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胡 建 临床七年二系 0603 班

考马斯亮兰法测定蛋白质含量. 胡 建 临床七年二系 0603 班. 2008.5.2. 一 实验目的 二 实验原理 三 实验材料与仪器 四 实验步骤 五 注意事项. 一 实验目的. 1. 学习掌握考马斯亮兰染料结合法测定蛋白质浓度的基本原理。 2. 了解考马斯亮兰法测定蛋白质含量的优缺点。. 二 实验原理.

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胡 建 临床七年二系 0603 班

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Presentation Transcript


  1. 考马斯亮兰法测定蛋白质含量 胡 建 临床七年二系0603班 2008.5.2

  2. 一 实验目的 二 实验原理 三 实验材料与仪器 四 实验步骤 五 注意事项

  3. 一 实验目的 1.学习掌握考马斯亮兰染料结合法测定蛋白质浓度的基本原理。 2.了解考马斯亮兰法测定蛋白质含量的优缺点。

  4. 二 实验原理 考马斯亮兰G-250染料在酸性条件下能与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰值从465nm变成595nm,溶液的颜色由棕红色变为蓝色,在595nm测定的吸光度值与蛋白质浓度成正比,故可用于蛋白质定量测定。微量法测定蛋白含量范围为1μg-10μg;常量法则以检测范围10μg-100μg为宜

  5. 三 实验材料与仪器 仪器和材料 (1)玻璃仪器:试管,吸管 (2)721分光光度计 试剂 (1)9g/L NaCl溶液。 (2)标准蛋白质溶液(lmg/ml) (3)待测血清 (4)考马斯亮兰G250染液

  6. 四 实验步骤 1.标准曲线制备:取试管13只,按下表编号。将1mg/ml的标准蛋白溶液配制为1000μg/ml,500μg/ml, 250μg/ml,125μg/ml ,62.5μg/ml和31.25μg/ml的系列稀释液,按下表操作并记录:

  7. 摇匀,室温静置3min。以空白管调零,在波长595nm比色,读取各管的光吸收值。以各标准管蛋白质含量(μg)为横座标,各管光吸收值为纵座标作图,绘制标准曲线 2.未知样品测定:取试管2只,按上表测定管操作,摇匀,静置3分钟,在波长595nm读取光吸收值。用2管的平均光吸收值在标准曲线上查出相应的蛋白质含量,按以下公式计算出该样品的蛋白质浓度(g/L)。 未知样品蛋白质浓度(g/L)=标准曲线查得蛋白质浓度 × 稀释倍数 × 单位换算

  8. 五 注意事项 1.不可使用石英比色皿(因不易洗去染色)。塑料或玻璃比色皿使用后立即用少量95%乙醇洗去染色,防止读数误差。 2.塑料比色皿绝不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。

  9. Thank you!

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