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FMNL2 ：通过 RhoA/ROCK 信号通路促进大肠癌细胞运动和转移

FMNL2 ：通过 RhoA/ROCK 信号通路促进大肠癌细胞运动和转移. 梁莉，朱曦龄，曾元凤，丁彦青 南方医科大学病理学系 广州 510515. 研究背景. 基因表达谱. SW620 SW480/M5. FMNL2 增高. 转移是导致大肠癌患者死亡的主要原因，转移相关基因的功能学研究是当今肿瘤转移发生、发展研究的重要内容。. 1. SW620 SW480 SW480/M5 提示 FMNL2 与大肠癌的转移相关. 2. FMNL2 基因 的编码产物是属于 Formin 蛋白家族中的 DRFs 亚类的 成员 , 这是一类 肌动蛋白细胞骨架的

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FMNL2 ：通过 RhoA/ROCK 信号通路促进大肠癌细胞运动和转移

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  1. FMNL2：通过RhoA/ROCK信号通路促进大肠癌细胞运动和转移FMNL2：通过RhoA/ROCK信号通路促进大肠癌细胞运动和转移 梁莉，朱曦龄，曾元凤，丁彦青 南方医科大学病理学系 广州510515

  2. 研究背景 基因表达谱 SW620 SW480/M5 FMNL2增高 转移是导致大肠癌患者死亡的主要原因，转移相关基因的功能学研究是当今肿瘤转移发生、发展研究的重要内容。 1 SW620 SW480 SW480/M5 提示FMNL2与大肠癌的转移相关 2

  3. FMNL2基因的编码产物是属于Formin蛋白家族中的 DRFs亚类的 成员, 这是一类肌动蛋白细胞骨架的 重要调节因子，下图是它的结构示意图: CC GBD DID DD FH1 FH2 DAD regulation G-actin recruitiment Actin nucleation Filament assembly Regu- lation Rho-GTP

  4. 2 1 • 近年来研究表明，DRFs家族成员（如:Dia1,DAAM1 • 等）通过调节细胞骨架的重建在肿瘤细胞的侵袭和迁 • 移等方面起到了重要的作用 • 目前有关FMNL2的文献仅有几篇，是个功能未知基因， • 我们首次探讨了其在大肠癌转移的作用

  5. n-fold FMNL2 mRNA expression related to SW480 一、FMNL2在不同转移能力大肠癌细胞株中的表达 LS174T HT29 SW480 SW620 SW480/M5 LoVo HT29 SW480 SW620 SW480/M5 LoVo

  6. 二、FMNL2在各阶段大肠癌组织中的表达 A:FMNL2在正常大肠黏膜中的表达; B:FMNL2在未发生转移的大肠癌中的表达; C:FMNL2在发生转移的大肠癌中的表达; D:FMNL2在淋巴结转移癌中的表达 DAB染色，苏木素复染 ×200

  7. 1 P=0.01 P<0.01 免疫组化统计结果 表1 FMNL2蛋白在大肠正常黏膜、癌及淋巴结转移癌中的表达 － + (30) (73%) (27%) (75) (45)

  8. 表 2 FMNL2在不同类型大肠癌组织中的表达分布 浸润程度 P>0.05 分化程度 P>0.05 转移情况 P=0.031

  9. 2 荧光定量PCR结果 n-fold FMNL2 expression related to corresponding normal tissue P＝0.017 P＝0.407 P＝0.636 Well or Moderate Poor Profound layer Superficial layer Non-metastasized Metastasized FMNL2的过表达与大肠癌的发生、转移呈正相关

  10. 三、FMNL2基因沉默对大肠癌细胞体内外实验的影响三、FMNL2基因沉默对大肠癌细胞体内外实验的影响

  11. 1 2 体外生长曲线 平板克隆形成实验

  12. 3 4 同质粘附实验 对FN粘附实验

  13. 细胞体外运动实验 5

  14. 6 细胞体外侵袭实验 FMNL2基因沉默后，细胞在体外的运动、 侵袭力降低，粘附能力没有明显的改变

  15. 7 裸鼠皮下成瘤实验

  16. 8 脾注射法体内转移实验 FMNL2基因沉默后，细胞在裸鼠体内的皮下成瘤和转移能力降低

  17. 四、FMNL2在Rho信号通路中的作用 RhoA GTP GDP RhoA P－ LIMK G蛋白耦联受体 P－ Cofilin Rock LPA P－MLC RhoGTPase是一种重要的信号分子，RhoA/Rock信号 通路在细胞的运动、迁移方面起着重要的作用 RhoGEF 细胞的运动 转移、侵袭 微丝骨架 的聚合 • DRFs蛋白是一种RhoGTPase的效应蛋白，具有与其 • 相结合的结构域，是Rho信号转递链的组成部分

  18. FMNL2的沉默能抑制大肠癌细胞RhoA/Rock信号通路

  19. FMNL2不仅是RhoA的效应子，还在其上游发挥调节作用（正反馈？？）

  20. 小 结 LPA RhoA GTP P－LIMK P－MLC P－Cofilin Rock 免疫共沉淀筛选与FMNL2作用的四种RhoGEF或酵母双杂交鉴定新的FMNL2相互作用蛋白；利用RNAi或荧光素酶报告系统观察其对Rho信号通路的影响 ?蛋白 正反馈 加入RhoA阻断 剂C3转移酶 Rho pull-down 试验检测RhoA、RhoB、RhoC活性 转染或干扰 （已完成）FMNL2基因 FMNL2 加入ROCK阻 断剂Y27632 F-肌动蛋白荧光定量分析 F-actin Western Blotting检测P-MLC、P-LIMK1、P-cofilin活性 加入SRF活化阻断 剂Latruncnlin B MAL/SRF转录活性，Westerm Blotting检测MAL MAL-SRF 微丝骨架的聚合 本研究受国家自然科学基金（No30870945）资助 细胞的运动、转移、侵袭

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