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Enzimologia clinica. Scopo. valutare la concentrazione degli enzimi nei fluidi corporei a fini diagnostici Enzimi: catalizzatori biologici aumentano la velocità di una reazione senza essere consumati. Cinetica Enzimatica. Enzimi a substrato singolo Es. Amilasi, lipasi
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Scopo • valutare la concentrazione degli enzimi nei fluidi corporei a fini diagnostici • Enzimi: catalizzatori biologici aumentano la velocità di una reazione senza essere consumati
Cinetica Enzimatica • Enzimi a substrato singolo • Es. Amilasi, lipasi • Enzimi a substrati multipli E + S ES EP E + P
Cinetica Enzimatica Free energy of activation uncatalyzed reactants catalyzed DG* reactants Free Energy Free Energy DGo products products Reaction Progress Free energy change
Influenzata da concentrazione di substrato concentrazione di enzima temperatura pH cofattori coenzimi attivatori inibitori Velocità di reazione
Legge di Michaelis-Menten • Basse concentrazioni Reazione di primo ordine • Alte concentrazioni Reazione di ordine 0 • Costante di Michaelis-Menten • è la concentrazione di substrato che corrisponde ad una velocità di reazione pari al 50% del massimo
Localizzazione Enzimatica • Liberi nelle cellule di diversi tessuti ed organi • Confinati in particolari strutture all’interno delle cellule stesse • In un determinato tessuto od organo specifico enzimi organo specifici
Gli enzimi nel sangue • spesso non hanno un ruolo fisiologico • presenti anche in situazioni normali • invecchiamento fisiologico • turnover cellulare • eliminati da • sistema reticolo endoteliale • Rene (es. amilasi) • livello di attività normale nel siero è funzione di • velocità di rilascio • clearance • emivita • 2 ore (CK-BB) • 170 ore (ALP placentare)
necrosi o danno cellulare citolisi fuoriuscita enzimi Fattori tossici Ischemia aumentato turnover cellulare Accrescimento Rigenerazione cellulare Neoplasie Gravidanza Induzione enzimatica Farmaci (es. Fenobarbital, alcool) Patologie(es. colestasi) Ostruzione dei dotti escretori enzimi presenti nelle secrezioni esocrine si trovano nel plasma Aumento degli enzimi nel plasma:
Liberazione enzimi nel circolo • la velocità di comparsa nel sangue dipende da • passaggio nel sangue • diretto • attraverso il circolo linfatico • localizzazione intracellulare • citoplasmatica • mitocondriale
Fluidi utilizzati • siero • sangue • plasma • orine • liquor cefalorachidiano • versamenti • fluidi extracellulari
usi • patologie epatiche • patologie cardiache • patologie muscolari • patologie pancreatiche • patologie ossee • patologie autoimmuni • patologie gastroenteriche • neoplasie
Metodiche di analisi • controllo di ed ottimizzazione di • pH • temperatura • concentrazione di substrato che permetta di ottenere una cinetica di grado 0 • metodiche immunologiche
Metodiche di analisi • Metodiche enzimatiche • controllo di ed ottimizzazione di • pH • temperatura • concentrazione di substrato che permetta di ottenere una cinetica di grado 0 • metodiche immunologiche