120 likes | 252 Views
BIM SB 2001. peptidszintézis. SZINTÉZIS PROTE(IN)ÁZ BONTÁS . (1901). -CO-NH-. -CO-NH-. peptidszintézis. BIM SB. BONTÁSI HELY SPECIFIKUS PROTEINÁZOK. Tripszin * (EC 3.4.21.4) Arg/Lys – Y as Szubtilizin * (EC 3.4.21.62) Trp/Tyr/Phe/Leu – Y as
E N D
BIM SB 2001 peptidszintézis SZINTÉZIS PROTE(IN)ÁZ BONTÁS (1901) -CO-NH- -CO-NH-
peptidszintézis BIM SB BONTÁSI HELY SPECIFIKUS PROTEINÁZOK Tripszin* (EC 3.4.21.4) Arg/Lys – Yas Szubtilizin* (EC 3.4.21.62) Trp/Tyr/Phe/Leu – Yas Elasztáz* (EC 3.4.21.36) Ala/Ser – Yas Termolizin (EC 3.4.24.27)Xas – Leu/Phe Pepszin(EC 3.4.23.15) Phe/Tyr/Leu – Trp/Phe/Tyr Yas=bármelyik aminosav,-észter vagy -amid *szerin proteázok Xas=bármelyik aminosav
Reagáló aminosavak védelme Benziloxikarbonil- (Z) -NH2 védelme Acetil- (Ac) R CH-O-CO-NH-CH-COOH R CH3-CO-NH-CH-COOH -COOH védelme Amid- R R H2N-CH-CO-O-CH3 H2N-CH-CO-NH2 Észter: -OCH3, -OCH2CH3… Melléktermékek elkerülésére csoport védelelm Ez aktiválja is a karboxil csoportot
1. Egyensúlyi kontroll peptid Egyensúlyi állandó 1.Aminosav 2.amin(osav) Egyensúly eltolásának lehetőségei *KICSAPÁS Oldhatalan peptidek, védő csoportok hatása is. peptidáz Pl.: Z-Phe-OH + Leu-NH2 Z-Phe-Leu-NH2 Aminocsoport védve karboxilcsoport védve dipeptid-származék asav-amid kicsapódik *KÉTFÁZISÚ RENDSZER 2-5% H2O szerves oldószerben: a disszociáció visszaszorul *VIZES RENDSZERBEN : dimetil-formamid, -szulfoxid, trietilénglikol tripszin *pH eltolás: 9,5 6,5 20xKeq Z-Trp + gly Z-Trp-Gly *Aminosavak koncentráció növelése karbobenzoxi Trp
ɑAPM Véletlen:fekély elleni szer,ráömlött a kezére,ottmaradt, Felvett egy papírlapot(megnyalta az ujját) – édes volt Hőre bomlik: sütésre nem jó
D Z-Asp-COO - COO - b D,L D,L + + - Z-Asp-COO N-Phe-OCH H 3 3 b - 1.termolizin COO kicsapódik szűrés 2. N-(benziloxikarbonil)-Asp L L D + „addíciós vegyület” addukt H2 N-Phe-OCH3 kicsapódik Z-Asp-CONH-Phe-OCH 3 COO - b 3.kristályositás 4. sósavas kezelés és elválasztás Csak oldott enzimmel D H N-Phe-OCH 2 3 L L Z-Asp-CONH-Phe-OCH 3 COOH b 5. katalitikus hidrogenolizis Pd/C L L Asp-CONH-Phe-OCH 3 100-200x α-ASZPARTÁM COOH b
BuOH S1 S2 Vizes:10% konverzió Vizes/szerves: 95%> termék szerves 40oC R vizes S1+S2+E Szerves fázis holdup:10% ülepítő
http://www.mozaweb.hu/Tankonyv-Biologia-Biologia_11_A_sejt_es_az_ember_biologiaja-Az_izleles_es_a_szaglas-MS-2642-264-12http://www.mozaweb.hu/Tankonyv-Biologia-Biologia_11_A_sejt_es_az_ember_biologiaja-Az_izleles_es_a_szaglas-MS-2642-264-12
BIM SB 2001 peptidszintézis alkalmazás Glutation enzimaktivátor, antioxidáns Angiotenzin,inzulin hormonok Leu-enkefalin opioid hatás Met-enkefalin Vazopresszin vese, vérnyomás Dinorfin opioid hatás Kalcitonin Szérum Ca2+ csökkentés Oxitocin méhösszehúzódás Aszpartám édesítőszer DE. rDNS technológia !