实验 出凝血检查

1. 实验 出凝血检查 上海交通大学医学院 余文红

2. （一）血标本的采取应注意的问题

3. 1. PT、APTT凝血实验检查均使用静脉血。采血人员应技术熟练，以防止组织损伤，外源性凝血因子进入针管。

4. 2．一般血液采集，进入容器至进行实验所用的时间越短，所分析的凝血因子被保护得越好。从输液三通管取出血的做法不可取。2．一般血液采集，进入容器至进行实验所用的时间越短，所分析的凝血因子被保护得越好。从输液三通管取出血的做法不可取。

5. 3．取血时病人应松驰，环境温暖，防止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能小，取血时，拉针栓的速度要慢而均匀，使血液平稳地进入注射器，防止气泡的产生。3．取血时病人应松驰，环境温暖，防止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能小，取血时，拉针栓的速度要慢而均匀，使血液平稳地进入注射器，防止气泡的产生。

6. 4．一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，一般提倡使用真空采血管。4．一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，一般提倡使用真空采血管。

7. 5．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考虑结果的精确性，应将试管刻度的可能误差控制在既定体积的10%以内。5．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考虑结果的精确性，应将试管刻度的可能误差控制在既定体积的10%以内。

8. 6.采血后标本在低温保存且在一定时间范围内。6.采血后标本在低温保存且在一定时间范围内。

9. 7. 国际血液学标准化委员会（ICSH）、国际血栓与止血委员会（ICTH）推荐使用3.2g/dl（含2H2O）或0.109mol/L的枸橼酸钠作为凝血因子检查的抗凝剂。

10. 8.抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度，进而影响试验结果，因此应根据患者红细胞比例（Hct）状况随时调整抗凝剂用量。

11. （二）应用试剂应注意的问题

12. 1.组织凝血活酶工作制剂的国际敏感指数（ISI），为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。1.组织凝血活酶工作制剂的国际敏感指数（ISI），为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。

13. 2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步骤必须严格按照说明书进行。通常在使用前必须充分混匀试剂，以使微粒重新均匀悬浮于液体中。2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步骤必须严格按照说明书进行。通常在使用前必须充分混匀试剂，以使微粒重新均匀悬浮于液体中。

14. 3.试剂准备过程中应该使用去离子水。

15. 4.正常对照血浆通常将多份健康人血标本混在一起，以弥补个体误差。4.正常对照血浆通常将多份健康人血标本混在一起，以弥补个体误差。

16. （三）使用实验器材应注意的问题

17. 1. 玻璃器皿的要求：贮存和测试时应选用干净、没有划痕的试管。

18. 2. 温度的要求：人工测定终点法要求水浴箱的温度必须保持在（37±1）℃，并且周围照明设备要好，便于读取终点。

19. （四）实验操作应注意的问题

20. 1. 许多试验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及pH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化。

21. 2. 手工法PT或试管法CT检查时，倾斜试管动作一定要轻，角度要小，以减少血液与管壁的接触面积。

22. 3. 血液凝固主要是酶催化的反应，所以实验过程中要严格控制理想的pH环境和溶液的离子强度。

23. 4. 试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。

24. 5. APTT、PT需乏血小板血浆。

25. 6. 试验前检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。

26. 7. 报告方式： • 以PT的秒（s）数报告。 • 以患者PT（s）/正常对照（s）的比（PTR）报告。 • 在口服药物治疗监控时以INR报告。 • ICSH规定，不再用百分比（活动度）报告。 • APTT以秒报告。

27. 1987年WHO提出PT值用INR（international normalized ratio国际标准化比值）作为PT结果报告形式，并用以作为抗凝治疗监护的指标。

