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尿样中氧氟沙星的含量测定

尿样中氧氟沙星的含量测定. 组员：胡帆、周凡漪. 实验目的： 1. 分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星。 2. 比较 LC-UV 与 LC- 荧光分析氧氟沙星的区别。. 背景资料： 氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌药 , 并具分布广 , 吸收好 , 半衰期长等特点 , 临床广泛应用具有广谱抗菌作用。. 尿样采集： 受试者空腹饮水 200ml 排尿 , 留取 1h 后尿样作空白 , 一次口服 OFLX 片 600 mg, 收集 1 ， 2 ， 3 ， 4 ， 5 小时后的尿样，做好标记。. LC-UV 法分析尿样中氧氟沙星的含量.

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尿样中氧氟沙星的含量测定

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  1. 尿样中氧氟沙星的含量测定 组员：胡帆、周凡漪

  2. 实验目的： • 1.分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星。 • 2.比较LC-UV与LC-荧光分析氧氟沙星的区别。

  3. 背景资料： 氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌药,并具分布广,吸收好,半衰期长等特点,临床广泛应用具有广谱抗菌作用。

  4. 尿样采集： 受试者空腹饮水200ml排尿, 留取1h后尿样作空白,一次口服OFLX片600 mg, 收集1，2，3，4，5小时后的尿样，做好标记。

  5. LC-UV法分析尿样中氧氟沙星的含量 一、实验条件： 1.1 实验仪器 Agilent高效液相色谱仪，G1314B-VWD紫外检测器，色谱柱，量瓶 1.2 实验试剂 氧氟沙星片剂，甲醇(色谱纯)，尿样，空白尿样，HAc溶液

  6. 1.3色谱条件 色谱柱:C18 5μm (250 mm ×416 mm) 流动相: 甲醇/0.05 %HAC=80：20 流速:1ml/min 进样量：20μl 柱温：室温 检测波长：在250～400nm处扫描，选取有最大吸收度处作为检测波长。实际过程中选用294nm作为检测波长。

  7. 二、实验方法 2.1 尿液的预处理 取空白尿样和尿样，13000r/min离心10min，取上清液经0.45μm的水相滤膜过滤，保留滤液。

  8. 2.2 氧氟沙星标准液的配制 精密称取氧氟沙星片剂200 mg ,置50ml容量瓶中,以流动相稀释至刻度,配成4.0 mg/ml的储备液，用流动相稀释400倍，吸取20μl作为进样品。

  9. 2.3 标准曲线的制作 测定时，取标准液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流动相稀释于10ml量瓶，吸取20μl作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙星标准浓度对峰面积进行回归，得到回归方程。

  10. 2.4 空白尿样的配制 取空白尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取20μl作为进样品。 2.5 尿样的配制 取尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取20μl作为进样品。

  11. 2.6 进样 先进1针标准品观察流动相配置是否合适,合适后,进1针空白尿样观察有无杂质在测定波长处影响左氧氟沙星的吸收,然后进样标准品与待测样品,标准品进样5针来检验仪器精密度。

  12. 2.7回收率实验 取浓度为0.5，1，1.5 μg/ml的氧氟沙星尿样，称取氧氟沙星标准品，配置为相同浓度，通过峰面积比值，测定回收率。

  13. 2.8精密度实验 取浓度为0.5～2.5μg/ml的氧氟沙星标准品，1d内重复测定5次,测得日内RSD，隔日测定5 次, 测得日间RSD。

  14. 紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量 紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量，实验操作方法除检测器设定与荧光检测器不同外（检测波长：294nm），其余设置和操作均与荧光检测时相同。

  15. 三、实验结果 荧光法测定尿样中左氧氧氟沙星浓度标准曲线图

  16. 紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度标准曲线图

  17. 精密度 日内、 日间RSD 测量 荧光法 日内RSD=2.6% 日间RSD=3.3% 紫外法 日内RSD=0.8% 日间RSD=2.9%

  18. 回收率实验 回收率 荧光 98.7%、101.4%、101.2%； 紫外 99.6%、98.4%、99.1%。

  19. 荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线

  20. 紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线

  21. 荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线

  22. 紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线

  23. 讨论 1、采用LC-UV法与LC-荧光法分别测定尿样中氧氟沙星的含量，并且比较两种方法测量结果的不同，因此要求测量过程具有对照性：待测样品，标准品，空白样品的浓度两者均相同，流动相也相同，都采用外标法，但因为分析方法的不同，检测波长不同。

  24. 2、实验中所采用的尿液因为新鲜尿液，如果无法做到这点，因在尿液中加入二甲苯等防腐剂，避免尿液因细菌繁殖造成混浊，影响试验效果。而且尿样中的药物会分解，影响实验结果，因而最好是现取，实验过程中不使用时放入冰箱保存

  25. 3、由于没有标准品对照，在测定时以左氧氟沙星片作为标准品使用。而事前没有对其中左氧氟沙星的实际含量进行过标定，也不能排除片剂中的其他成分（如辅料中的抗氧化剂等）对实验结果的影响。

  26. 4、实验本来应该统计每次的尿液量，计算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出药物量-时间曲线，因为本次实验中没有精密的容器量尿液体积，只能大概估计尿液量，测算出尿液中药物的量。

  27. 5、实验中考虑到出峰时间和分离度以及实际操作的便利程度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是还是有脱尾现象，在荧光检测中特别明显。5、实验中考虑到出峰时间和分离度以及实际操作的便利程度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是还是有脱尾现象，在荧光检测中特别明显。 6、从实验数据，我们可以认为荧光检测器作为检测装置，灵敏度、专属性好（没有杂质峰），较紫外检测器优。

  28. 标准品中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）标准品中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）

  29. 尿样中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）

  30. 标准品中左氧氟沙星出峰图（荧光检测法）

  31. 尿样中左氧氟沙星出峰图（荧光检测器）

  32. 谢谢

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