Starea actuală

1. CERCETĂRI PRIVIND INIŢIEREA ŞI DERULAREA UNUI PROGRAM MODERN DE SELCŢIE (utilizând şi multiple ovulaţii şi embrio-transfer-MOET) A EFECTIVULUI DE RASĂ PINZGAU de TRANSILVANIA din ŢARA HAŢEGULUI-HUNEDOARA – Autor: Dr. Ing Niculiţă Mang Îndrumător ştiinţific: Prof Dr. Ing. IOAN VINTILĂ

2. Starea actuală • - Rasa Pinzgau de Transilvania este în pericol de extincţie prin absorbţia genomului său în alte rase mai performnte. • - Penru salvarea ei este necesară conservarea ,,in situ’’ şi (sau),,ex-situ’’ .

3. Obiectivele proiectului • Cunoaşterea structurii genetice actuale ale principalelor caractere importante economice şi ameliorarea lor • Evitarea scăderii mărimii genetice a populaţiei (numărul de familii)şi evitarea erodării în continuare a diversităţii ei. • Cunoaşterea stării de heterozigoţie a populaţiei prin utilizarea polimorfismului markerilor moleculari în locii care codifică tipurile deproteine din lapte • Însuşirea tehnologiei de superovulaţie şi embrio-transfer în vederea realizării unei ,,Bănci deGene ‚’în localitatea G-ral Bertelot din jud. Hunedoara • Elaborarea unei schiţe de program pentru sporirea agricultorilor care cresc rasa Pinzgau în stare pură.

4. REZULTATELE OBŢINUTE • A.Cu privire la starea structurii genetice a caracterlor cantitative importante economic. • Măsurătorile efectuate pe 270 de vaci în Ţara Haţegului şi compararea rezultatelor cu cele obţinute de alţi cercetători în regiunea Suceava au scos în evidenţă următoarele:

5. 1.- Rasa Pinzgau de Transilvania din Ţara Haţegului are o structură genetică asemănătoare cu cea din Bucovina. • - 2 - Potenţialul de sinteză a laptelui, pe un ciclu de productie, nu depăşeşte 3500 Kg şi 130 kg grăsime cu o persistenţă bună a lactaţiei • 3.- Producţia medie maximă de lapte se manifestă la a 7-a lactaţie, iar longevitatea productivă depăşeşte 8 lactaţii • 4.- Are o remarcabilă fecunditate (77%) şi natalitate (92%)cu o rată scăzută a avortului embrionar • 5.- Handicapul ei genetic este tardivitatea productivă şi cea reproductivă.

6. B.Cu privire la polimorfismul locilor care codifică proteinele din compoziţia laptelui. • Am folosit două metode: • a. Analiza ADN pentru doi loci(k-cazeina şi beta globulina), folosind: • - Reacţia PCR • - Analiza RFLP(polimorfismul lungimii fragmentelor de restricţie) • b.. Analiza produşilor de expresie a genelor din 6 loci (Alfa-cazeina, beta –cazeina, Alfa S2 cazeina, K-cazeina, alfa lactoglobulina .ş beta lactoalbumina) cu ajutorul electroforezei cu focalizare izoelectrică

7. REZULTATELE OBŢINUTE • Analiza ADN: • Pentru amplificarea genelor K-cazeinei şi Beta- lactoglobulinei am folosit următorii primeri: • Pentru k-cazeină: • KAPPA-1 5-ATC ATT TAT GGC CAT TCC ACC AAA G-3 • KPPA-2 5-GCC CAT TTC GCC TTC TCT GTA ACA GA-3 • Pentru Beta-lactoglobuline • BETA -1 5- TGT GCT GGA CAC CGA CTA CAA AAA G-3 • BETA-2 5- GCT CCC GGT ATA TGA CCA CCC TCT-3 • După amplificare în 35 de cicluri în probele recoltate de la 24 de vaci s-au obţinut ampliconi cu o dimensiune de 350 perechi de baze pentru K-cazeină şi de 247 perechi de bază pentru Beta-lactoglobulină.

8. Aspectul lor îl redăm în figurile de mai josPCR - Kcn / 350 pb

9. Polimorfismul lungimii fragmentelor de restricţie obţinute cu ajutorul enzimei de restricţie Hind III.PCR-RFLP Kcn /cu restrictaza Hind IIISe obţin următoarel genotipuri:AA = 350 pbAB = 350/219/131 pbBB = 219/131 pb

10. Aspectul şi poziţia ampliconilor beta-lactoglobulineiPCR BLG / 247 pb

11. Aspectul şi poziţia fragmentelor de resticţie din locusul beta-lactoglobulineiPCR-RFLP BLG /cu restrictaza Hae IIISe obţin următoarele genotipuriAA = 148/99 pbAB = 148/99/74/74 pbBB = 99/74/74 pb

12. Genotiparea vacilor la nivelul expresiei genelor • Pentru acest fel de analiză ne-am folosit de electroforeza cu focalizare izoelectrică a tipurilor de proteine din lapte

13. Rezultatele obţinutePe un lot reprezentativ de 25 de vaci din rasa Pinzgau s-au obţinut următoarea structură genetică pentru 6 loci care codifică tipurile de proteină din lapte.

14. C..Cu privire la embrio-transfer • Este necesar pentru realizarea Băncii de Gene destinată conservării ,,Ex-situ’’ a rasei Pinzgau deTransilvania

15. Metodologia utilizată • a. Alegerea a 10 vacilor donatoare de embrioni • b. Inducerea superovulaţiei cu FSH şi LH timp de 3 zile injecţii de 2x pe la interval de 12 ore la 7 vaci

16. c. Recoltarea embrionilor după 7,5 zile de la data însămânţării d.In urma recoltarii s-au obtinut 12 embrioni, din acestia un numar de 9 s-au dovedit a avea perspective sa reziste la congelare in azot lichid.