1 / 22

ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ

ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ. И.С. Мамедов, Ю.А. Смолина, В.С. Сухоруков НИЛ общей патологии ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии. Функции пероксисом. катаболизм полиаминов «пероксисомное дыхание» синтез плазмологенов

andres
Download Presentation

ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ И.С. Мамедов, Ю.А. Смолина, В.С. Сухоруков НИЛ общей патологии ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии

  2. Функции пероксисом катаболизм полиаминов «пероксисомное дыхание» синтез плазмологенов β-окисление длинноцепочечных (С24-26 и более)и разветвлённых жирных кислот (С 26 и более) биосинтез эфиросодержащих липидов α-окисление жирных кислот детоксикация глиоксилата

  3. Классификация пероксисомных болезней Критерии разделения: морфологический: отсутствие или наличие пероксисом в печени биохимический: нарушение одной или нескольких функций пероксисом

  4. Классификация пероксисомных болезней 1-ая группа • Синдром Целльвегера (СНЦ) • Инфантильная форма болезни Рефсума • Неонатальная адренолейкодистрофия • Точечная остехондродисплазия • Ряд форм амавроза Лебера • Гиперпипеколовая ацидемия • Ризомиелическая точечная хондродисплазия (РТОХД) первого типа Пероксисомы в печени отсутствуют или их количество значительно уменьшено, полное нарушение биогенеза.

  5. Классификация пероксисомных болезней 2-ая группа Нарушение нескольких биологических функций, нормальное количество пероксисом в печени целльвегероподобный синдром синдром недостаточности D-бифункциональных белков синдром псевдоцелльвегера

  6. Классификация пероксисомных болезней 3-ая группа Нарушение одной биологической функции нормальное количество пероксисом в печени Пероксисомные нарушения β-окисления: X-сцепленная адренолейкодистрофия (Х-АЛД) Недостаточность ацил-КoA-оксидазы Недостаточность D-бифункциональ­ных белков Недостаточность белка, транспортирующего стирол (СТБ) Недостаточность 2-метил-ацил-КоА-редуктазы (МАКoАР) Нарушения биосинтеза эфиросодержащих липидов: РТОХД второго типа РТОХД третьего типа Нарушения α-окисления фитановой кислоты: Болезнь Рефсума Нарушение детоксикации глиоксилата Гипероксалурия первого типа

  7. Уровни содержания длинноцепочечных жирных кислот (ДЦЖК), пристановой и фитановой кислот в плазме крови при различных пероксисомных нарушениях.

  8. Диагностические маркёры пероксисомных нарушений Фитановая кислота(C19H39COOH) Пристановая кислота Гексакозаеновая кислота (С26:0) Лигноцериновая кислота (С24:0) Бегеновая кислота (С22:0) C24/C22 C26/C22

  9. β-окисление жирных кислот

  10. Окисление фитановой кислоты

  11. Окисление пристановой кислоты

  12. Газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС) Agilent 6850/5375

  13. Газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС) Shimadzu GS 17A/GSMS-QP 5050

  14. Rf/DC Voltage Принцип работы масс-спектрометрического детектора

  15. Материалы и методы Материалом для исследования служит плазма, собранная аспирацией венозной крови как детей, так и взрослых пациентов. Для длительного хранения, чтобы исключить изменения уровней содержания исследуемых соединений, плазма замораживается. Большое число образцов плазмы пациентов, поступающих в лабораторию из различных клинических баз РГМУ, объединяются и тщательно перемешиваются. Для каждой серии анализа используются образцы, полученные из смеси плазмы одной выборки.

  16. Этапы пробоподготовки: Кислотный гидролиз Щелочной гидролиз Экстракция гексаном Упаривание эстрагента в токе гелия Дериватизация ацилирующим реагентом MBTFA

  17. Хроматограмма длинноцепочечных жирных кислот в плазме крови, полученная методом ГХ-МС

  18. Верхние эталонные значения фитановой и пристановой кислот для людей в возрасте 2-х лет и более: фитановая кислота – 10 мкмоль/л пристановая кислота – 3 мкмоль/л Концентрации ДЦЖК в плазме контрольных образцов, в мкмоль/л .

  19. Изменения уровней ДЦЖК в плазме при различных пероксисомных заболеваниях СС26:0 мкмоль/л Рис. 1. Уровни содержания жирной кислоты С26:0 в плазме крови пациентов с различными наследственными пероксисомными заболеваниями и контрольной группы в мкмоль/л.

  20. Изменения уровней ДЦЖК в плазме при различных пероксисомных заболеваниях С24/С22 Рис. 2. Значение соотношения С24/C22 для пациентов с Х-сцепленной адренолейкодистрофией и контрольной группы.

  21. Изменения уровней ДЦЖК в плазме при различных пероксисомных заболеваниях СФитановойк-ты мкмоль/л Рис. 3. Уровни содержания фитановой кислоты в плазме крови пациентов с болезнью Рефсума, РТОХД первого типа и контрольной группы в мкмоль/л.

  22. Нами показано, что концентрация длинноцепочечных жирных кислот в плазме контрольной группы не зависит от возраста в то время, как для фитановой и пристановой кислот корреляция прослеживается в определённой степени. Верхний эталонный уровень для фитановой кислоты, равен 10 мкмоль/л, тогда как для пристановой - 3 мкмоль/л для пациентов в возрасте от 2-х лет и более. Совместный анализ длинноцепочечных жирных кислот, пристановой и фитановой кислот является действенным методом для выявления больных с пероксисомными нарушениями, что особенно важно на ранних стадиях заболевания.

More Related