流式细胞仪在口腔临床免疫学中的应用

流式细胞仪在口腔临床免疫学中的应用 徐骎口腔临床免疫学教研室口腔肿瘤生物实验室

原理

荧光染料种类

什么是流式细胞仪 ●流式细胞仪实物 BD-Calibur BD FACSVantage

流式细胞仪工作原理

概况 • 细胞免疫功能检测 ——T细胞亚群、 B细胞、 NK细胞 • 检测原理不同功能的免疫细胞表面表达不同种类的特征性分子

CD ？

细胞表面分化族 (cluster differentiation, CD) • T细胞表面分化族的不同分为: 总T淋巴细胞(CD3+) 辅助T淋巴细胞(CD3+CD4+) 抑制T淋巴细胞(CD3+CD8+)

细胞表面分化族 (cluster differentiation, CD) • B细胞表面分化族: CD19+ • NK细胞表面分化族: CD16+/ CD56+

免疫细胞检测原理 利用荧光素或酶等标记细胞，用荧光显微镜或流式细胞仪观察到标记细胞，从而达到检测目的细胞的目的

流式细胞仪简介 • 流式细胞仪（Flow Cytometer,FCM)——集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体 • 能对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速的、定量分析和分选。 • 流式细胞仪已成为当今对细胞生物学特性进行分析检测的理想工具

流式细胞仪结构 分为五部分： • 流动室及液流驱动系统 • 激光光源（488nm及635nm)及光速成形系统 • 光学系统 • 信号检测与分析系统 • 细胞分选系统

流式细胞仪信号检测与分析——散射光信号 • 不依赖任何细胞样品的制备技术，被称为细胞的物理参数 1）前向角散射（Forward Scatter,FSC)：与被测细胞大小有关 2）侧向角散射（Side Scatter,SSC)：对细胞膜、胞质、核膜的折射率敏感

流式细胞仪信号检测与分析——荧光信号 • 激光光束与细胞正交时，产生两种荧光信号 1）细胞自发荧光 2）细胞上特异荧光素受激光照射得到的荧光信号荧光染料有PI 、 PE 、 FITC 、 PerC 、 CY5等

设“门”分析（Gating analysis) • 通过设“门”，设置各种参数的相关信息，确定并分析所选的目标细胞群的各种数据

流式细胞仪检测免疫细胞流程 • 样品制备（详见操作手册） • 上机检测，同时结果分析 • 报告打印

健康人淋巴细胞亚群正常值 • CD3 59.4~84.6% • CD19 6.4~22.6% • CD4 28.5~60.5% • CD8 11.1~38.3% • CD4/CD8 0.9~3.6 • CD16/56 5.6~30.9%

小结 • 流式细胞仪工作原理 • 淋巴细胞不同亚群细胞表面分化族（CD） • 健康正常人淋巴细胞亚群的正常值范围（流式细胞仪检测法）

流式细胞仪在口腔临床 免疫学中的应用