La sélection du TOP ovule XII ème journées Liégeoise de Gynécologie Obstétrique

1. La sélection du TOP ovuleXIIème journées Liégeoise de Gynécologie Obstétrique Nathalie Lédée

2. Connaitre le potentield’implantation de(s) embryonsquel’onvatransférerest crucial • Pour augmenter les taux de succès en FIV-ICSI tout en réduisant les risques de grossesse multiple - Pour promouvoir la politique du transfert unique d’embryon -Pour diminuer la mortalité et morbidité maternelle et foetale associée au technique d’assistance médicale à la procréation • L’analyse de la morphologie de l’embryon pre-implantatoire est importante, mais en général insuffisamment informative (Guerif, et al. 2007). • Il n’EXISTE PAS actuellement de marqueur morphologique de l qualité ovocytaire individuelle. La fonction ovarienne est explorée en terme de reserve ovarienne globale • 5% des ovocytes collectés aboutiront à la naissance d’un enfant

3. De nouvelles perspectives emergeantes tentent de définir la qualité ovocytaire et embryonnaire Granulosacells Feuerstein et al, 2007 Assou et al, 2008 Hamel et al, 2008 Katz-Jaffe et al, 2006 Dominguez et al, 2008 Tabiasco et al, 2009 Seli, 2007-2008 Scott, 2008 Embryos conditioned Culture Media Follicular fluids

4. Cytokines and chemokines dans le liquide folliculaire Randomised population ICSI randomisée (n=71) puis (112) Ponction d’ovocyte: follicule par follicule 530 (puis 953) individual follicular fluids with mature oocytes selection retrospective des liquides folliculaires individuels pour lesquels un embryon avait été obtenu par fecondation in vitro et transféré Echantillons anonymes ont analysés en aveugle Determiner leur concentration de cytokines/ chemokine contents EMBIC plaform (bead-based multiplex sandwich immunoassay - MP piccinni, Florence) Taux d’implantation et de naissance Staging de l’embryon J2

5. Est-ce que des biomarqueurs immunologiques seraient informatifs de la compétence ovocytaire ? Cytokines /chemokines/ facteurs de croissance IL-1beta, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IFN-alpha, TNF-alpha, G-CSF, GM-CSF, VEGF, PDGF, FGF, IP-10, MCP-1, RANTES, eotaxin, MIP-1-alpha, and MIP-1-beta, LIF Methode Luminex (Elisa en multiplex sur microbilles): Université de Florence par MP Piccini

6. Un seul facteur folliculaire est apte à distinguer les embryons qui aboutiront à une naissance de ceux ayant échoué : le Granulocyte Colony Stimulating factor (G-CSF ou CSF-3) • Les embryons qui ont abouti à une naissance avait un taux de G-CSF dans leur liquide folliculaire superieur à ceux n’ayant pas abouti à une grossesse dans 84% des cas. • Définir la sensibilité et specificité optimale du test. AuROC: 0.84 [0.75-0.90] (p=0.0001) L édée et al, Human reprod, 2008

7. Implantation and delivery rates as a function of the follicular fluid G-CSF concentrations in individual FF From the AUC-ROC curve • Le seuil Bas La specificité la plus haute à prévoir l’échec • Le seuil haut La sensibilité la plus haute pour prévoir le succés Lédée et al, HR, 2008

8. La variation de concentrations de G-CSF dans une même cohorte EMBRYO CHOICE

9. Comparaison de plusieursméthodes de dosagesLuminex R&D, LuminexBiorad, Elisa R&D Biorad Luminex technology AuROC curve: 0.82 [0.73-0.89] (p=0.0001): Excellent discrimination R&D System Luminexat 0.73 [0.65-0.79] and significant (p=0.002): Acceptable discrimination G-CSF ELISA, AuROC=0.60, p=0.19: No discrimination

10. Comparaison des taux de naissance en fonction du taux de G-CSF folliculaireévalué par troisméthodesdifferentes. Lédée et al, submitted, 2009

