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血清总胆红素测定

血清总胆红素测定. 浙江中医药大学 生命科学学院 生物化学教研室. 【 实验目的 】. 掌握：试剂盒测定血清总胆红素的基本原理 熟悉：试剂盒测定血清总胆红素的操作过程. 【 实验原理 】. 血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素。非结合胆红素在催速剂咖啡因等的作用下，其分子内部氢键遭到破坏后才与重氮试剂反应也产生偶氮胆红素，即在酸性介质中生成偶氮色素。. 【 实验原理 】. 重氮试剂 1) 血清中结合胆红素 偶氮胆红素 2) 非结合胆红素 + 咖啡因 - 苯甲酸钠 - 醋酸钠

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血清总胆红素测定

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Presentation Transcript

  1. 血清总胆红素测定 浙江中医药大学 生命科学学院 生物化学教研室

  2. 【实验目的】 掌握：试剂盒测定血清总胆红素的基本原理 熟悉：试剂盒测定血清总胆红素的操作过程

  3. 【实验原理】 血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素。非结合胆红素在催速剂咖啡因等的作用下，其分子内部氢键遭到破坏后才与重氮试剂反应也产生偶氮胆红素，即在酸性介质中生成偶氮色素。

  4. 【实验原理】 重氮试剂 1)血清中结合胆红素 偶氮胆红素 2)非结合胆红素+咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠 （加速剂） 重氮试剂 分子内部氢键遭到破坏 偶氮胆红素(紫红色) 在540nm波长进行比色

  5. 【试剂与器材】 • 1. 血清总胆红素测定试剂盒 • 工作试剂R1：盐酸120mmol/L；咖啡因2.1mmol/L • 2，5-二氯苯重氮四氟硼酸盐0.31mmol/L； • 校准液：TBil（总胆红素）：68 umol/L， • DBil（结合胆红素）：15 umol/L • 2. 血清 • 3. 生理盐水 • 4. 试管、移液枪、恒温水浴箱、分光光度计。

  6. 【操作步骤】 试剂 试剂空白 校准管 测定管 生理盐水 100μl / / 校准液 / 100μl / 血清 / / 100μl 工作试剂 3ml 3ml 3ml 摇均，置37℃水浴5min，540nm波长，以空白管校零，读取各管的吸光度A。

  7. 【结果与计算】 血清总胆红素= 测定管吸光度 校准物浓度 × （umol/L ） 校准管吸光度 （umol/L ） 校准液TBil（总胆红素）浓度：68 umol/L 血清总胆红素参考值：3umol/L-20umol/L

  8. 【注意事项】 1、胆红素对光敏感，校准液及标本均应尽量避光保存。 2、血脂及脂溶性色素对测定有干扰，应尽量空胶取血。 3、本法测定血清总胆红素，在10~37℃条件下不受温度变化影响，反应产物2小时内呈色稳定。 4、叠氮钠能破坏重氮试剂，终止偶氮反应。不宜采用叠氮钠作防腐剂中的质控血清。 5、标本对照管的吸光度一般很接近，若遇标本量很少时可不做标本对照管，可参照其他标本对照管的吸光度。 6、每次加完试剂都应充分混均，给予适宜的温度、时间使其反应。 7、在使用分光光度计测吸光度前，应使其事先预热，以免影响所测结果。

  9. 【思考题】 结合胆红素/总胆红素的比值测定意义？

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