人类免疫缺陷病毒 肠道病毒 （第二十章第5、9节 P408-412 P371-376 ）

1. 人类免疫缺陷病毒 肠道病毒（第二十章第5、9节 P408-412 P371-376 ） 温州医学院检验医学与公共卫生学院 温州医学院附属第一医院 周铁丽

2. 目 的 掌握人类免疫缺陷病毒的生物学特性及致病性 掌握人类免疫缺陷病毒的检测方法 掌握肠道病毒的生物学性状及抗原特点

3. 概 述 人类免疫缺陷病毒 Human immunodeficiency Virus HIV 获得性免疫缺陷综合征/艾滋病 Acquired Immune Deficiency Syndrome ， AIDS HIV摧毁人体的免疫系统，继发感染和肿瘤 病死率极高

4. 我国艾滋病流行的过程 第一阶段：传入期 1985—1988年7个省报告HIV/AIDS，均为外国人、海外传入第二阶段：播散期 1989 — 1993年21个省报告HIV/AIDS 1989年10月云南发现146例吸毒者感染HIV归国劳工、性病病人、暗娼中发现感染第三阶段（增长期）：1994 —至今截止到2001年底，有31个省报告HIV/AIDS供血（浆）人群HIV感染，呈灶状分布 四川,新疆,广西静脉吸毒者HIV感染迅速上升性传播比例增加，发现母婴传播

5. HIV的命名 1983年法国巴斯德研究所 淋巴腺病综合症相关病毒 （Lymphadenopathy Associated Virus） 1984年，美国R.Gallo和Levy 嗜人T淋巴细胞病毒Ⅲ型病毒（HTLV- Ⅲ ） 爱滋病相关病毒（ARV） 1986年国际微生物学会及病毒分类学会 人类免疫缺陷病毒 (HIV)

6. HIV的分类 HIV属逆转录病毒科（Retroviridae） 慢病毒属，灵长类免疫缺陷病毒亚属 HIV至少可分为三型 HIV-1：为典型的 AIDS病毒，为全球流行的病原体 HIV-2：西部非洲 HIV-3：分离自尼日利亚

7. HIV的形态与结构 病毒呈球形，直径100～120nm 为正股RNA病毒 致密的圆锥状核心 内含病毒RNA分子和酶（逆转录酶、整合酶、蛋白酶） 外层囊膜为双层脂质蛋白膜 表面：两种糖蛋白，gp120组成刺突；gp41组成跨膜蛋白 内面：P17蛋白构成的衣壳 P24为核心蛋白，包裹RNA

8. HIV的基因结构示意图

9. HIV基因结构及编码蛋白 gag基因 P55 P7，P17，P24 使RNA不受外界核酸酶破坏 Pol基因 P34 蛋白酶、整合酶、逆转录酶等 病毒增殖所必需 env基因 gp160 gp120，gp41 gp120与宿主细胞表面CD4受体结合，在病毒与细胞融合中起重要作用 gp41与靶细胞融合，促使病毒进入细胞内，能诱导产生抗体反应

10. HIV调节基因及功能 TaT 基因：增加病毒基因转录率，促进病毒mRNA的翻译 Rev基因：增强gag和env基因的表达 Nef基因：促进gag中P24的表达，抑制整合的病毒转录 Vif基因：加强病毒的感染性 Vpu基因：促进病毒颗粒装配、成熟与释放 Vpr基因：促进感染细胞增殖和分化的作用

11. HIV的复制过程 病毒体 敏感细胞 脱衣壳 基因组带着逆转录酶进入细胞 逆转录构成RNA•DNA杂交体双股环化DNA 在细胞核内整合与细胞基因组成为前病毒 利用细胞RNA多聚酶转录 翻译并糖化为外膜糖蛋白 RNA前体 组成70sRNA，子代病毒基因组 作为mRNA翻译非糖化蛋白 装配 芽生

12. HIV的抵抗力 对热敏感，56℃30min灭活 对消毒剂和去污剂亦敏感 0.1%漂白粉，70%乙醇，0.3%H2O2，0.5%来苏尔处理5分钟灭活病毒 1%NP-40和0.5%triton-X-100能灭活病毒而保留抗原性 对紫外线、γ射线有较强抵抗力 35%山梨醇或50%胎牛血清中-70℃冰冻3个月仍保持活性

13. AIDS的传播途径 性接触传播 血液及血制品传播 输血和血制品 静脉注射毒品 医源性传播 母婴传播

14. AIDS发病及转归 持续2-3周 2-4周 急性期（窗口期） HIV侵入机体 HIVAg+HIVAb- （CD4+，CD4+/CD8+ ，HIVAg+） 临床潜伏期 HIVAg-HIVAb+ 1-1.5年 AIDS相关 综合征期 8-10年 死亡 AIDS

