紫草中水溶性成分的提取、纯化以及鉴定

1. 紫草中水溶性成分的提取、纯化以及鉴定 答辩人：陈敏 指导老师：黄志纾

2. 紫草背景 • 紫草为传统中草药，始载于《神农本草经》 • 它有凉血、活血、解毒和透疹等功能 • 紫草色素可作为天然色素广泛应用于医药、化妆品和印染工业

3. 目前紫草的研究 • 多为脂溶性成分的研究，以紫草萘醌类化合物为主 • 研究表明这类物质有抗癌，抗炎、抗菌等生理活性 • 它作为天然色素有很大的开发应用前景

4. 工作设想 • 前人研究的基本都是脂溶性成分，水溶性成分却未曾涉及研究 • 据中草药书记载，古人主要用水煮紫草来疗治梅毒。可大胆推测，紫草中水溶性成分具有医治梅毒的生理活性

5. 实验部分 • 紫草含水量的测定 将粉碎了的紫草置于烘箱，测定在T=100℃不同时间下烘前与烘后产品质量差。 平均得含水量为13.8% 这对水溶性成分的研究有鉴定参考作用

6. 不同提取方法提取 用水做溶剂，通过改变索式提取、水煮回流提取及超声波提取三种方法的提取条件（温度，时间，水量比）进行提取并比较产率来确定实验的最佳条件。 产率=提取产品/原料 水量比（w/w)=样品量:水量

7. 1 改变时间提取。其中水煮T=100℃，水量比均 为 1:100

8. 2 改变水煮提取温度进行提取（索式提取和超声波提取不受温度影响）。固定时间t=100h，水量比为1:100 3 改变水煮提取和超声波提取的水量比（索式提取不受水量比影响）

9. 各提取方法不同条件下的产率比较结论 • 索式提取的基本原理是水蒸气遇冷凝结所落下的水珠（水珠的温度一般为50℃-60℃）洗脱样品而得到产品，所以它不受提取温度和水量的影响。而超声波也不受温度影响。所以只有水煮需要进行温度测定。而根据数据，产率随着水量比例的提高而增多，所以可得出结论，水溶剂增多有利于产率提高。由于实验条件有限，故只做到1：250的比例。数据表明了在T=100℃下于水量比例为1：250时的水煮提取为最佳实验条件。其原因估计为物质在水的溶解性受温度的影响比受提取时间和水量比的影响大，故温度为主要影响因素。

10. 过滤 蒸馏 冷冻静止 离子水溶解 加5%的活性炭使溶液脱色 与乙醇1:5混合 与氯仿-正丁醇（4:1)混合* 得粗产品 • 紫草提取的后处理 离心、烘干 振摇30min 分开水相和有机相，取水层，重 复*步骤4-5次 作紫外测定 得纯产品 离心1min 脱蛋白处理后，从紫外图可看出，原本在波长为300nm左右的峰不见了，可见蛋白已除。

11. 定性鉴定方法和现象 共采用了成刹法，显色法，feiling试剂法， 红外测定 以及样品衍生化后测HPLC等方法 衍生化步骤： 70℃水浴 t=30min 样品+PMP溶液+NaOH混匀 加入盐酸混匀 乙酸异戊脂萃取 斡旋，离心 再次萃取下层 加水离心 HPLC分析

12. 结论 • 以上现象都证明了糖的存在，而从红外图更可看出有多糖的羟基峰和特征峰，可判断为多糖。故可初步确定紫草中水溶性成分为结构复杂的多糖和糖蛋白的混合物。多糖的研究一向是比较艰难的课题，虽然有前人经验借鉴，但依然不成熟。在此实验过程中，糖提取的并不十分纯，里面含有一些杂质影响测定。这些都有待提高，同时我希望将来能继续研究此成分的具体结构及其生理活性。

13. 谢谢！！！ • 衷心感谢黄志纾老师和吴海强师兄在实验过程中对我的耐心指导，并感谢创新基金对本实验提供的资助。 • 谢谢在场的各位老师和同学！