1 / 8

实验八

实验八. 考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质含量. 一 、实验目的. 学会用考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质含量. 二、 实验原理. 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高度的敏感性。考马斯亮蓝 G-250 的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在 465nm 当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色其最大吸收峰改为 595nm ，考马斯亮蓝 G-250- 复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 在一定范围内，考马斯亮蓝 G-250- 复合物呈色后，在 595nm 下吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。. 三 、实验器材.

griffith-gray
Download Presentation

实验八

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 实验八 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量

  2. 一 、实验目的 • 学会用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量

  3. 二、 实验原理 • 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高度的敏感性。考马斯亮蓝G-250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色其最大吸收峰改为595nm，考马斯亮蓝G-250-复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 • 在一定范围内，考马斯亮蓝G-250-复合物呈色后，在595nm下吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。

  4. 三 、实验器材 • （1）旋涡混合器。 • （2）试管1.5cm×15cm（×8） • （3）吸管0.10ml（×1），0.50ml（×2），1.0ml（×2），2.0ml（×1），2.0ml（×1）。 • （4）722型（或7220型）分光光度计。 • （5）容量瓶1000ml（×1）。 • （6）量筒100ml（×1）。 • （7）电子分析天平。

  5. 四、实验试剂 • 1、0.9％NaCL溶液。 • 2、标准蛋白液；牛血清白蛋白（0.1mg/ml），准备称取牛血清白蛋白0.2g，用0.9%NaCl溶液溶解并稀释至2000ml。 • 3、染液：考马斯亮蓝G250(0.01%),称取0.1g考马斯亮蓝G250溶于50ml95%乙醇中，再加入100ml浓磷酸，后加蒸馏水定容到1000ml,过滤。 • 4、样品液：取牛血清白蛋白（0.1mg/ml）溶液，用0.9%NaCl稀释至一定浓度。

  6. 五、 实验步骤 • （一）标准曲线的制备 • 1、取7支干净试管，按下表进行编号并加入试剂。 • 2、混匀，室温静置3min，以第1管为空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，以标准液浓度（ug/ml）作为横坐标作图得标准曲线。

  7. 表 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度——标准曲线的制备

  8. （二）样品的测定 • 另取一支干净试管，加入样品液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处比色，读取吸光度，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。

More Related