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Immunohistoquímica principios básicos

Immunohistoquímica principios básicos. Luis E. Ferrer Torres, MD FCAP Immunopathology and Molecular Pathology Laboratory. Inmunohistoquímica. Es una técnica para identificar componentes celulares o de los tejidos basándose en el principio de las interacciones entre los antígenos y anticuerpos

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Immunohistoquímica principios básicos

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Presentation Transcript

  1. Immunohistoquímicaprincipiosbásicos Luis E. Ferrer Torres, MD FCAP Immunopathology and Molecular Pathology Laboratory

  2. Inmunohistoquímica • Es una técnica para identificar componentes celulares o de los tejidos basándose en el principio de las interacciones entre los antígenos y anticuerpos • Antígenos: una molécula que induce la formación de un anticuerpo y que tiene uno o más lugares donde un anticuerpo puede unirse a ella. Esas regiones de la molécula que tienen la capacidad de unirse al anticuerpo esta formado por secuencias de amino ácidos o carbohidratos y se conocen como epítopes • Anticuerpos: Un tipo de proteína sérica que se conoce como inmunoglobulina

  3. Especifidad • Cuan selectivo es el anticuerpo en adherirse a un antígeno • Sensitividad • - Cuanto antígeno es capaz el anticuerpo de detectar. Ej. Una técnica más sensitiva es capaz de detectar menos antígeno y viceversa…

  4. Técnica de IHQ – técnica general • Corte • Deparafinar e hidratar • Recuperación de antígeno o antigen retrieval • Bloqueo de actividad o afinidad endógena • Anticuerpo primario • Sistema de detecciónovisualización • Cromógenopara AP opara HRP • Contraste • Montaje: base acuosaoresina

  5. Técnica de IHQ • Corte • Agua destilada • Laminillas cargadas • Deparafinar e hidratar • Temperatura NO >60° C • Nuevas soluciones permiten que se lleve a cabo en el mismo paso de recuperación de antígeno

  6. Técnica de IHQ Recuperación de antígeno: el proceso de fijar los tejidos puede ocultar o alterar los epítopes de las moleculas • Técnicas: químicas o enzimáticas • Químicas: • Depende de amortiguador • pH bajo: citrato pH 6.0 • alto pH: EDTA pH 9.0 • Técnica de aplicación: incubación, olla de presión, vapor… • Enzimaticas: tripsina, proteinasa K…

  7. Técnica de IHQ Métodos de detección o visualización • Directo • Indirecto • APA APAP • Avidina-Biotina • Dextran

  8. El anticuerpoestaligadodirectamente al marcadorquedetectará la presenciao no del antígenopara el cualestadirigido el anticuerpo Baja sensitividad Todavía la utilizamospara IF Técnica - Directa

  9. Se utiliza un anticuerpo primario de otra especie diferente a la humana en contra de el antígeno que estamos tratando de identificar (ratón o conejo) Se utiliza un segundo anticuerpo (anticuerpo secundario) contra la especie de animal del cual este creado el anticuerpo primario y este tiene el visualizador Más sensitivo Técnica - Indirecta 2o 1o

  10. Peroxidase Anti Peroxidase Alkaline Phosphatase Anti- Alkaline Phosphatase APA y APAAP

  11. Avidin-Biotin

  12. (No biotin) Dextran

  13. Variables queafectan el proceso de inmunohistoquímica • Pre-analítica • Fijación • Tipo: formalina amortiguada y neutralizada 10%(V/V) • Tiempo 6-48 horas • Temperatura • <60° C • Deshidratación • Alcoholes graduados • Clarificación • Impregnación

  14. Variables queafectan el proceso de inmunohistoquímica • Analítica • Manual • Automatizado • Sistema de detección o visualización • Efecto de orilla • Efecto de secado • Efecto de lavado incompleto

  15. EGFR

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