ברמת החלבון

1. על מנת לוודא שלא הTc גרם ישירות לשינוים בביטוי הגנים לnucleolin ול nucleophosmin, ביצענו את אותו ניסוי עם תאי SHEP2. ואכן לא נצפו שינוים בביטוי הגנים. • נפח התא נמדד לפני ובזמן הטפול בTc וכן לאחר הסרתו. אך לא נצפו שינויים בנפח התא! מה שמבטל את האפשרות שנפח התא הוא זה גרם לשעתוק יתר של גנים אלו.

2. אכן, בתאי SHEP21N רמת החלבונים שנבדקו גבוהה יותר. במהלך הטיפול ב Tc רמתם יורדת, אך חוזרת לעצמה לאחר 7 ימים ללא Tc. ברמת החלבון

3. בעקבות הממצא שnucleolin ו nucleophosmin נמצאים ברמות גבוהות בתאי SHEP21N בדקנו האם רמת ה rRNA בתאי SHEP21N גבוהה יותר. Total RNA בודד מ-10 דגימות, כל אחת מהן מ 6^10 תאים, ונתגלה כי התפוקה בתאי SHEP21N גבוהה ב 45% יותר מאשר בתאי SHEP2. rRNA • ניתוח המבוסס על צפיפות של ה bands של 28S rRNAוS18 אישר שעליה זו נגרמת מהבדלים ברמות rRNA.

4. מדוע קצב סינטזת חלבונים לא עלה? • נרצה לבדוק האם קצב סינטזת החלבונים עולה. בודקים זאת בעזרת met מסומן, אך אין הבדלים בין שני התאים. • מסקנה: Nmyc מעלה את תוכן הrRNA אולם לא את קצב סינטזת החלבונים. שני הסברים אפשריים הם: • סינטזת החלבונים בתאי SHEP21N יתכן והיא מוגבלת ע"י פקטור שאינו מוגבר ע"י Nmyc. • יתכן וכבר בתאי SHEP2 רמת סינטזת החלבונים היא מקסימלית, ולכן Nmyc לא יכול להגבירה עוד.

5. In vivo • 159N – תאי גידול נוירובלסטומה עם הגברה וביטוי של Nmyc.52N – נוירובלסטומה עם עותק יחיד של Nmyc וחסר את ביטויו. • יצרנו לשני תאים אלו ספריות SAGE. • מצאנו כי Nmyc היה מיוצג ע"י 16 tags ב159N ו-0 Tags ב52N. • ניתחנו האם גני המטרה של Nmyc שזוהו בתאי SHEP הינם גם גני המטרה של Nmyc ב 159N. בדקנו את 56 הגנים לחלבונים הריבוזומלים שהיו בעלי שיעתוק יתר בתאי SHEP21N. • ואכן נתגלה כי ביטויי הגנים לחלבונים ריבוזומלים היה גבוה יותר ב-62% בתאי 159N.

6. גנים נוספים הקשורים לסינטזת חלבונים נמצאו בשעתוק יתר. כמו כן הוגבר ביטויים שלnucleophosmin, nucleolin, פקטורי איניציאצית ואלונגצית תרגום. התאמה פחות עקבית נמצאה עבור החלבון הריבוומלי 6S.הדבר מרמז על כך שמלבד Nmyc יש פקטורים נוספים המווסתים את ביטויו. לעומתם, לא נצפה שינוי בגנים המעורבים בגליקוליזה. Neuroblastoma tumors

7. יש לשים לב שcell line SJNB12 מבטא את cmyc והוא מגביר את אותם גני מטרה של Nmyc שנבדקו. נצפתה קורלציה די טובה בין Nmyc לבין הגנים nucleophosmin, ו nucleolin. Neuroblastoma cell line

8. האם גני המטרה של Nmyc שזוהו במאמר זה הינם גם גני מטרה של cmyc? לשם כך ניתחנו cell line מלנומה IGR39D שעברו טרנספקציה עם cmyc, וכאלו שלא עברו. ניתוח northern blot עם total RNA עם אותם 19 גלאים שנבדקו בתאי SHEP מראה, כי 8 מתוכם הוגברו גם ע"י cmyc. ניתוח cell line מלנומה IGR39D • מכך ניתן להסיק שקיימת התאמה של כ-40% בין גני המטרה שלהם במערכת התאים שנבדקה כאן.

9. ההשפעה על מכניזם זה יכולה להסביר את העליה במסת התא הנחוצה לשם שמירה על נפח תא הדרוש לשם התרבות התא. המידע במודלים למערכות אנימליות, בפיברובלסטים נורמליים ובתאי גידול נוירובלסטומה, כולם מעידים על כך שהנעת מכניזם סינטזת החלבונים הוא פונקציה עיקרית של גני myc. מילים אחרונות על myc