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肠杆菌科. 孙景勇. 1. 2. 3. 4. 沙门菌属. 志贺菌属. 克雷伯菌属. 其他肠杆菌科菌属. 肠杆菌科. 沙门菌属. 一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验. 一、分类. 二、细菌特性. 形态特征 培养特性 生化反应 抗原结构 变异性 抵抗力. 伤寒沙门菌革兰染色. (一)形态特征 革兰阴性直杆菌,较细长,大小 0.7 ~ 1.5μm×2.0 ~ 5.0μm ,多具有周鞭毛,能运动,有时会出现无鞭毛的突变型。 无芽孢 ,无荚膜。. 伤寒沙门菌菌落特征( 血平板 ). (二)培养特性
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肠杆菌科 孙景勇 http://www.shsmu.edu.cn/
1 2 3 4 沙门菌属 志贺菌属 克雷伯菌属 其他肠杆菌科菌属 肠杆菌科 上海交通大学医学院
沙门菌属 一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 上海交通大学医学院
一、分类 上海交通大学医学院
二、细菌特性 • 形态特征 • 培养特性 • 生化反应 • 抗原结构 • 变异性 • 抵抗力 上海交通大学医学院
伤寒沙门菌革兰染色 (一)形态特征 革兰阴性直杆菌,较细长,大小0.7~1.5μm×2.0~5.0μm,多具有周鞭毛,能运动,有时会出现无鞭毛的突变型。无芽孢,无荚膜。 上海交通大学医学院
伤寒沙门菌菌落特征(血平板) 上海交通大学医学院
(二)培养特性 兼性厌氧,最适生长温度35~37℃,最适生长pH为6.8~7.8。本菌属对营养的要求不高,在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的菌落,有时可出现粗糙型的菌落。 上海交通大学医学院
伤寒沙门菌菌落特征(MAC) 在肠道选择性培养基上菌落小至中等,透明或半透明,乳糖不发酵,与志贺菌的菌落相似。 上海交通大学医学院
伤寒沙门菌菌落特征(SS) 有些能产生硫化氢的菌株,在SS琼脂上形成中心黑色的菌落。 上海交通大学医学院
伤寒沙门菌KIA(K A-+)MIU(+--) (三)生化反应 乳糖阴性、在三糖铁琼脂中表现为产碱/产酸或产碱/产酸产气,H2S阳性、脲酶阴性。 上海交通大学医学院
沙门菌IMViC试验(-+--) 吲哚阴性、动力阳性、VP 阴性、枸橼酸盐阴性、鸟氨酸阳性。 凡临床分离菌乳糖阳性、吲哚阳性或脲酶阳性者均不考虑为沙门菌。 上海交通大学医学院
(四)抗原结构 • 主要有3种,即菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原及表面抗原(Vi抗原等)。 • 1.O抗原 为多糖-类脂-蛋白质复合物,具耐热性,能耐受100℃2.5h。O抗原共有58种,以阿拉伯数字顺序排列,现已排至第67,但其中有9种被删除,故数字是不连续的。每个沙门菌的血清型可含一种或数种O抗原。 上海交通大学医学院
凡含共同抗原成分的血清型归为一个群,每个群以O加上阿拉伯数字及括号中大写的26个英文字母(A~Z)顺序编排,如O2群(A),O4群(B),O50群(Z)等,Z以后无英文字母标记,直接以 O加数字表示,如O51群~O67群。O抗原是分群的依据(表8-8)。其刺激机体产生的抗体以IgM为主,与相应的抗血清反应时呈颗粒状凝集。 上海交通大学医学院
2.H抗原 • 为不稳定的蛋白质抗原,加热或用乙醇处理均被破坏。沙门菌H抗原有两个相,第一相特异性较高,称特异相,用小写英文字母a、b、c表示,直至z,z以后用z加阿拉伯数字表示,如 z1、z2、z3……z65。第二相抗原为沙门菌所共有,称非特异相,直接用 1、2、3表示。 • 同时有第一相和第二相H抗原的细菌称双相菌,仅有一相者称单相菌。H抗原是定型的依据。其刺激机体产生的抗体以IgG为主,与相应的抗血清呈絮状反应。 上海交通大学医学院
3.表面抗原 • 在沙门菌属中已被证实的表面抗原有Vi抗原、M抗原和5抗原三种,均为不稳定的表面抗原。其中最有意义的是Vi抗原。 上海交通大学医学院
3.表面抗原 • Vi抗原位于菌体的最表层,新分离的伤寒及副伤寒丙沙门菌常带有此抗原,有抗吞噬及保护细菌免受相应抗体和补体的溶菌作用。Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集,故在沙门菌血清学鉴定时需事先加热破坏Vi抗原。带Vi抗原的沙门菌亦可用Vi噬菌体进行分型,有助于流行病学调查和追踪传染源。 上海交通大学医学院
