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第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9

第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9. 目的与要求 了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术，根据地方特点和组培技术现状，例举部分植物进行讲授，并结合学生查阅资料共同探讨。 具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术，具备马铃薯、草莓等植脱毒技术，进行微型薯生产基本知能，有利用图书及网络资源收集相关资料，了解相关行业信息的能力，并具备一定交流探讨能力。.

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第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9

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  1. 第十章 常见植物脱毒与快繁技术宜职院08.9

  2. 目的与要求 了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术，根据地方特点和组培技术现状，例举部分植物进行讲授，并结合学生查阅资料共同探讨。 具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术，具备马铃薯、草莓等植脱毒技术，进行微型薯生产基本知能，有利用图书及网络资源收集相关资料，了解相关行业信息的能力，并具备一定交流探讨能力。

  3. 第一节 农作物的脱毒与快繁 植物组织培养技术已广泛运用于农作物育种和良种繁育，尤其是许多无性繁殖类农作物脱毒及良种快繁，对提高农作物生产的产量和品质发挥了极其重要的作用。

  4. 一、马铃薯的脱毒和快繁（一）茎尖培养脱毒1、取材 生产大田顶芽，或块茎，预培养抽生的枝条污染较少。供试材料存在病毒可结合热处理脱毒。2、消毒 自来水冲洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液5～10min，无菌水冲洗2～3次。3、接种 解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。4、培养条件 MS、Miller，25±2℃， 1000lx，4周后增至2000～3000 lx，光照16h。5、病毒鉴定 目测法和指示植物鉴定法。

  5. （二）微型薯生产技术 由试管苗生产的重1～30g的微小马铃薯被称为微型薯。不带病毒，增产效果一般在40%以上。1、试管生产 微型薯一般只有1～5g。用组织培养方法生产微型薯分以下两个步骤：（1）单茎段扩大繁殖（2）微型薯的诱导。2、温室多层架盘工厂化生产 3、低网畦生产

  6. 二、甘薯的脱毒与快繁 （一）茎尖培养 1、茎尖培养脱毒 取高产、优质母株枝条，切成带1芽小段。自来水流水冲洗， 70%酒精10s， 0.1%的升汞10min，无菌水4～5次，或2%次氯酸钠5min，无菌水3～4次。 2、茎尖剥离和培养 解剖镜下剥去芽上较大幼叶，切取0.3～0.5mm含1～2个叶原基的茎尖分生组织，迅速接种到制备好的培养基上。

  7. 3、病毒检测 目测法和指示植物鉴定法。 （二）脱毒苗扩繁和种薯的生产 通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。30d左右长成有6～8片展开叶的试管苗。待试管苗繁殖到一定数量后，即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。所结小薯即为原原种薯。以原原种（苗）为种植材料，在防虫条件下的无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯（良种）。

  8. 红薯原原种炼苗

  9. 第二节 果树脱毒快繁 • 利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积小，繁殖周期短，全年都能进行繁殖，繁殖系数高等特点。还可以消除果树的某些病毒病，适应果树向品种更新快、矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要。

  10. 一、草莓 （一）草莓离体快繁技术 1、外植体 6～7月份匍匐茎15～20cm长时取材。 2、培养基 初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA 0.2mg/L 增殖MS+6-BA0.5～1.0mg/L。 3、生根和驯化 1/2MS+IBA0.2～1.0mg/L 根2～3cm时炼苗，一周后发新根，四周后可移栽。

  11. （二）花药培养脱毒 • 1、花药培养脱毒技术 • 春季取单核期花蕾（直径约4mm），4～5℃低温处理24h。浸入70%酒精30s，漂白粉或0.1%氯化汞10～15min。剥取花药放在培养基上。 • 诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L • +NAA0.2 mg/L +IBA0.2 mg/L， • 继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+ IBA0.05mg/L • 2、脱毒苗的检测 • 指示植物小叶嫁接鉴定法和电子显微镜鉴定法。

  12. 草莓小叶嫁接法

  13. 二、柑橘 1、茎尖微芽嫁接 砧木种子45℃温水浸泡5min—55～56℃热水处理50min—取出吸干—消毒—剥去种皮—种子接种于MS培养基—27±1℃暗培养—2周后萌发芽苗可作砧木。 接穗材料强健新梢 —热空气处理45min (50℃)—取lcm长芽条—消毒处理—切取0.14～0.18mm微茎尖。 砧木苗切去长根和子叶，上胚轴留1～1.5cm切除顶部，垂直于茎，切开一个倒T字形切口，将微茎尖放置于砧木切口内，茎尖底部和砧木切口形成层紧密贴合。

  14. 嫁接苗转植于新鲜培养基上， 27±1℃、16h光照，2～4周后抽生新芽，成活率可达20%～50%。5～8周可移植。

  15. 柑橘花药培养示意图

  16. 2、无病毒苗的繁殖 经无病毒苗鉴定后选出无病毒良种苗木，可建立原种母本园。在隔离区，按无病苗的栽培要求建成无病良种母本园，供繁殖无病苗木采穗用。

  17. 三、香蕉 （一）花序轴切片培养 1、花序轴切片 香蕉果穗已完全抽出时采上部末结实花序，无菌下剥取苞片除去子房。取顶端10～15cm长的花序轴段，灭菌后横切成2～3cm厚的薄片，再纵切成数片。 2、培养过程 常用MS培养基，也可用SM或改良MS，继代也可用Knudson培养基。

  18. 香蕉雄花序外植体诱幼苗过程

  19. （二）影响试管育苗的关键技术 芽的反复增殖是香蕉试管育苗的技术关键。芽的增殖效果如何，较重要的衡量指标是增殖率和代期（—次继代培养的时间），均与生长调节剂关系最为密切。细胞分裂素以6-BA 3～4mg／L为宜，增殖率可达到4以上，代期为3～4周，因而增殖效率高。