11. Impact of hyperstimulation * * A oestradiol <1500 pg/ml B- 1500<oestradiol<3000 C- oestradiol>3000 pg/ml

12. Les cycles de FIV/ICSI en cycle natural modifié comme modèle experimental pour explorer l’environnement de l’ovocyte Tracabilité du follicule à la naissance est parfaite (1 ovocyte- 1 liquide folliculaire- 1 embryon- 1 enfant) Etude rétrospective en aveugle des liquides folliculaires des follicules dominants- Collaboration avec R. Frydman Inclusion: les premières 83 tentatives de FIV/ICSI en cycle naturel modifié Méthode: Multiplex bead-based Assay (Biorad) IL-1beta, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IFN-alpha, TNF-alpha, G-CSF, GM-CSF, VEGF, PDGF, FGF, IP-10, MCP-1, RANTES, eotaxin, MIP-1-alpha, and MIP-1-beta, LIF

13. HCG 5000IU GonadoT150 IU/d Cetro 0.25/d Echo HD OR T ≥13mm ≥16mm D 1 Protocole: cycle naturelmodifié • Monitoring des patientes • Administration of GnRH antagonist (Cetrotide) 0.5 (0.25x2/day) + Gonadotrophins 150 IU/day quand la taille du follicule >13 mm • Administration of hCG 5000 IU pour la maturation finale Rongières-Bertrand C., Frydman R. et al, Hum Reprod, 1999 Castelo Branco A., Frydman R. et al,Fertil Steril, 2005 Mendez-Lozano D., Frydman R. et al,RBM Online 2008

14. Caractéristiques des patientes

15. IL-17 AuROC: 0.77 G-CSF AuROC: 0.78 IL-7 AuROC: 0.75 Trois proteines predictive de l’issue: Naissance par ponctionG-CSF (a), and Interleukin-17 (b) and -7 (c)

16. G-CSF, IL-7 et -17 et potentialité de naissance Lédée et al, submitted

17. Combinaison du G-CSF et de l’interleukine-7 pour predire la naissance

18. Correlation between G-CSF, interleukin -7 and -17

19. TOP quality embryo, D2 TOP quality embryo, D3 no TOP Embryos, D2 Cytokines, facteurs de croissance et les chemokines dans le fluide folliculair et la morphologie de l’embryon correspondant Aucun des facteurs n’étaient apte a discriminer les embryons TOP des non TOP

20. Le mécanisme par lequel le G-CSF agit est inconnu • La proteine et le recepteur sont présent dans l’ ovaire - granulosa cells (Salmassi, et al. 2004) / secretion en phase folliculaire pré-ovulatoire • Après la sécretion devient active dans l’endomètre en phase lutéale/placenta avec une augmentation dans le serum si une grossesse survient (Yanagi, 2002- Salmassi et al, 2005) • Le G-CSF est connu comme une molecule augmentant la tolérance immunitaire avant greffe (T reg cells and dendritic cells recruitment, IL-10 secretion, regulation of complement, control of Th-1 cytokines) Isi l’on considère la grossesse comme une semi-allogreffe, la question d’une tolerance maternelle locale et programmée devient essentielle • G-CSF en injection SC a été montré comme une veritable alternative de traitement dans le cadre des fausses couches à répétition dans un essai randomisée placebo versus G-CSF en simple aveugle (Scarpellini, 2009)

21. Pour Conclure • Témoins non invasif de la compétence ovocytaire dans le liquide folliculaire existent • Ces résultats ont besoin d’être confirmé par des études prospectives, multicentriques, randomisées. • Si tel est le cas: outil formidable non invasif pour définir la compétence ovocytaire, définir quel femme requiert une hyperstimulation et appliquer une politique de transfert guidée et adaptée a chaque patiente

22. Collaborative Study supported by the European network EMBIC (Embryo Implantation Control) Nathalie Lédée Gérard Chaouat Sophie Perrier d’hauterive Marie Petit Barat Carine munaut Sylvie dubanchet Francis Frankennes Jean Michel Foidart Marie pierre Piccinni René Frydman Letizia Lombardelli Agnessia Osipova Joelle Taieb