1 / 42

IMUNOCHEMIE

IMUNOCHEMIE. CÍLE LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY. Vyhledávání nových případů onemocnění Potvrzení diagnózy Monitorování nemocných. LABORATORNÍ DIAGNOSTICKÝ PROCES. A. PREANALYTICKÁ ČÁST:. Nezbytná pro správné provedení laboratorního vyšetření Zahrnuje:

leland
Download Presentation

IMUNOCHEMIE

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. IMUNOCHEMIE

  2. CÍLE LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY Vyhledávání nových případů onemocnění Potvrzení diagnózy Monitorování nemocných

  3. LABORATORNÍ DIAGNOSTICKÝ PROCES A. PREANALYTICKÁ ČÁST: Nezbytná pro správné provedení laboratorního vyšetření Zahrnuje: Přípravu nemocného, podmínky odběru materiálu, skladování, transport a zpracování v laboratoři před vlastním testem

  4. B. ANALYTICKÁ ČÁST vlastní analytický proces prováděný v laboratoři Zahrnuje: Přípravu vzorku, měření, výpočet výsledků, validaci výsledků, vnitřní a vnější kontrolu kvality

  5. C. POSTANALYTICKÁ ČÁST Následuje po vlastním výkonu Zahrnuje: interpretaci výsledků ve vztahu ke klinickému stavu pacienta, anamnéze konzultace s lékařem

  6. IMUNOCHEMICKÁ REAKCE: • specifická interakce • mezi antigenem (Ag) • a protilátkou (Ab) • protilátka – jedinečné specifické činidlo • cíleně reagující s jedinou složkou • (antigenem) ve složitésměsi

  7. ANTIGEN (imunogenní molekula) PROTILÁTKA cíl diagnostiky(průkaz Ag) -průkaz virové částice, bakterie nebo její části, autoantigenu, hormonu, nádorového markeru aj. prostředek diagnostiky (reagencie, činidlo) -získá se imunizací zvířete cílovým Ag   prostředek diagnostiky (reagencie, činidlo) -virová částice, bakterie nebo její část, alergen, autoantigen aj. cíl diagnostiky (průkaz Ab) - stanovení specifické Ab odpovědi proti virům, bakteriím nebo jejich části, alergenům, autoantigenům (autoprotilátek) aj.

  8. IMUNOCHEMICKÁ REAKCE: • základní charakteristikou této reakce je její specifita • vztah antigen-protilátka je ovlivněn podmínkami reakce • a prostředím (pH, iontová síla, teplota), druhem antigenu aj. • klasické „sérologické“ metody (precipitace, aglutinace, • hemaglutinace a KFR) mají tradici zejména • v mikrobiologii a hematologii • imunochemické reakce se uplatňují také v biochemii, • nukleární medicíně, hematologii, patologii aj.

  9. AGLUTINACE: • Ag je korpuskulární • vizuální hodnocení • v roztoku • kvalitativní (ano/ne) • kvantitativní (titrace) • průkaz specifických protilátek • v infekční sérologii

  10. AGLUTINACE

  11. PRECIPITACE: • Ag je solubilní • v gelu, vizuální hodnocení • v roztoku, přístrojové hodnocení • Stanovení množství precipitátu: • PŘÍMO: nefelometrie, turbidimetrie • NEPŘÍMO (metody s následnou detekcí): • pomocí reakcese sekundární protilátkou značenou: • enzymem – enzymová imunoanalýza EIA • izotopem - radioimunoanalýza RIA • luminoforem – luminiscenční imunoanalýza LIA • fluorochromem – fluorescenční imunoanalýza FIA

  12. P R E C I P I T A C E

  13. P R E C I P I T A Č N Í K Ř I V K A Množství antigenu

  14. TURBIDIMETRIE, NEFELOMETRIE precipitace v roztoku – přímé měření množství precipitátu - zákal kvantitativní stanovení (kalibrační křivka) výsledky poskytují velmi rychle lze je plně automatizovat, vhodné pro velké série vzorků používají se pro stanovení proteinů v séru a likvoru (imunoglobuliny, CRP, prealbumin, transferin aj.)