(五)变异性 • 1.S-R变异 自临床标本初次分离的菌株一般都是光滑(S)型,经人工培养、传代后逐渐变成粗糙(R)型菌落。此时菌体表面的特异多糖抗原丧失,在生理盐水中出现自凝。 • 2.H-O变异 是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。 上海交通大学医学院
3.位相变异 具有双相H抗原的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌,称位相变异。 • 在沙门菌血清学分型时,如遇到单相菌,特别是只有第二相(非特异相)抗原时,需反复分离和诱导出第一相(特异相)抗原方能作出鉴定。 上海交通大学医学院
4.V-W变异 • 是指沙门菌失去Vi抗原的变异。 • 初次分离得到的具有Vi抗原、O不凝集的沙门菌称V型菌; V型菌经人工培养,逐渐丧失部分Vi抗原而成为VW型菌,进而丧失全部Vi抗原而成为W型菌。 • Vi抗原部分丧失、既可与O抗血清发生凝集又可与Vi抗血清凝集者称VW型菌; • Vi抗原完全丧失、与O抗血清发生凝集而与Vi抗血清不凝集者称W型菌。 上海交通大学医学院
(六)抵抗力 • 不强。 • 加热 60℃ l小时或 65℃ 15~20分钟即被杀死。在水中能存活 2~3周,粪便中可存活1~2个月。 • 对胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用于制备沙门菌的选择培养基。 上海交通大学医学院
三、临床意义 致病物质 所致疾病 上海交通大学医学院
致病物质 • 侵袭力 Vi-Ag • 内毒素 • 肠毒素 上海交通大学医学院
1.侵袭力 • 有Vi抗原的沙门菌具有侵袭力,能穿过小肠上皮到达固有层。细菌在此部位常被吞噬细胞吞噬,但由于Vi抗原的保护作用,被吞噬后的细菌在细胞内不被破坏,反而在细胞内继续生长繁殖,并随游走的吞噬细胞将细菌带至机体的其他部位。 上海交通大学医学院
2.内毒素 • 沙门菌有较强的内毒素,可引起发热,白细胞改变,中毒性休克,并能激活补体系统,产生多种生物效应,导致一系列病理生理变化。 上海交通大学医学院
3.肠毒素 • 某些沙门菌(鼠伤寒沙门菌)能产生类似大肠埃希菌的肠毒素。 上海交通大学医学院
所致疾病 • 伤寒和副伤寒 • 急性胃肠炎或食物中毒 • 菌血症(或败血症) 上海交通大学医学院
肠热症 • 即指伤寒和副伤寒。最典型的是由伤寒沙门菌引起的伤寒,表现为发热、血培养或肥达反应阳性。 • 肠热症也可由其他沙门菌引起,常表现为轻度发热和腹泻。 上海交通大学医学院
伤寒的发病过程 • 细菌随污染的食品或水经口感染,穿过小肠上皮进入黏膜下组织。细菌在此被吞噬细胞吞噬,但吞噬后不被消灭反在吞噬细胞内繁殖,并随吞噬细胞经淋巴管到达淋巴结 • 在淋巴结内大量繁殖后,经胸导管进入血流(第一次菌血症)。此时病人在临床上出现发热、不适等症状。 上海交通大学医学院
随后,细菌随血流播散至肝、脾、胆囊、肾和骨髓等实质器官中,继续大量繁殖,再次进入血流(第二次菌血症)并随血液扩散至全身各器官及皮肤,病人出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身(内毒素)中毒症状。随后,细菌随血流播散至肝、脾、胆囊、肾和骨髓等实质器官中,继续大量繁殖,再次进入血流(第二次菌血症)并随血液扩散至全身各器官及皮肤,病人出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身(内毒素)中毒症状。 • 胆囊中的细菌随胆汁进入肠腔,可经粪便排出,肾脏中的细菌随尿排出体外。 上海交通大学医学院
本病潜伏期7~20天,典型病程3~4周,发病2周后机体出现免疫反应,通过特异性抗体和致敏淋巴细胞消灭细菌,使疾病好转,但同时也可引起迟发性变态反应,导致肠壁孤立和集合淋巴结的坏死和溃疡,甚至造成肠穿孔而危及生命。本病潜伏期7~20天,典型病程3~4周,发病2周后机体出现免疫反应,通过特异性抗体和致敏淋巴细胞消灭细菌,使疾病好转,但同时也可引起迟发性变态反应,导致肠壁孤立和集合淋巴结的坏死和溃疡,甚至造成肠穿孔而危及生命。 • 携带者:伤寒沙门菌感染过后约3%患者可成为携带者,在粪便中可持续排菌长达1年或1年以上。 上海交通大学医学院