  20. 第三节 蔬菜组织培养一、番茄1、花药培养⑴取花药3～7mm长、单核中期的花蕾。⑵将花蕾用0.1‰吐温40溶液浸泡5min—70％酒精15s—3％的漂白粉10 min—无菌水冲洗—接种⑶从花蕾中取出花药，接种在DBMII＋2.0mg/L NAA＋1.0mg/LKIN的培养基上，27℃、24h光照后黑暗下培养。

  21. 2、叶培养⑴取无菌幼嫩叶片，切成5×5mm的小块。⑵MS＋0.2mg/LIAA＋2mg/L BA 27℃、光。⑶25天后，愈伤组织分化芽。一个月后每切块长出2～5个芽。⑷芽转到无激素的MS培养基上，5～10d后形成根。

  22. 3、胚培养 ⑴外植体的制备　授粉后30～40d果实—95%乙醇消毒—5%NaCl中5min—无菌蒸馏水充分淋洗除去种子上的胶状复被。 ⑵培养基　MS附加硫胺素3.0um。pH6.0。附加2.4－D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈伤组织启动和保存培养基。 ⑶培养条件　愈伤组织启动和保存暗培，27℃。再生生根20～30℃、16h/d，荧光下进行

  23. 二、甘蓝 1、取材和处理 剥去叶球的叶片，留下中心柱和腋芽，—70%酒精1-2分钟—0.2%升汞10-15分钟—剥离腋芽—接种在繁芽培养基上（MS+IAA0.2-0.5mg/L+6BA1.0-3.0mg/L） 2、培养   光照1000-3000lx, 12-13h/d, 20±2℃，湿度50%-60%。 3、扩大繁殖 重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。

  24. 第四节 观赏植物的组织培养 兰花 兰花系兰科植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。

  25. 1、取材和处理 切取lOcm长生长健壮的茎尖，去苞叶洗净—75％酒精—5％的漂白粉10min—无菌水冲洗—接种。 在兰花叶片组织培养中，应选择带有嫩叶的花梗，以后的处理方法同茎尖。

  26. 2、原球茎的诱导培养 茎尖生长点或叶片接种在原球茎诱导培养基上。因兰花种类而异，可以用固体培养基或液体培养基(液体培养基中应加比较多的蔗糖)。凡原球茎切口处不变褐或变褐物质排出量较少的种类，可用固体培养基，而易变褐的种类，最好用液体培养基，诱导温度应于23℃，光照强度1 500-20001x。

  27. 原球茎的增殖

  28. 3、苗的分化培养 兰科植物与其他草本花卉不同，它不易受生长调节物质的影响，一般是将原球茎转入离子浓度较低的培养基中，加入一些如椰子汁等天然提取物质，效果会更好，原球茎很快再生成植株。 lcm高的幼苗转移到壮苗培养基上培养3～6个月，使其长3～4片叶、3～4条根、3～10cm高，可移栽在泥炭和蛭石中，保湿弱光施肥。

  29. 原球茎再分化

  30. 蝴蝶兰

  31. 第五节 药用植物离体培养 芦荟 芦荟不能自花授粉结实，因此，用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方法主要是分株和分蘖，但难以快速、大量地繁殖种苗，这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。

  32. （一）材料和培养基 取l0-l5cm高的芦荟幼苗诱导培养基为MS+(1-6mg/ L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+ (0.1-0.5mg/L)NAA生根培养基为MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333

  33. （二）繁殖方法1、愈伤组织培养 茎尖部分—75%乙醇30-60s—升汞5-l0min—无菌水冲洗数次—解剖刀取出组织切块—接种 培养条件:光照 10-12h，1000一2000Lx， (25士)2℃。15-25d后，可膨大成愈伤组织，1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。

  34. 2、继代、分化培养 同诱导3、生根培养 培养条件同分化，半个月后即可生根。4、炼苗 清水喷湿，在15-25℃、湿度60%- 80%的条件下炼苗24h，也可视情况缩短为l2h。5、移栽 将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化，定期喷施驯化培养液和清水，15-20d后，即可移栽。

  35. 第六节 树木的离体培养 银杏 是园林绿化的珍贵树种，亦有较高的药用价值，以叶及种皮入药，它的叶的制剂能显著扩张脑血管，可治疗脑血栓、冠心病、心肌梗塞及大动脉炎等。种仁、有小毒、性平、有敛肺、定喘等功能。因此可说全身都是宝。但常规繁殖较难，因此组织培养有很大应用价值。

  36. 胚培养 （一）取材：选择生长饱满的银杏种子。 （二）操作： 1、升汞进行表面消毒，无菌条件下剥除外皮和胚乳。接种在MS  培养基上。培养条件：光照1500 LX ，温度25度。 2、愈伤组织的诱导：1/2MS+IBA浓度梯度（1、3、5、7、10PPM）诱导愈伤组织。将培养3天后的银杏胚接种在此培养基上，诱导出大量的愈伤组织。

  37. 3、愈伤组织继代培养： MS+1.0mg/LNAA+0.1mg/LKT，24—26℃，24h光照培养。20天继代一次。 4、生根培养： 1/2MS+0.2-0.5mg/lNAA 目前有人用根太阳（生根剂）0.5PPm+1/2MS培养基 （三）扩大繁殖和炼苗移栽   按常规方法即可

  38. 思考 1、说明马铃薯微型薯的生产技术 2、查阅资料，了解我国脱毒种苗生产现状 3、查阅资料，了解我国兰花组培生产特点 4、查阅资料，了解我国药用植物组培技术情况 5、查阅资料，了解我国林木组培生产状况

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