临床免疫学实验诊断

临床免疫学实验诊断 李擎天e-mail: qingtianli@gmail.com 上海交大医学院附属瑞金医院检验系 Cell: 13816771290 QQ: 84251150 实验诊断学 1

目的要求 • 病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义 • 肿瘤标志物的检测特征及其意义 • 自身免疫性疾病的特点和主要指标 • 酶联免疫吸附试验的原理，方法 • 酶免疫组化技术概念、过程及应用。 • 沉淀试验、凝集试验和标记技术原理 • 细胞因子的检测及临床应用 • T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法 • 移植排斥反应的免疫学监测 • 外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测

临床免疫学实验诊断 • 实验诊断学 • 临床免疫学实验诊断

临床免疫学实验诊断 概述感染性疾病免疫学诊断肿瘤免疫学诊断免疫增殖和免疫缺陷病诊断超敏反应性疾病免疫学诊断自身免疫性疾病诊断移植免疫学临床免疫学检验的自动化 4

临床免疫学与免疫检验 • 免疫检验可分为两部分： • 一部分为利用免疫检测原理与技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质； • 另一部分是利用免疫检测原理与技术检测体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。

免疫学技术发展史

发展进程的主要阶段 • 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） • 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） • 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 • 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程 • 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合

免疫检验涉及的主要技术 • 放射免疫技术化学发光免疫技术 • 荧光免疫技术流式细胞免疫技术 • 酶联免疫技术免疫印迹技术 • 透/散射免疫技术单克隆抗体技术

概述：凝集反应 9

单向琼脂扩散试验 10

免疫比浊法原理 免疫复合物的浓度与透射光的衰减呈正相关抗体抗原测吸光度计算抗原或抗体的含量 11

概述：标记免疫技术 概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检测技术等。特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。 12

免疫荧光技术 13

酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法) 14

斑点金免疫渗滤试验 A B 加尿样除去滤器阴性（未怀孕） D C 加胶体金标记抗体加洗涤液 15

化学发光/电化学发光技术

免疫印迹法图解 电转印至NC膜上置待测血清中，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗； SDS裂解病毒加底物显色聚丙酰胺凝胶电泳 - + 95 68 45 12KD 120 41 24KD 17

临床应用

一感染性疾病免疫学诊断 （一）病毒性肝炎（二）细菌感染（三）病毒感染（四）真菌感染（五）寄生虫感染（六）其他 19

肝炎甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎 20

甲型肝炎免疫学检测 抗体检测 IgM型：常用IgM抗体捕捉ELISA检测法 IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗效果评价抗原检测 ELISA夹心法难以常规开展 21

实验室检查 蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查常用的血清酶及同工酶检查肝纤维化常用标志物检测 22

乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测结果分析 23

丙型肝炎免疫学检测 免疫学：筛选试验 ELISA、放射免疫法抗HCV IgG或IgM。抗HCV IgM早期诊断。确证免疫印迹法 24

丁型肝炎免疫学检测 1）HDV抗原 2）抗HDV IgM 3）抗HDV 25

戊型肝炎免疫学检测 抗体检测 IgM型：诊断指标，ELISA法 IgG型：双份血清，流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价病毒抗原 26

（二）细菌感染免疫学诊断 人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时间，→现症诊断，疾病追溯。 1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等 27

（二）细菌感染免疫学诊断 2.伤寒副伤寒沙门菌IgM抗体：ELISA法阴性或滴度＜1:20；IgM抗体早期诊断价值。 3.伤寒副伤寒沙门菌可溶性抗原测定：乳胶凝集法为阴性。确诊伤寒沙门菌感染。 4.结核分枝杆菌抗体测定：胶体金或ELISA法检测抗体阴性。结核分枝杆菌感染。 28

（三）病毒感染免疫学诊断 TORCH：弓形虫，风疹病毒，巨细胞病毒，单纯疱疹病毒ⅠⅡ型抗体检测早孕时胎儿先天性风疹感染，新生儿致残致畸率可达80％，损害五官神经系统 IgM抗体出现均应做咨询。IgG抗体应注意滴度变化，滴度低且无变化为既往感染，双份血清滴度升高4倍以上。 29

（三）病毒感染免疫学诊断 单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）致畸性、影响新生儿神经系统发育，IgM和IgG抗体的检测， IgM型为近期感染， IgG型多为既往感染。巨细胞病毒﹙CMV﹚造成神经系统及智力的障碍。 EIA法测IgM了解近期感染， IgG流行病学调查。 30

（三）病毒感染免疫学诊断 3嗜异性凝集—传染性单核细胞增多症EB病毒感染：感染后2周抗体效价达高峰，常＞1：56；3个月后消失；效价上升4倍以上；更有诊断价值。 4严重急性呼吸综合征病毒抗体 SARS冠状病毒。抗体阳性表明感染过，阴性到阳性血清转化，或急性期到恢复期抗体效价增高4倍以上，表明有近期感染。 31

