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Imunoprecipitação

Imunoprecipitação. Imunoblotting ou WB. Imunodifusão. Aplicação da Técnica: Avaliação Semiquantitativa – Teste Confirmatório Ac para AG do extrato nuclear (ENA): ex. anti-topoisomerase (anti-ScL-70) Ac anti-fungos: ex. Aspergillus , Histoplasma (Histoplasmose)

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Presentation Transcript

  1. Imunoprecipitação • Imunoblotting ou WB

  2. Imunodifusão • Aplicação da Técnica:Avaliação Semiquantitativa – Teste Confirmatório • Ac para AG do extrato nuclear (ENA): ex. anti-topoisomerase (anti-ScL-70) • Ac anti-fungos: ex. Aspergillus, Histoplasma (Histoplasmose) • AC anti-Entamoeba histolytica (Amebíase) e Ascaris Lumbricóides • AC para doenças auto-imunes (Lupus Eritrematoso Sistêmico-LES, Artrite • Reumatóide) • 5. Portadores de Hidatidose Tipos de Imunodifusão • Simples ou 1 dimensão (Tubo) • Dupla (Ouchterlony) • Radial (Macini ou Fahey)

  3. Lâmina de vidro (placa Petri) + ágar ou agarose - Gelificação • Orifícios no gel • AC e AG nos orifícios • Incubação: Câmara úmida com vedação • Observar a formação das linhas 18 - 48 horas (37oC) 2 - 3 dias (TA) Imunodifusão usada para detecção de antígeno ENA de vários pacientes (1 a 6) pacientes 1 e 2: identidade com AC ENA paciente 3: identidade parcial demais pacientes: não reativos Imunodifusão Dupla (Ouchterlony) Limitações da Técnica:Tempo e Baixa sensibilidade

  4. Imunodifusão Radial (Mancini ou Fahey) • Lâmina de vidro (placa Petri) + ágar ou agarose – Gelificação • AC está disperso pelo gel em concentração fixa • Orifícios no gel: AG nos orifícios (3 diluições de AG) • Incubação: Câmara úmida com vedação: 42-78 horas(Mancini) e • tempo indeterminado (Fahey) • 5. Observar a formação de Halos • Utilização: Níveis de IgG, IgA, IgM, IgD, C-3 e C-4, ceruloplasmina, transferrina, • -tripsina, Apolipoproteínas. A quantificação da quantidade de AG na amostra é dada pela curva (diâmetro do halo é proporcional ao log [AG]).

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