Site Prolin Aminopeptidase Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)

  12. Stereoview Active Site Prolin Aminopeptidase Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)

  13. Mekanisme Katalisis Wilce et.al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998)

  14. Mekanisme Katalisis SGAP (1) Y. Fundoiano-Hershcovitz et al. / FEBS Letters 571 (2004) 192–196

  15. Mekanisme Katalisis SGAP (2) Y. Fundoiano-Hershcovitz et al. / FEBS Letters 571 (2004) 192–196

  16. Fungsi Dinuclear Metal Hiroshi Sakiyama, et.al, Inorganica Chimica Acta 351 (2003) 256/260

  17. Inhibisi

  18. Substrat Ideal

  19. Inhibisi oleh bestatin Allen Taylor, FASEBJ. 7: 290-298; 1993.

  20. Inhibisi oleh bestatin Allen Taylor, FASEBJ. 7: 290-298; 1993.

  21. Purifikasi • Ekstraksi dengan Tris-HCl buffer+NaCl 150mM, sentrifugasi dengan 13000 x g selama 20 menit • Presipitasi dengan Asam Klorida lalu disentrifugasi dengan 13000 x g selama 20 menit • Heat inactivation  inkubasi 45oC selama 1 jam lalu disentrifugasi dengan 13000 x g selama 20 menit • Fraksinasi dengan Amonium Sulfat • Anion Exchange Chromatography (DEAE Sephadex) • Gel Permeasi (Sephadex G-100) • Adsorption Chromatography ( hydroxylapatite) F.C. Gollich et.al Protein Expression and Purification 47 (2006) 634-639

  22. Purifikasi F.C. Gollich et.al Protein Expression and Purification 47 (2006) 634-639

  23. Karakterisasi

  24. Aplikasi http://www.biotek.lipi.go.id/wartabiotek/warta11.pdf

  25. Aplikasi

  26. Terima Kasih

More Related