  15. JEDNODUCHÁ RADIÁLNÍ IMUNODIFÚZE (MANCINI) • JRID, SRID • precipitace v gelu • gel – hydratovaný polysacharid • antisérum rozptýleno v gelu • antigen difunduje z jamky do gelu • - vzniká precipitační prstenec • obsah prstence odpovídá koncentraci Ag • kvantitativní stanovení (kalibrační křivka) • jednoduchá a levná technika • dlouhé inkubace (výsledky za 48-72 hod.) • nelze automatizovat, vhodná pro menší série vzorků (IgG1-4, IgD, vzácné složky komplementu C2, C5, C1q atd.)

  16. RADIÁLNÍ IMUNODIFÚZE

  17. PŘÍKLAD PRO POUŽITÍ IMUNOCHEMICKÝCH TECHNIK ANALÝZA IMUNOGLOBULINŮ Normální hodnoty u dospělých IgG 7– 19 g/l IgA 0,8 - 4,8 g/l IgM 0,5 - 3 g/l IgD 0,01 - 0,2 g/l IgE 0 - 200kUI/l

  18. SNÍŽENÉ HLADINY IMUNOGLOBULINŮ • Imunodeficitní stavy: • agamaglobulinemie • hypogamaglobulinemie ZVÝŠENÉ HLADINY IMUNOGLOBULINŮ • hypergamaglobulinemie

  19. HYPERGAMAGLOBULINÉMIE • zvýšení hladiny imunoglobulinové frakce séra: • polyklonální • oligoklonální • monoklonální • Kryoglobulinémie • Amyloidóza

  20. POLYKLONÁLNÍ HYPERGAMAGLOBULINÉMIE (gamapatie) • Zvýšení hladin dvou a více imunoglobulinových tříd - charakteristický elektroforetický obraz séra - výrazné široké zvýšení v gama oblasti • jaterní onemocnění, zvláště virové • a autoimunitní hepatitidy, cirhóza • chronické zánětlivé procesy • (např Crohnova choroba, ulcerózní kolitida aj.) • imunopatologické stavy (autoimunita) - Sjogrenův syndrom, SLE, revmatoidní artritida • systémové maligní procesy

  21. OLIGOKLONÁLNÍ HYPERGAMAGLOBULINÉMIE (gamapatie) • Výrazné odlišitelné zóny (proužky) v oblasti gamaglobulinů při elektroforéze • Nejčastější výskyt: • protilátky proti antigenům krevních skupin • virové infekce • - protilátky proti povrchovým antigenům • konstantní stimulace vybranými antigeny • - autoimunitní choroby, parazitózy • onemocnění centrální nervové soustavy • - lokální humorální syntéza imunoglobulinů • v likvoru

  22. MONOKLONÁLNÍ HYPERGAMAGLOBULINÉMIE (gamapatie) • Přítomnost monoklonálního imunoglobulinu (paraproteinu, M-komponenty, M-gradientu) v séru • Obsah této frakce je syntetizován jedním • klonem myelomových buněk • (maligně změněné zralé B-lymfocyty) • M-komponenta je tvořena imunoglobulinem jednoho izotypu, stejného typu lehkého řetězce • a stejné antigenní specifity • Mnohočetný myelom, Waldenstrőmova makrogobulinémie, MGUS aj.

  23. Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y NORMÁLNÍ A ABNORMÁLNÍ DIFERENCIACE B -LYMFOCYTŮ PLAZMAT. BUŇKA ZRALÝ B-LYMFO NEZRALÝ B-LYMFO CD 38 POLY-KLONAL. Ab Ag PODNĚT, CD 19 PŘESKUPENÍ TdT Ig GENU BcR CD 19 MYELOMOVÁ BUŇKA Y MALIGNÍ TRANSFORMACE CD 56 CD 38 MONO- KLONAL. Ab (PARAPROTEIN) AKUMULACE GENOVÝCH PORUCH

  24. TYPY MONOKLONÁLNÍCHGAMAPATIÍ • MGUS • monoklonální gamapatie nejasného významu • nízké koncentrace paraproteinu • dříve klasifikovány jako benigní paraproteinémie • dlouhodobě (roky) se koncentrace paraproteinu významně nemění (nestoupá) • žádný nález na skeletu • Mnohočetný myelom (MM) • maligní onemocnění • plasmocytom lokalizován v kostní dřeni • osteolytické léze • vysoká koncentrace paraproteinu (i v moči)

  25. TYPY MONOKLONÁLNÍCHGAMAPATIÍ • Makroglobulinémie (Waldenstrőmova) • lymfom infiltrující lymfoidní tkáně • paraprotein v IgM třídě • velmi vysoká koncentrace paraproteinu • - ovlivňuje viskozitu séra • Nemoc z lehkých řetězců • Nemoc z těžkých řetězců

