1 / 12

Què volem?: Objectiu de la pràctica

Què volem?: Objectiu de la pràctica. Estudi del transport associat a microtúbuls per mitjà de proteïnes motores. Com ho anem a fer?. Utilitzant com a model experimental un teixit on el transport associat a microtúbuls és molt important: el teixit nerviós (cervell de ratolí).

jamese
Download Presentation

Què volem?: Objectiu de la pràctica

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Què volem?: Objectiu de la pràctica Estudi del transport associat a microtúbuls per mitjà de proteïnes motores Com ho anem a fer? Utilitzant com a model experimental un teixit on el transport associat a microtúbuls és molt important: el teixit nerviós (cervell de ratolí) Què anem a fer? Injectar dins del cervell una substància que siga captada per les neurones i transportada mitjançant la xarxa de microtúbuls

  2. El cervell és molt heterogeni: on anem a injectar dins del cervell? Al bulb olfactiu principal, perquè el mapa de connexions d’aquesta estructura és ben conegut i relativament senzill d’identificar B C A B Còrtex piriforme A B C A Amígdala cortical Bulb Olfactiu Principal (hemisferi dret)

  3. Quina molècula anem a utilitzar com a traçador? Utilitzem molècules de dextranamines marcades amb biotina • Dextrans — polisacàrids hidrofílics (sintetitzats per bactèries Leuconostoc) d’alt pes molecular • Alta solubilitat en medi aquós, baixa toxicitat i baixa interacció amb altres molècules (inert) • Resistents a les glicosidades cel·lulars (no són degradats dins de les cèl·lules) • Comercial (25 mg - 195 euros)

  4. Com anem a injectar el traçador? Les molècules s’injecten perquè tenen càrrega positiva neta al pH del tampó en el qual estan preparades Utilitzem un sistema que es diu ionoforesi, consistent en generar una diferència de potencial entre el cervell de l’animal i la solució de traçador

  5. Com sabem a on està el bulb olfactiu accessori? Utilitzem una aproximació estereotàxica (és a dir, es basem en coordenades preses a partir de les sutures entre els ossos cranials). Estes coordenades estan publicades a diversos atlas estereotàxics. • AP: + 3.8 • Lateral: - 0.5 • Prof.: - 0.5 Vàrem utilitzar les següents coordenades

  6. Els quatre ratolins han tingut un temps de supervivència de 6 dies, durant el qual les cèl·lules han endocitat el traçador i l’han transportat al llarg del seu axò. A continuació el teixit fou fixat mitjançat perfusió amb formaldehid 4%, crioprotegit amb sacarosa al 30% i tallat amb microtom de congelació (seccions de 50 micròmetres) Els talls de cervell foren congelats per al seu revelat a la següent sessió de pràctiques Peroxidasa Com el traçador va conjugat amb biotina, el detectem amb la tècnica de l’Avidina-Biotina-Peroxidasa Avidina Biotina Dextranamines

  7. A Aquests són els llocs d’injecció resultants (curs 02-03): Secció transversal A Ratolí 0313 Injectat en la zona ventral (orbital) del cortex frontal Cortex frontal B B Cortex frontal Secció sagital Bulb Olfactiu Accessori Ratolí 0316 Injectat en l’extrem anterior del cortex frontal Bulb Olfactiu Principal

  8. Bulb Olfactiu Accessori Bulb Olfactiu Principal Ratolí 0314 Injectat en la part posterior del bulb olfactiu accessori Secció sagital Secció obliqua Bulb Olfactiu Accessori Ratolí 0315 Injectat al bulb olfactiu accessori Bulb Olfactiu Principal

  9. TRANSPORT OBSERVAT DESPRÈS D’INJECCIONS AL CORTEX FRONTAL Seccions transversals Ratolí 0313 Injectat en la zona ventral (orbital) del cortex frontal A B A C C B Transport anterògrad i retrògrad prop del lloc d’injecció, en la zona ventral (orbital) del cortex frontal Transport anterògrad i retrògrad en el nucli mediodorsal del tàlem Transport anterògrad en l’extrem ventral del peduncle cerebral

  10. TRANSPORT OBSERVAT DESPRÈS D’INJECCIONS AL CORTEX FRONTAL Seccions transversals Ratolí 0316 Injectat en la zona ventral (orbital) del cortex frontal A A A B B Transport anterògrad i retrògrad en el nucli mediodorsal del tàlem Transport anterògrad en l’extrem ventral del peduncle cerebral

  11. TRANSPORT OBSERVAT DESPRÈS D’INJECCIONS AL BULB OLFACTIU ACCESSORI Seccions transversals Ratolí 0314 Injectat en la part posterior del bulb olfactiu accessori A A B B Transport anterògrad en el nucli cortical posteromitjal de l’amígdala Transport anterògrad al nucli mitjal de l’amígdala

  12. TRANSPORT OBSERVAT DESPRÈS D’INJECCIONS AL BULB OLFACTIU ACCESSORI Secció transversal Ratolí 0315 Injectat en el bulb olfactiu accessori A A Transport anterògrad al nucli mitjal de l’amígdala

More Related