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分光光度法测定水果、蔬菜及 药物中的抗坏血酸

综合性实验. 分光光度法测定水果、蔬菜及 药物中的抗坏血酸. 一、背景知识. 抗坏血酸，也叫维生素 C ，易溶于水。自然界存在两种形式的维生素 C ：抗坏血酸（还原型 VC ）和脱氢抗坏血酸（氧化型 DHVC ），抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。化学名称为： L-3- 氧代苏己糖醛酸内酯，分子式为 C 6 H 8 O 6 ，相对分子质量： 176.13 。两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合成的 L- 抗坏血酸。.

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分光光度法测定水果、蔬菜及 药物中的抗坏血酸

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Presentation Transcript

  1. 综合性实验 分光光度法测定水果、蔬菜及 药物中的抗坏血酸

  2. 一、背景知识 抗坏血酸，也叫维生素C，易溶于水。自然界存在两种形式的维生素C：抗坏血酸（还原型VC）和脱氢抗坏血酸（氧化型DHVC），抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。化学名称为：L-3-氧代苏己糖醛酸内酯，分子式为C6H8O6，相对分子质量：176.13。两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合成的L-抗坏血酸。

  3. 维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药，预防维生素C缺乏症，提高动物免疫力和抗应急能力，小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以提高动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗能力，它帮助人体对铁的吸收，可防止有害(低密度)胆固醇的氧化。维生素Ｃ也是非常有效的自由基清除剂。但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2＋、Fe3＋等,都能加速其氧化，易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在于新鲜植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏。维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药，预防维生素C缺乏症，提高动物免疫力和抗应急能力，小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以提高动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗能力，它帮助人体对铁的吸收，可防止有害(低密度)胆固醇的氧化。维生素Ｃ也是非常有效的自由基清除剂。但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2＋、Fe3＋等,都能加速其氧化，易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在于新鲜植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏。

  4. 二、实验目的 1、掌握铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法； 2、理解铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件； 3、掌握利用配位掩蔽法消除光还原作用的方法； 4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法； 5、了解抗坏血酸测定的意义， 6、了解样品处理与制备、含量测定的全过程。

  5. + 2 Fe 2+ + 2H+ + 2 Fe3+ = 三、实验原理 Fe2+ +3 Phen（邻菲罗啉） = Fe (Phen)3 2+ (红色，λmax =510nm ) Fe3+ (剩余) + 3 Phen（邻菲罗啉）= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + hγ = Fe (Phen)3 2+ Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen

  6. 四、仪器与试剂 仪器： 电子天平；分光光度计（1厘米比色皿）； 移液管（5、10 mL）；比色管或容量瓶(25或50 mL) 试剂： 100 μg/L Fe3+标准溶液； 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液； 40μg/mL抗坏血酸； 0.2 mol/L HAc-NaAc缓冲溶液（pH 4.75）； 1%（W/V） 氟化钠溶液； 1% HAc溶液。

  7. 五、实验步骤 1、吸收曲线的绘制 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液5.00 mL置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0mL0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0 mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V）氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。同时制作相应的试剂空白。以相应试剂空白作参比，测定不同波长条件下的吸光度A，绘制吸收曲线，选择最大测定波长λmax。

  8. 2. 标准曲线的绘制 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0 mL 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V） 氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。以相应试剂空白作参比，在最大测定波长λmax处测定吸光度As, 用Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程。

  9. 3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备 新鲜水果去皮、去核后 准确称重 组织捣碎机中捣碎 或 蔬菜去根，洗干净，沥干 转移至烧杯中 50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混匀 脱脂棉粗滤 精滤液转移至250 mL容量瓶中 摇匀，静置 1% HAc溶液定容 待测

  10. 4、药片溶液的制备 准确称重 求平均片重后研细 VC片20片 取适量(相当于VC l00 mg)精确称重后 加水到刻度 摇匀，并过滤 置1000 mL容量瓶 弃去初滤液，准确吸取续滤液2 mL置50 mL容量瓶中 待测

  11. 六、数据记录和结果处理 1、吸收曲线的绘制 分光光度计型号： 比色皿厚度： 年 月 日

  12. 2、标准曲线的绘制与待测样品测定

  13. 附:光度计的使用说明

  14. 数据处理要求 1 要求利用计算机采用用Excel电子表格绘制吸收曲线,要求图形美观,大方,坐标选取合理; 2 要求利用计算机采用用Excel电子表格绘制标准曲线,要求图形美观,大方,坐标选取合理;同时找出标准曲线的回归方程 3 根据样品溶液测得吸光度,利用回归方程计算水果和蔬菜及药片样品中的抗坏血酸含量.

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