28. INR=［病人PT（s）/正常人平均PT（s）］ISI PTR=受检者PT（s）/正常对照PT（s） INR=PTRISI ISI：国际敏感指数（international sensitivity index）1～1.9

29. CT、PT、APTT、 RT、Fg、TT

30. 凝 血 时 间 测 定 C T

31. 目的：掌握玻璃试管法凝血时间测定的方法

32. 原理： 离体静脉血与玻璃表面接触后，血中XII因子活化并启动内源性凝血途径，最终生成纤维蛋白而使血液凝固所需的时间。

33. 器材： • 6mm直径玻璃试管3支 • 静脉采血器材 • 37℃恒温浴箱 • 秒表

34. 步骤：3支试管各1ml血，每隔0.5min倾斜，第一管计时后，立即观察第二、三管并计时，直至血液凝固。步骤：3支试管各1ml血，每隔0.5min倾斜，第一管计时后，立即观察第二、三管并计时，直至血液凝固。 结果判断：从血液刚进入注射器至第3管凝固所需时间即为凝血时间。

35. 正常参考值：4～12分钟 • 报告方式：CT X.Xmin（玻璃试管法）

36. 注意事项： • 试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”且血液中不含泡沫。 • 温度恒定为37℃，倾斜试管角度应在30°左右。

37. 评价： • 凝血时间曾用玻片法测定，但由于毛细血管采血，易混入组织液而使凝血时间正常，属于淘汰方法。 • 延长：严重内源性凝血途径凝血因子有缺陷；血中抗凝物质增多；肝素治疗 • 缩短：高凝状态（DIC早期）

38. 凝 血 酶 原 时 间P T

39. 原理： 在乏血小板血浆中加入组织因子和钙离子（钙凝血活酶）后，血浆发生凝固的时间即为凝血酶原时间（PT）。

40. 步骤： • 取空腹静脉血1.8ml加入含有0.2ml109mmol/L枸橼酸钠的试管中混匀备用。 • 抗凝血以3000r/min离心10min分离血浆 • 将试剂、正常人混合血浆、待测血浆与37℃预热5min。 • 血浆0.1ml加入混匀的试剂0.2ml，开动秒表计时。

41. 正常参考值： • PT：11～13秒 • PTR：1±0.15 • INR：0.8～1.5

42. 报告方式： • PT：X.Xs，正常人血浆X.Xs • PTR：X.X • INR：X.X

43. 注意事项： • 试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”，抗凝剂与血液比例（1：9）应准确。取血后4h内完成测定。 • 钙凝血活酶必须标有国际敏感指数（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。 • 标本测定前应先测定正常人混合血浆，其PT值在允许范围内才能测定样本。

44. 评价： 血浆凝血酶原是一种筛选试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或相应抑制物的存在，也用于监测口服抗凝治疗时引起的凝血酶原和因子VII、X水平的下降。

45. 实质： 对检测样本（血浆）中存在凝血激酶时的再钙化反应，这种过程包括了因子VIIa、组织因子、磷脂、钙离子对凝血酶原的活化，凝血酶裂解纤维蛋白原和纤维蛋白单体的聚集交联。

46. 活化部分凝血活酶时间测定APTT

47. 原理： 用白陶土激活XII因子、脑磷脂代替血小板磷脂，测定乏血小板血浆加入Ca2++后凝固所需时间。

48. 步骤： • 采血 空腹静脉血1.8ml+0.2ml 109mmol/L枸橼酸钠混匀。 • 分离血浆 3000r/min离心10分钟分离血浆。 • 溶解试剂 临用时加1ml蒸馏水，室温静置15min以上，混匀后使用。 • 预温活化 0.1ml血浆+APTT试剂0.1ml混匀，37℃准确孵育3min（其间轻轻摇动数次） • 加钙计时 加入0.1ml 25mmol/L CaCl2混匀并立即开动秒表计时，20s后，观察混合液流动状态。

49. 正常参考值：一般在33.68～40.32s（不同仪器和试剂所测之参考值有差别）正常参考值：一般在33.68～40.32s（不同仪器和试剂所测之参考值有差别） • 报告方式： APTT：XX.Xs，正常人血浆：XX.Xs

50. 注意事项： • 采血时穿刺尽量一针见血，不要淤血和气泡，采血后立即与抗凝剂混合，尽快送往实验室。使用枸橼酸盐（抗凝）血浆 • 如果不能立即测试，应尽快分离血浆，盛血浆的容器加塞，防止PH值改变 • 血浆在2～8℃下保留7天 • 钙凝血活酶必须标有国际敏感指数（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。