  26. DIAGNOSTIKA MONOKLONÁLNÍCHGAMAPATIÍ • SCREENING • elektroforéza séra – detekce přítomnosti • paraproteinu (M gradientu)– zóny s vysokou denzitou • KVANTIFIKACE • denzitometrické měření z elektroforézy • relativní podíl paraproteinu z celkového • elektroforetického obrazu v % • měření celkového proteinu v séru • výpočet koncentrace paraproteinu v g/l

  27. A. SCREENING: ELEKTROFORÉZA • proteiny mají el. Náboj • podle náboje se rozdělí v elektrickém poli • (albumin, , , - frakce ) • orientační informace o změnách • v kvantitativním zastoupení jednotlivých frakcí • možnost denzitometrické kvantifikace

  28. E L E K T R O F O R É Z A

  29. + - LEGENDA: vzorek č. 3: susp. paraprotein vzorek č. 7, 8: susp. paraprotein ostatní vzorky: polyklonální imunoglobuliny (norm. nález) ELEKTROFORÉZA VZORKŮ SÉRA

  30. B. TYPIZACE • určení typu těžkého (α,γ,μ,ε,δ) a lehkého řetězce (κ,λ) • starší metoda kombinace elektroforézy a imunodifúze • paraprotein z elektroforeticky rozděleného séra • difunduje v gelu proti poly- nebo monospecifickému • antiséru a výsledek se hodnotí ze vzhledu • precipitační zóny IMUNOELEKTROFORÉZA

  31. I M U N O E L E K T R O F O R É Z A

  32. IMUNOFIXACE • moderní postup • sérum je elektroforeticky rozděleno • v gelu v několika drahách • na povrch gelu je naneseno do každé dráhy • jiné monospecifické antisérum • (proti IgG, IgA, IgM, kappa, lambda) • imunoglobuliny ze séra tvoří s monospecifickým • antisérem imunokomplex (precipitát), • který po odmytí nezreagovaných komponent • je možno barvit a pozorovat • imunofixace – citlivější a jednodušší metoda • než imunoelektroforéza

  33. I M U N O F I X A C E

  34. IMUNOFIXACE VZORKU SÉRA ZDRAVÉ OSOBY + - LEGENDA: sloupec č. 1: elektroforéza séra další sloupce: imunochemický průkaz jednotlivých těžkých a lehkých řetězců imunoglobulinů, je zřetelná polyklonální produkce

  35. IMUNOFIXACE VZORKU SÉRA NEMOCNÉHO S PARAPROTEINEM IgM  + - LEGENDA: sloupec č. 1: monoklonální pruh na pozici 6 sloupec č. 4 a 6: imunochemický důkaz přítomnosti paraproteinu IgM 

  36. IMUNOFIXACE VZORKU SÉRA NEMOCNÉHO S PARAPROTEINEM IgG  + - LEGENDA: sloupec č. 1: monoklonální pruh na pozici 6 sloupec č. 2 a 6: imunochemický důkaz přítomnosti paraproteinu IgG  INTERPRETACE: susp. mnohočetný myelom IgG 

  37. IMUNOFIXACE VZORKU SÉRA NEMOCNÉHO S PARAPROTEINEM IgG  + - LEGENDA: sloupec č. 1: monoklonální pruh na pozici 4 sloupec č. 2 a 6: imunochemický důkaz přítomnosti paraproteinu IgG  INTERPRETACE: paraprotein IgG 

  38. IMUNOFIXACE VZORKU SÉRA NEMOCNÉHO S PARAPROTEINY IgG  a IgA  + - LEGENDA: sloupec č. 1: monoklonální pruhy na pozici 4 a 6 sloupec č. 2 a 6: imunochemický důkaz přítomnosti paraproteinu IgG  sloupec č. 3 a 6: imunochemický důkaz přítomnosti paraproteinu IgA  INTERPRETACE: dva paraproteiny IgG , IgA  KOMENTÁŘ: přítomnost dvou klonů myelomových buněk

  39. IMUNOFIXACE VZORKU SÉRA NEMOCNÉHO S PARAPROTEINEM IgM  + - LEGENDA: sloupec č. 1: monoklonální pruh na pozici 4 sloupec č. 4 a 5: imunochemický důkaz přítomnosti paraproteinu IgM INTERPRETACE: susp. Waldenströmova makroglobulinemie

More Related