第 5 章黄酮类化合物

第5章黄酮类化合物 波谱学特征厦门大学医学院药学系丘鹰昆

色谱法对黄酮类化合物的检识 • 紫外光谱特征 • 1H-NMR • 13C-NMR • EI-MS：R-DA开裂，判断A、B环取代基团黄酮类化合物的波谱学特征

PC • TLC • 硅胶 • 聚酰胺一、色谱法在黄酮鉴别中应用

双向色谱 • 第一相：醇性展开剂 • BAW: n-BuOH-HAc-H2O (4:1:5, 上层) • TBA: t-BuOH-HAc-H2O (3:1:1) • 第二相：水或水性展开剂 • 2%～6% HAc • 3%NaCl • HAc-浓HCl-H2O（30：3：10） • 检视：UV / 氨熏色变 / 2%AlCl3 • 用于分离黄酮类及其苷的混合物 1、PC法

醇性展开剂 • BAW: 苷元 (>0.7) 〉单糖苷〉双糖苷 (<0.7) • 水性展开剂 • 2%-8% HAc、3%NaCl • 苷元 (≈ 0) < 单糖苷 < 双糖苷 (>0.5) • 3%-5%HAc • 游离黄酮（醇）、查尔酮：Rf < 0.02 • 游离二氢黄酮（醇）、二氢查尔酮：Rf 0.1-0.3 Rf值

黄酮苷元 • CHCl3-MeOH（85：15， 70：5） • 甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）——常用 • 苯-甲醇（95：5） • 苯-甲醇-醋酸（35：5：5） • 甲苯-氯仿-丙酮（40：25：35） • 丁醇-吡啶-甲酸（40：10：2） • 黄酮衍生物（甲醚化或乙酰化） • 苯-丙酮（9：1） • 苯-乙酸乙酯（75：25） 2、硅胶TLC

乙醇-水 (3:2) • 水-乙醇-乙酰丙酮 (4:2:1) • 水-乙醇-甲酸-乙酰丙酮（5:1.5:1:0.5） • 水饱和的正丁醇-醋酸（100:1，100:2） • 丙酮-水（1:1） • 丙酮-95%乙醇-水（2:1:2） • 95%乙醇-醋酸（100:2） • 苯-甲醇-丁酮（60:20:20） 3、聚酰胺TLC

峰带II 峰带I • 基本峰带 • 峰带I：300~400 nm，源于桂皮酰体系的π→ π*跃迁 • 峰带II：220~280 nm，源于苯甲酰体系的π→ π*跃迁二、黄酮类化合物的紫外光谱

黄酮及黄酮醇类 • 查尔酮及橙酮类 • 异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇类 1、在MeOH中的UV特点

共性：带Ⅰ、带Ⅱ均较强 • 区别：带Ⅰ位置不同 • 黄酮：304~350 nm • 黄酮醇 • 3-OH游离：352~385 nm • 3-OH取代：328~357 nm 1) 黄酮及黄酮醇类

Ⅰ Ⅱ • 共性 • 带Ⅰ很强，为主峰 • 带Ⅱ较弱，为次强峰 • 区别：带Ⅰ峰位不同 • 查儿酮：340～390nm • 橙酮： 370～430nm 2) 查尔酮及橙酮类

Ⅱ Ⅰ • 共性 • 带Ⅱ为主峰 • 带Ⅰ很弱，为主峰的肩峰 • 区别：带Ⅱ峰位不同 • 异黄酮：245~278 nm • 二氢黄酮 (醇)：270~295 nm 3) 异黄酮、二氢黄酮(醇)类

Ⅰ、Ⅱ均较强 峰带Ⅰ 　黄酮：304~350 nm 　黄酮醇：352~385 nm Ⅰ主峰，Ⅱ为次强峰带Ⅱ 查儿酮：340～390nm 橙酮：370～430nm Ⅱ为主峰，Ⅰ为肩峰峰带Ⅰ 异黄酮：245~278nm 二氢黄酮(醇)：270~295nm 小结：确定黄酮类化合物的骨架类型

对峰形的影响 • 7-OH黄酮：类似于二氢黄酮类(峰带II强) • 4’-OH黄酮：类似于查耳酮类(峰带I强) • 4’, 7-二羟基黄酮：正常 • 即：7-OH引入使峰带II增强，4’-OH引入使峰带I增强 • 对波长的影响 • A环引入-OH，带II红移，尤以5,7-OH影响大 • B环引入-OH，尤其以2’, 4’, 6’-OH，带I红移 • C环引入-OH (3-OH)：带I红移30~50 nm，带II影响小 • OH→OCH3：相就峰带紫移15~20 nm 引入-OH对UV的影响

