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实验四 酶联免疫吸附试验

实验四 酶联免疫吸附试验. Enzyme linked immunosorbent assay. （ ELISA ）. 本次实验内容：. 双抗体夹心 ELISA 检测鸭肝炎病毒 （ duck hepatitis virus, DHV ）. 目的： 掌握双夹心 ELISA 原理，操作方法及结果判定方法. 原理： 简单地说是利用抗原 - 抗体反应的高度特异性和酶反应的高度敏感性，进行对抗原或抗体的检测，是一种定性或定量的综合性技术。. DHV. 加羊抗兔 IgG-HRP. 加底物显色. 加兔抗 DHVIgG. 加 DHV 或被检. 包被鸭抗 DHVIgG.

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实验四 酶联免疫吸附试验

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Presentation Transcript

  1. 实验四 酶联免疫吸附试验 Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）

  2. 本次实验内容： 双抗体夹心ELISA检测鸭肝炎病毒 （duck hepatitis virus, DHV）

  3. 目的：掌握双夹心ELISA原理，操作方法及结果判定方法目的：掌握双夹心ELISA原理，操作方法及结果判定方法 原理：简单地说是利用抗原-抗体反应的高度特异性和酶反应的高度敏感性，进行对抗原或抗体的检测，是一种定性或定量的综合性技术。

  4. DHV 加羊抗兔IgG-HRP 加底物显色 加兔抗DHVIgG 加DHV或被检 包被鸭抗DHVIgG

  5. 实验材料： 1、鸭抗DHV抗体 2、酶标记羊抗兔DHV－IgG 3、阳性对照：DHV 4、阴性对照：健康鸭组织悬液 5、被检材料 6、包被液 7、洗涤液 ８、保温液：牛血清白蛋白（BSA） 0.5g 洗涤液 100ml

  6. 9、底物液 10、终止液：（2M H2SO4） 11、ELISA 板（聚苯二烯） 12、微量加样器（50ul） 13、酶联免疫吸附测定仪

  7. 实验步骤： 1、包被鸭抗DHV--IgG：用包被液稀释好IgG加入ELISA 板孔内,100 ul/孔，置37℃，1h后取出或放4℃冰箱过夜。 2、洗涤:次日从冰箱中取出滴定板,甩干内容物,向孔内加入(原则上以不溢出孔为益,用塑料吸管)洗涤液,静置3分钟,甩干,并将板孔朝下放再滤纸上反复拍打干净,再加洗涤液,如此洗3次,每次3分钟 3、封闭：加0.5%BSA，100 ul/孔，37℃，30分钟，取出后甩干。 4、加被检样品：100 ul/孔，同时设阳性、阴性、空白（加保温液）对照。均为100 ul/孔，37℃，30分钟。

  8. 5、洗涤：同2 6、加兔抗DHV-IgG，100ul/孔，37℃，30分钟， 取出后甩干 7、洗涤：同2 8、加羊抗兔IgG－HRP ,100 ul/孔，37℃，30分 钟，取出后甩干, 9、洗涤：同2 10、加底物液：100ul/孔，置37℃，放置5－15 分钟 １1、终止反应：每孔加终止液50ul，室温5分钟， 终止反应。

  9. 结果判定： • 阴性对照孔接近无色或OD450不超过0.2，阳性对照孔黄色或OD450超过0.2以上，为试验结果准确。 • 测被检孔OD450值，OD450≥0.2判为阳性，OD450＜0.2判为阴性。

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