1 / 22

基因工程载体 和工具酶

基因工程载体 和工具酶. 载体 (Vectors) 1. 含义： 基因工程中，携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具称为载体。. 载体 (Vectors) 2. 分类 克隆载体 : 克隆一个基因或 DNA 片断 表达载体 : 用于一个基因的蛋白表达 整合载体 : 把一个基因插入到染色体组中. 克隆载体 (Cloning vector). 质粒 (plasmid)  噬菌体载体 (  phage) 粘粒 (cosmid) 细菌人工染色体 (Bacterial artificial chromosome, BAC)

massimo-neeson
Download Presentation

基因工程载体 和工具酶

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 基因工程载体 和工具酶

  2. 载体 (Vectors) 1.含义： 基因工程中，携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具称为载体。

  3. 载体 (Vectors) • 2.分类 • 克隆载体: 克隆一个基因或DNA片断 • 表达载体: 用于一个基因的蛋白表达 • 整合载体: 把一个基因插入到染色体组中

  4. 克隆载体 (Cloning vector) • 质粒 (plasmid) •  噬菌体载体 ( phage) • 粘粒 (cosmid) • 细菌人工染色体 (Bacterial artificial chromosome, BAC) • 酵母人工染色体 (Yeast artificial chromosome, YAC)

  5. 质粒 (plasmid)载体 质粒 是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。大小约为数千碱基对。常有1-3个抗药性基因，以利于筛选。

  6. 细菌基因组 DNA 和质粒 DNA 细菌 基因组 DNA 质粒 DNA 闭环质粒 DNA 超螺旋质粒 DNA

  7. 质粒DNA的构型 • SC型 共价闭合环形DNA • OC型 开环DNA • L 型 线性DNA

  8. L OC SC

  9. 质粒 (plasmid)载体 • 克隆的质粒载体 允许外源的DNA插入，储存。 主要是DNA水平上的操作。 • 基因表达的质粒载体 允许外源DNA的插入、储存和表达。

  10. 克隆质粒 (Cloning plasmid) • 特点 • 低分子量且高拷贝数质粒。 • 含有一个或几个可供选择的标记。 • 含多克隆位点(Multiple cloning site, MCS) 。

  11. （4363bp）

  12. pBR322质粒载体 “P”表示是一种质粒； “BR”表示两位主要构建者姓氏的头一个字母“F.Bilivar和R.L.Rodriguez”; “322”表示实验编号。

  13. pBR322的构建 为改进转化子筛选技术，并具有相对小的分子量、高拷贝数、外源基因插入不影响质粒的复制功能、多克隆位点（多种限制酶的单一切割位点）、质粒的稳定性（克服质粒的结合转移能力）

  14. pBR322质粒载体的优点： 1.具有较小的分子量 2.具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号

  15. Lac promoter MCS(Multiple cloning sites, 多科隆位点） Ampr pUC18 (3 kb) lacZ’ ori

  16. pUC质粒载体的形体图

  17. pUC质粒载体的优点 1.具有较小的分子量和更高的拷贝数 2.适用于组织化学检测重组体 3.具有多克隆位点MCS区段．

  18. ApR: Ampicillin resistance gene rep (ori): replication origin lacZ: N-terminal -galactosidase MCS: multiple cloning sites MCS (pUC18 )

More Related