四、微生物学检验 (一)检验程序(二)标本采集 (三)检验方法 上海交通大学医学院
沙门菌检验程序 、 上海交通大学医学院
标本采集 • 根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。 • 伤寒沙门菌分离培养原则上于发病第1周取血,第2、3周取粪便做培养的分离率高,第3周也可取尿液培养,全病程均可作骨髓培养。 • 血清学诊断应在病程的不同时期分别采集2~3份标本。 上海交通大学医学院
检验方法 1.显微镜检查 2.分离培养 3.鉴定 4.血清学诊断 上海交通大学医学院
标本直接检查 1、显微镜检查 革兰阴性杆菌 • 2、抗原检测 将病人标本或肉汤增菌培养物直接用商品胶乳凝集试剂进行试验,可快速检出沙门菌和志贺菌。 上海交通大学医学院
分离培养 • 常规的肠道选择鉴别培养基能有效地分离沙门菌,常用肠道鉴别培养基(MAC或EMB)、选择培养基(SS等)和强选择培养基(孔雀绿和亚硫酸铋琼脂等)。 • 孔雀绿琼脂:分离除伤寒、副伤寒沙门菌以外的沙门菌种 • 亚硫酸铋琼脂:分离伤寒沙门菌 • 强选择培养基:仅适用于暴发流行时。 上海交通大学医学院
在暴发流行或筛选带菌者时,在菌量较少的情况下,可在初次分离时加用亚硒酸盐或GN(Gram negative)增菌肉汤。 上海交通大学医学院
鉴定 • 挑选疑为沙门菌的可疑菌落(EMB上无色或不透明琥珀色;MAC上较小、无色透明;SS上不透明或透明、无色或中央为黑色的菌落;XLD上呈红色或中央为黑色的菌落)。将可疑菌落进一步鉴定到属和种(生化、血清学试验)。 上海交通大学医学院
沙门菌血清学鉴定 上海交通大学医学院
抗体检测(肥达反应) • 用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原,检测受检血清中有无相应的抗体的半定量凝集试验,称为肥达反应(Widal test)。 • 与细菌分离培养同时进行或在前者失败的情况下,能辅助诊断伤寒、副伤寒A、B和C引起的肠热症。 上海交通大学医学院
1.方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀释,每个稀释度需作5个复管,分别加入等量的伤寒沙门菌O、H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的H抗原(以A、B、C表示)进行凝集试验,凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集效价。 上海交通大学医学院
血清学诊断 肥达反应(Widal test) O凝集 (1:20~1:1280,效价1:80) H凝集 (1:20~1:1280,效价1:320) 上海交通大学医学院
2.结果解释 • (1)正常值:各地区有所不同,一般O>1:80,H>1:160,A、B、C>1:80才有临床意义。应在疾病早期及中后期分别采集两次血清,若第二份血清比第一份的效价增高4倍以上具有诊断价值。 • (2)O抗原刺激机体产生的抗体为IgM,出现较早,存在于血清内的时间较短;H抗体为IgG,出现较迟,持续存在的时间较长。因抗原、抗体性质的不同可影响肥达反应的结果,从而使结果的解释变得较为复杂。 上海交通大学医学院
1)O高H不高:可能为疾病的早期;沙门菌属中其他菌种感染引起的交叉反应;或H→O变异的沙门菌引起的感染等。建议一周后复查。如一周后H也有升高,可证实为肠热症。1)O高H不高:可能为疾病的早期;沙门菌属中其他菌种感染引起的交叉反应;或H→O变异的沙门菌引起的感染等。建议一周后复查。如一周后H也有升高,可证实为肠热症。 • 2)H高O不高:可能为疾病的晚期;以往患过伤寒、副伤寒或接受过预防接种;回忆反应等。 上海交通大学医学院
1 2 3 4 沙门菌属 志贺菌属 克雷伯菌属 其他肠杆菌科菌属 肠杆菌科 上海交通大学医学院
志贺菌属 一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 上海交通大学医学院
一、分类 志贺菌属分为A、B、C、D 4群:A群为痢疾志贺菌(S. dysenteriae),B群为福氏志贺菌(S. flexneri),C群为鲍氏志贺菌(S. boydii),D群为宋内志贺菌(S. sonnei)。 上海交通大学医学院
二、细菌特性 • 形态特征 • 培养特性 • 生化反应 • 抗原结构 • 变异性 • 抵抗力 上海交通大学医学院