240 likes | 463 Views
Биотехнология и эффективные штаммы-продуценты альтернативного топлива – биобутанола 23-24 февраля 2010 г. Ашхабад Шульга Сергей Михайлович Shulga5@i.ua ГУ “ИНСТИТУТ ПИЩЕВОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ И ГЕНОМИКИ” НАЦИОНАЛЬНОЙ АКАДЕМИИ НАУК УКРАИНЫ , г. Киев. Создание производства жидких топлив
E N D
Биотехнология и эффективные штаммы-продуценты альтернативного топлива – биобутанола 23-24 февраля 2010 г. Ашхабад Шульга Сергей Михайлович Shulga5@i.ua ГУ “ИНСТИТУТ ПИЩЕВОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ И ГЕНОМИКИ” НАЦИОНАЛЬНОЙ АКАДЕМИИ НАУК УКРАИНЫ, г. Киев
Создание производства жидких топлив из возобнавляемого сырья растительного происхождения (биомассы) 1 Биодизель 2 Биоэтанол 3 Биобутанол
Метанол СН3ОН октановое число 91 Этанол С2Н5ОН октановое число 92 Пропанол С3Н7ОН октановое число 91 Бутанол С4Н9ОН октановое число 94 Бензин смесь октановое число 96
Преимущества бутанола в сравнении с этанолом: • Большее содержание энергии (теплообразующая способность), чем у этанола. • Бутанол в шесть раз меньше испаряется чем этанол и в 13,5 раз меньше испаряется чем бензин, поэтому его безопаснее использовать как добавки к бензину. • Бутанол можно транспортировать через существующие топливные трубопроводы, в то время как этанол необходимо транспортировать железной дорогой, баржами или грузовиками-цистернами. • Бутанол можно использовать вместо бензина в соотношении один к одному, например 100% или любые другие проценты, а этанол может использоваться только как добавка к бензину до 85% и то только после значительных модификаций двигателя. Во всем мире отдают предпочтение смеси с 10% содержанием этанолу. • Бутанол не дает окисей серы или азота.
Бутанол получают: • Путем синтеза химического сырья; • Путем микробиологического синтеза -переработка сахара или крахмала с/х растительных культур; -переработка лигноцелюлози.
Биосинтез бутанола из сахаров etanol acetone butanol
Оптимизация технологии биосинтеза метаболитов состоит из следующих основных этапов: 1 Первичная селекция штаммов микроорганизмов; 2 Определение оптимальних значений температуры, рН и потребности в кислороде; 3 Определение оптимального режима питания и накопления биомассы; -выхода продукта в перерасчете на потребленный субстрат; -концентрации продукта; -скорости образования продукта; 4 Иммобилизация клеток продуцентов; 5 Изменение генетической структуры организма для увеличения образования продукта.
Отобранные штаммы-продуценты клостридий 1. Clostridium beijerinckii NCIMB 8052 (АТСС 51743), 2. Clostridium acetobutylicum ATCC-55025, 3. Clostridium acetobutylicum ATCC-4259 (ATCC-39236), 4. Clostridium acetobutylicum ATCC-824, 5. Clostridium tyrobutyricum ATCC-25755.
Образец Контроллер Вход Водяная рубашка Выход Перистальтический насос и
Реактор с взвешенной твердой фазой с иммобилизированными клетками продуцента 4 1 5 3 2 6
14 12 20 г/л 10 80 г/л 40 г/л 8 10 г/л Бутанол, г/л 6 4 2 0 0 10 20 30 40 50 60 70 Час, год. Влияние концентрации глюкозы на кинетику образования бутанола
Катализируемые переходы • ацетил-CоА в ацетоацетил-CоА (ацетил-CoA ацетилтрансфераза) • ацетоацетил-CоА в 3-гидроксибутирил-CоА (3-гидроксибутирил-СоА дегидрогеназа) • 3-гидроксибутирил-CоА в кротонил-CоА (кротоназа) • кротонил-CоА в бутирил-CоА (бутирил-СоА дегидрогеназа) • бутирил-CоА в бутиральдегид (бутиральдегид дегидрогеназа) • бутиральдегид в бутанол (бутанол дегидрогеназа)
Метаболическая инженерия клостридий Штаммы АТСС 824 Clostridium acetobutylicum и АТСС 25755 Clostridium tyrobutyricum Штаммы-суперпродуценты Clostridium acetobutylicum и Clostridium tyrobutyricum
Геном и мегаплазмида Clostridium acetobutylicum ATCC 824из работыJournal of Bacteriology 2001, v.183, № 16, p. 4823-4838 • 3778 генов • хромосома 3940880 п.н. • мегаплазмида 192000 п.н.
Гены, кодирующие синтез ацетона • aad, ctfA, ctfB, adc. Гены, кодирующие образование бутанола • bdhA, bdhB, adhE. Праймеры pE1(BamH1 подчеркнуто) 5'-ATGGATCCTTTTATAAAGGAGTGTATATAAA TGAAAG-3'; pE2 (SfoI подчеркнуто) 5'-TTGGCGCCATAATGAAGCAAAGACTATTTTA CATTC-3'. ВекторpGEM-T
7622 п.н. • Схематическое изображение плазмиды pE5α, 2600 п.н. содержит adhE2 и клонирован в вектор pSOS95 между thl-промотором (Р) и adc-терминатором (Т)
Бутанол Масляная кислота Ферментер 2 Ферментер 1 Крахмал/ глюкоза Биосинтез бутанола в два этапа Бутанол
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