1 / 25

Praktiká ZS 4 Mycobacterium, Corynebacterium

Praktiká ZS 4 Mycobacterium, Corynebacterium. Lab. dg mykobaktérií + citlivosť na ATB Lab dg. corynebaktérií + citlivosť na ATB Lyzogénna konverzia Antituberkulotiká Mikroskopia - M.tbc - Ziehl Neelsen, C, diphtheria - Gram, Albert, C. pseudodiphthericum - Gram

pippa
Download Presentation

Praktiká ZS 4 Mycobacterium, Corynebacterium

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Praktiká ZS 4 Mycobacterium, Corynebacterium • Lab. dg mykobaktérií + citlivosť na ATB • Lab dg. corynebaktérií + citlivosť na ATB • Lyzogénna konverzia • Antituberkulotiká • Mikroskopia - M.tbc - Ziehl Neelsen, C, diphtheria - Gram, Albert, C. pseudodiphthericum - Gram • Kultivácia - M. tbc - Lowensteinova a tekutá pôda, C. diphtheria a C. pseudodiphthericum - KA a teluritová pôda • Biochemické vlastnosti C.diphtheriae a C. pseudodiphthericum • Dôkaz toxigenicitiy C, diphtheriae - ELEKova metóda a pokus na zvierat

  2. Lab. dg. mykobaktérií • Odber materiálu - pľúcna tbc - spútum - ranné spútum, 3 dni za sebou, mimopľúcna - adekvátna vzorka - veľké množstvo tekutiny - moč, menštruačná krv… • Mikroskopia - Ziehl Neelsen, fluorescencia - zvýšenie citlivosti • Kultivácia - spracovanie - dekontaminácia sprievodnej flóry, zahustenie vzorky - NaOH, centrifugácia. Vaječné pôdy - Šulova, Lowensteinova / tuhé aj tekuté / - pigment, tvar - karfiolovitá, v zákale, v blanke, v sedimente--- Dlhý generačná čas - urýchlenie - použitie detekcie metabolizmu kys. Palmitovej a CO2 • Genetické sondy - dôkaz sekvencie aminokyselín

  3. Mycolic acids Lipid-Rich Cell Wall of Mycobacterium CMN Group: Unusual cell wall lipids (mycolic acids,etc.) (Purified Protein Derivative)

  4. Farbenie • Ziehl Neelsen - teplom fixovaný vysušený náter prikryte filtračným papierom. Aplikujte 5-7 kvapiek karbolfuchsínu. Zahrievajte od spodu až do výstupu pár. Odstráňte papier pinzetou, opláchnite vodou a vysušte. Odfarbujte kyslým alkoholom (HCl+etanol) pokiaľ odchádza farba. Dofarbite metylénovou modrou. Opláchnite, vysušte. M. tbc - červené, okolie - slabo modré. • Albert - methylénová modrá alebo toluidínová modrá

  5. Mikroskopia • Farbenie podľa Ziehl Neelsena - acidorezistencia M. tbc - ťažko prijíma farbivo. Ak ho príjme veľmi odoláva odfarbeniu aj silnými kyselinami • Farbenie podľa Grama C. diphtheria - G+kyjakovité paličky • Farbenie podľa Alberta - metachromatické farbenie granúl - výsledná farba je iná ako farba použitej farbičky - C. diphtheriae • Porovnanie Gramom farbený preparát C. diphtheriae a C. pseudodiphthericum

  6. Fluorescenčný mikroskop • Používa ortuťovú vákuovú lampu, ktorá emituje svetlo kratších vlnových dĺžok v porovnaní so svetlom používaným v svetelnom mikroskope. • Využívajú fluorochromy – zlúčeniny schopné absorbovať krátkovlnné utrafialové alebo ultramodré svetlo a emitovať energiu vyšších vlnových dĺžok. Fluorochomy sa použijú na prípravu preparátu – fluorescenčné farbenie – ktorý po osvetlení krátkovlnnýms svetlom fluoreskuje • Vysoká citlivosť – organizmus alebo štruktúra svieti (fluoreskuje) na tmavom pozadí