（三）病毒感染免疫学诊断

（四）真菌感染免疫学诊断 意义有限 33

（五）寄生虫感染免疫学诊断 弓形虫抗体囊虫抗体测定：人和猪共患的寄生虫病。 [参考值]①ELISA法：血清低于1：64为阴性；脑脊液低于1：8为阴性②间接血凝法：血清低于1：128为阴性；脑脊液低于1：8为阴性。 [临床意义]IgG阳性见于囊虫病，可用作流行病学调查。 34

（六）其他感染免疫学诊断 性传播疾病：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、淋球菌、HIV引起。 1 衣原体抗体测定沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病常见的病原体之一。 ①IgM阳性提示近期有CT感染，有利于早期诊断；②IgG在发病后6－8周出现，持续时间较长；提示曾有过CT感染 35

（六）其他感染免疫学诊断 2 支原体血清学检测：肺炎支原体、解脲人原体、人型支原体和生殖道支原体。单份血清效价＞1：64－128者或双份血清有4倍以上增长者，有诊断意义。 3 梅毒螺旋体抗体测定梅毒螺旋体反应素试验敏感性高；定性试验阳性的情况下，必须进行确诊试验，若阳性可确诊梅毒。 4 淋球菌血清学测定 36

二肿瘤免疫学诊断 血清肿瘤标志物检测细胞表面肿瘤标志物检测患者免疫功能状态评估临床意义：①早期诊断和发现肿瘤；②提示肿瘤发生的部位和组织来源；③判别肿瘤恶性程度；④监测临床治疗效果；⑤监测肿瘤复发。 37

肿瘤标志物 肿瘤组织产生的、可反映肿瘤自身存在的化学物质。大分子蛋白质(包括肽类、激素和酶)，小分子脂类和氨基酸衍生物。 39

肿瘤标志物 标志物的多样性同一肿瘤可有多种标志物。联合检测标志物定位相对特异性同一标志物在多种肿瘤中存在。标志物在某些良性疾病中，一过性升高。（动态诊断）标志物的多变性随病情发展而升高随治疗见效而下降随复发转移再升高（动态随访） 40

肿瘤标志物 细胞肿瘤标志物：位于细胞中的物质或抗原，如激素受体、白血病表型、分子基因等。体液肿瘤标志物：病理情况下，浓度增加时可在血液、尿液或其他体液中测得的物质，如AFP、CA19-9、CEA、CA15-3等。 41

肿瘤标志物 酶类激素类癌胚抗原类糖类抗原 42

肿瘤标志物 ROC曲线假阴性率是指将患者错误地判定为无病的比例（即1-灵敏度）。假阳性率＝1－特异度。 43

血清肿瘤标志物检测 甲胎蛋白属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期 AFP由卵黄囊和肝脏产生，成人肝脏只产生微量 AFP。肝细胞癌、卵黄囊瘤、胚胎性癌的肿瘤标志。妊娠/ 良性肝病 44

血清肿瘤标志物检测 CEA：胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌等广谱诊断、监测、预后、疗效评价大分子糖蛋白，属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期由肝、胃肠及胰合成。肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等都可见血清CEA水平升高。作为消化道癌瘤的标志。 45

血清肿瘤标志物检测 PSA：前列腺癌/前列腺增生监测疗效、判断预后 50岁以上男性每年普查1次 46

血清肿瘤标志物检测 PAP前列腺酸性磷酸酶：前列腺癌诊断、疗效、预后监测酸性磷酸酶可来自正常前列腺细胞，亦可来自癌细胞。血清前列腺酸性磷酸酶(PSAP)的监测在早期前列腺癌的诊断、前列腺癌病情的监测、鉴别诊断方面都有帮助。 47

神经原特异性烯醇化酶（NSE） 同功酶类肿瘤标志物，小细胞肺癌、神经母细胞瘤和神经内分泌肿瘤及脑损伤时升高。待测标本绝对禁止溶血。 NSE高预示生存期短，下降是疗效良好标志。 48

激素类肿瘤标志物 肺癌：NSE、CYFRA21-1、CEA 乳腺癌：CA153、CEA 肝癌：AFP、AFU、CEA、AKP同工酶胰腺癌：CA242、CA199、CA50 卵巢癌：CA125、CEA、CA199、HCG 联合应用可大大提高检出的灵敏度 49

血清肿瘤标志物检测 糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是肿瘤细胞表面的抗原。针对这些抗原的单克隆抗体已成为临床上较为有用的肿瘤标志物，比天然分泌的标志物（如酶和激素）更敏感。 50

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