一氧化碳中毒动物模型复制和形态学技术实验

一氧化碳中毒动物模型复制和形态学技术实验 形态学中心实验室贾雪梅

石蜡包埋技术

1、熟悉石蜡包埋技术基本过程 目的和要求

在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。原理

石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中水分除净，用酒精进行脱水(70％→80％→90%→95%→l00％)。再用二甲苯置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片。石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中水分除净，用酒精进行脱水(70％→80％→90%→95%→l00％)。再用二甲苯置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片。

操作步骤 • 1. 取材直接取材或灌注后取新鲜组织（不超过6h），切成3×5×2mm小块。 • 2. 固定保持细胞原有形态和结构，解决组织自溶问题。10%中性甲醛、4%多聚甲醛等。 • 3. 冲洗自来水流水冲洗，目的：停止固定液对组织的作用，去除固定液，以免影响染色。

4. 脱水 通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。 60% (1h)→70% (1h)→80%酒精(1h)→ 90% (1h)→95%(2h)→ 100 %(2h)注意: 脱水的具体时间视组织块大小体积与厚度而定。

5.透明透明剂常有二甲苯、冬青油等等。 • 6.浸蜡将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过60oC，温度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。方法：1/2石蜡→石蜡I→石蜡II→石蜡III。

7.包埋将组织块和石蜡置于包埋框内， 冷却即成蜡块，组织获得了一定硬度和韧度，就可以切成微薄的切片。包埋机

8.切片 载玻片先用蛋白甘油处理；Leica切片机进行切片，厚5μm；45oC漂烘仪内进行展片。切片机

9.裱片将蜡片裱贴于载玻片上 10.烤片将切片烤干待用漂片仪

Nissl body染色技术

1.熟悉Nissl body染色原理2.掌握Nissl body染色操作方法目的和要求

原理 • 尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。 • 机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。 • 尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状态的一种标志。

材料 1. 染色液、酒精、二甲苯等； 2. 染色缸、镊子、滤纸等；

操作步骤 1、脱蜡：石蜡切片常规脱蜡至水二甲苯20分钟 * 2次 100%酒精10分钟90%酒精 10分钟80%酒精 10分钟70%酒精 10分钟蒸馏水 5分钟

2、染色：20~30分钟（600C温箱） 染液配制: 甲苯胺蓝 0.5克 50%酒精 100毫升染后蒸馏水洗

3、分色：95%酒精分色 1-2’’，镜下控制 4、脱水：100%酒精 10 ’’ X 2 5、透明：二甲苯 5 ’ X 2 6、封片：用中性树胶进行封片 7、观察：

结果

对照组实验组

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