15. HIV的检测 检测HIV病毒本身 HIV P24抗原, HIV DNA, HIV RNA, HIV分离培养等 检测HIV抗体 检测HIV抗体是常规使用的HIV诊断方法, 其他方法一般作为抗体检测方法的验证和补充

16. HIV抗体检测 是常规使用的诊断方法 方法学 ELISA试剂, 快速试剂(金标记, 锡标记)等 检测的标本 血清和血浆, 唾液, 尿液

17. 常用的HIV抗体检测试剂类型 ELISA 间接法 竞争抑制法 双抗原夹心法 快速法 胶体金 渗滤法 层析法 间接、夹心 凝 集 PA HA 确证用试剂 免疫印迹法 条带印迹法 免疫荧光法 放免沉淀法

18. 检测HIV抗体(ELISA法) 原理:间接法 (第1代,第2代试剂), 双抗原夹 心法(第3代试剂). 判断结果有客观依据(临界值)，可自动化操作. 可检测多种标本(血清,血浆,唾液,尿液) 使用最广泛

19. 检测HIV抗原(P24) 方法 ELISA抗体夹心法 优点 比抗体检出时间提前大约1周, 进一步缩短窗口期 用途 婴儿或窗口期HIV感染的诊断 献血员筛选 监测疗效和病程进展

20. 1996年以来美国实施对献血员进行HIV P24检测取得的成果 I估计平均将HIV抗体检测的窗口期缩短了至少一周 II估计每年检测出4-6例HIV（1+2）抗体无法检测出的已 感染HIV的献血员； III每年估计避免了7-11次已感染的输血或成份输血； IV将美国因输血而感染HIV的风险由原来的114，000分之一 降至了825,000分之一

21. 同时检测P24抗原和HIV抗体 第4代试剂 包被和标记的分别是P24抗原的单克隆抗体, HIV-1gp160,HIV-1、0 gp41,HIV-2 gp36.分别用以检出P24抗原,HIV-1 M群,O群和HIV-2的抗体 检出时间提前大约7天

22. HIV抗体确证试验 目的： 排除初筛的假阳性 方法： 免疫印迹法(WB)， 免疫荧光法(IFA)， 放射免疫沉淀法 检测的是不同HIV抗原的抗体 结果： HIV抗体阳性(Positive), HIV抗体阴性(Negative), HIV抗体可疑(Indeterminate)

23. HIV抗体确认的标准 阳性:二条env带或一条env带加一条p24带 阴性: 无任何条带 可疑:有一个或几个条带但又不满足阳性标准

24. 病毒载量测定的意义 预测疾病的进程: 高病毒载量预示病程快速发展 监测疗效: 有效的抗病毒治疗应该能够显著降低病毒载量 早期诊断: 检测HIV RNA可以使窗口期缩短至大约1周

25. 肠道病毒（enterovirus） 归属于小RNA病毒科（Picornaviridae） 有67个血清型 粪-口途径传播 主要侵犯神经系统、肌肉等 病毒体呈球形，无包膜 在灵长类上皮样细胞中生长最好 病毒在胞浆内复制，迅速引起细胞病变

26. 人类肠道病毒种类 脊髓灰质炎病毒（poliovirus） 柯萨奇病毒（coxsackievirus） 埃可病毒（ECHO） 新肠道病毒

27. 脊髓灰质炎病毒（poliovirus） 二十面立体对称，无包膜 单股正链RNA，两端为保守的非编码区，中间为连续的开放阅读框架（ORF） 四种衣壳蛋白VP1~VP4 D或N抗原 具有型特异性，分三型 C或H抗原 共同抗原

28. 致病机制 先在局部粘膜和淋巴结中增殖 以上呼吸道，咽喉，肠道为侵入门户 粪－口途径传播 入血，形成第一次病毒血症 增殖后形成第二次病毒血症及临床症状 带有受体的靶组织

29. 临床特征 90％的感染为隐性感染 约5％出现流产感染 1％～2％为非麻痹性脊髓灰质炎或无菌性脑膜炎 仅约0.1%出现永久性弛缓性肢体麻痹 极少数发展为延髓麻痹 ----小儿麻痹症的病原体

30. 防治原则 人工主动免疫 IPV （注射死疫苗） OPV （口服减毒活疫苗） 类似自然感染途径 优点 刺激肠道局部产生SIgA 产生间接免疫

31. 柯萨奇病毒、埃可病毒和新肠道病毒 形态及生物学形状与脊髓灰质炎病毒相似 识别的受体在组织细胞中分布广泛 致病特点是在肠道中增殖，却很少引起肠道疾病 不同的型别可引起相同的临床综合症，同型病毒也可引起不同的临床疾病

32. 柯萨奇病毒（Coxsackie Virus） 生物学特性： 28nm球形颗粒，分A组和B组 A组病毒：诱发新生乳鼠弥漫性骨胳肌炎， • 导致驰缓性麻痹 • B组病毒：诱发新生乳鼠局灶性骨胳肌炎， • 导致痉挛性麻痹 预防尚无疫苗可用

33. 致病性及微生物学检查 、 无菌性脑膜炎 粪-口感染 诱 发 病毒性心肌炎 胸痛 糖尿病 标本-----咽喉漱液、粪便等 微生物学检查 分离病毒及血清学检查

34. 埃可病毒（ECHO Virus） 不诱发新生乳鼠病变 诱发婴儿腹泻和无菌性脑膜炎等人类疾患

35. 再 见