CH3ONa • 强碱，使所有-OH变为O-，相应峰带红移 • NaOAc • 弱碱，不能使5-OH离子化 • NaOAc /H3BO3 • 能与邻二酚OH (不包括5,6-二羟基)络合，使相应峰带红移 • AlCl3/HCl • AlCl3能与邻二酚OH及5-OH与4-CO络合 • HCl则能破坏邻二酚OH与Al3+的络合 2、黄酮类化合物的紫外诊断试剂

MeOH - NaOMe - 200 300 400 500 +50nm, 强度增加 (不降) 有4-OH • 碱性强，解离所有Ar-OH • 　带Ⅰ， +40~60 nm，强度不降：示有4’-OH • 　带Ⅰ， +50~60 nm，强度下降：示有3-OH, 无4’-OH 1) NaOMe

200 300 400 500 MeOH - NaOMe - +50nm, 强度降低有3-OH，无4-OH • 碱性强，解离所有Ar-OH • 　带Ⅰ， +40~60 nm，强度不降：示有4’-OH • 　带Ⅰ， +50~60 nm，强度下降：示有3-OH, 无4’-OH

200 300 400 500 MeOH - NaOAc - +12nm 有7-OH 碱性较弱，酸性强的Ar-OH解离　带Ⅱ，+5~20 nm：有7-OH 2) NaOAc (未熔融)

带Ⅱ ，+5～10nm • A环有邻二Ar-OH • (不包括5,6-二羟基) • 带Ⅰ，+12～30nm • B环有邻二Ar-OH 3) NaOAc/H3BO4

4) AlCl3及AlCl3/HCl

3-OH,4-C=O 5-OH,4-C=O 邻二Ar-OH 不分解不分解分解 HCl AlCl3 络合物稳定性 AlCl3/HCl AlCl3 MeOH 判断邻二Ar-OH的有无、位置判断分子中3-OH,5-OH的有无 AlCl3/HCl ＝ AlCl3　无邻二Ar-OH AlCl3/HCl ≠ AlCl3有邻二Ar-OH 　带Ⅰ：- 30~40nm：B环有 - 50~60nm：A、B环均可能有 AlCl3及AlCl3/HCl紫外图谱的应用

3-OH,4-C=O 5-OH,4-C=O 邻二Ar-OH 不分解不分解分解 HCl AlCl3 络合物稳定性 AlCl3/HCl ＝ MeOH 无3-OH，无5-OH AlCl3/HCl ≠ MeOH 可能有3-OH、5-OH 带Ⅰ + 35~50nm 只有5-OH + 60nm 只有3-OH + 50~60nm 可能同时有3-OH、5-OH + 17~20nm 除5-OH,尙有6-O- 3-OH,5-OH有无的判断

B环有邻二Ar-OH AlCl3 —— AlCl3/HCl … -43nm 例

苷元：EI-MS • 苷：ESI-MS，FD-MS，FAB-MS 三、黄酮类化合物的MS

RDA-I RDA-II [M-28]+ • M-28：－C=O或－CO • R-DA开裂:可用于判断A、B环上的取代基 1、EI-MS (苷元)

M+较强，常为基峰 • Ⅰ、Ⅱ两条主要裂解途径 • 黄酮类以Ⅰ为主 • 黄酮醇类以Ⅱ为主 • A1、B1、B2的m/z: 推断A环、B环的取代式样 • A1+·、B1+·、B2+保留了A、B环的结构 • A1、B1 互补 • 即二者质荷比之和等于M+的质荷比特点

以裂解途径Ⅰ为主 • M+常为基峰 • 主要碎片为A1+·、B1+·，中等强度 • [M-CO]+、[A1-CO]+也较突出 1) 黄酮类的EI-MS

以裂解途径Ⅱ为主 • M+常为基峰 • 主要碎片为B2+、[B2-CO]+，尚有[A1+ H]+ 2) 黄酮醇类的EI-MS

六碳醛糖 甲基五碳糖五碳糖 • 准分子离子峰：[M+H]+、[M+Na] +、[M+K] + • 准分子离峰从末端依次失去糖基的碎片峰 2、黄酮苷的FD-MS、FAB-MS

第 5 章黄酮类化合物