  7. Mycobacterium Tuberculosis Stained with Fluorescent Dye

  8. Acid-fast bacilli

  9. Kultivácia M. tbc • Vaječná pôda - Lowensteinova - karfiolovitý vzhľad, netvorí oigment • Tekutá pôda - rast v blanke • kultivácia 3-6 týždňov - odčítavanie každý týždeň

  10. Eight Week Growth of Mycobacterium tuberculosis on Lowenstein-Jensen Agar

  11. Antituberkulotiká a liečba • Streptomycin(zabíja aktívne sa množiace M.tbc) Izoniazid,Rifampicin (účinné na M.tbc v kazeóznych ložiskách) Ethanbutol Etionamid Kanamycin Cycloserin Pyrazinamid ( účinkuje i.c.) • U pacienta s pľúcnou tbc existujú 3 populácie M.tbc - lokalizované extracelulárne v kavite, - lokalizované intracelulárne v makrofágoch, - lokalizované vo vnútri kazeózneho ložiska • Kombinácia 2-3 ATT. Oddialenie vzniku rezistencie -prerastanie rezistentných mutant - rezistentné mutanty v kultúre M-tbc pre INH 1:105 pre STM 1:106 . V ložisku je 107- 10 9 baktérií

  12. Mycobacterium tuberculosis (cont’d) • PPD Test (cont’d) Positive Test

  13. Lab. dg. corynebaktérií • Diagnostika ochorenia na základe klinického obrazu a epid. anamnézy. Lab. dg. je dlhá. Odber vhodnej vzorky - • Mikroskopia - preparát farbený podľa Grama a Alberta - neodlíši C. diphtheriae od iných Corynebacterií. • Kultivácia: Krvný agar - 3 typy kolónií, Lofflerovo medium, pôda s teluričitanom - hnedé kolónie s halo • Biochemická identifikácia - odlíšenie od iných corynebacterií prítomných v krku • Dôkaz toxigenicity kmeňa - ELEK, • Testovanie citlivosti na ATB

  14. Diphtheria

  15. Arrangement of C. diphtheria

  16. Diphtheroids gram stain

  17. Lyzogénna konverzia • Kmeň C. diphtheriae získava vlastnosť produkcie toxínu - lyzogénnou konveziou prostredníctvom bakteriofága. Bakteriofág - bakteriálny vírus - prenesie genetickú informáciu o produkcii toxínu - tox gen - pri napadnutí bakteriálnej bunky C. diphtheriae

  18. Mechanism of Action of Diphtheria Toxin: Inhibition of Protein Synthesis

  19. Dôkaz toxigenicity C. diphtheriae • ELEKOV test toxigenicity - imunodifúzia skúmaného kmeňa a antidifterického séra imunodifúziou v agare - zóna precipitácie • Pokus na zvierati: aplikácia difterického toxínu i.d. ………………..nekróza • antidifterické sérum (i.p. alebo i.d.) + toxín …bez nekrózy

  20. Elek plate

  21. In vivo Detection of Diphtheria Exotoxin

  22. Kultivácia Corynebaktérií • C. diphtheriae - na KA • C. pseudodiphthericum na KA - obrátený CAMP • C. diphtheria na telluritovej pôde - hnedé kolónie s hnedým prstencom - halo

  23. Biochemické vlastnosti • Fermentácia: odlíšenie C. diphtheriae od iných corynebactérií izolovaných z krku (C.ulcerans, C. pseudotuberculosis, C. xerosis, C. pseudodiphthericum • C. diphtheriae • granuly kataláza želatína, urea, laktóza, maltóza, glc • + + - - - + + • + + - + - - - • C. pseudodiphthericum

  24. Určenie citlivosti • Citlinosť na antituberkulotiká - ATT sú primiešané do pôdy, • Testuje sa princípom proporcionálnej metódy testovania citlivosti - dilučná metóda. Riedenie inokula aby na pôde bolo 100-300 CFU - colony forming units - kolóniu tvoriacich jednotiek. • Ak je in vitro viac jako 1% baktérií M. tbc rezistentných, terapia nebude klinicky účinná • Citlivosť na Corynebaktérie - PNC, ERY - na odstránenie baktérií alebo likvidáciu nosičstva - terapia diftérie - primárne antitoxická. Prevencia. • Nondiphtheria corynebactria - Vancomycin, (Cefalosporíny 1. generácie)

More Related