The method to research the interaction of drug and ligand

1. The method to research the interaction of drug and ligand lvbo

2. 1 2 3 BSA 氨基酸组成 高级结构及活性结合位点 补充 BSA 简介

3. 1 BSA 氨基酸组成 BSA占牛总血清蛋白含量的60%，并且提供了大约80%的血渗透压。 分子量 66500 Da pKa = 4.6

4. 2 高级结构及活性结合位点 BSA三维结构类似于球状，是由三个相似的结构域组成（I、II 和III），每一个结构域又由两个亚结构域组成(A和B)。 BSA的亚结构域以槽口相对的方式形成圆筒状结构，疏水性氨基酸大多包埋于圆筒内部，构成疏水腔。 小分子药物键合的主要区域在BSA亚结构域IIA和IIIA的疏水腔中。

5. 3 补充 文献: BSA 可与很多种带负电芳香族化合物结合还可与多种金属离子（Cu、Ni、Ag、Au等）、谷胱甘肽、 半胱氨酸共价结合。 已有很多人利用光谱法、电化学法、色谱法研究药物与BSA结合模型。 研究内容主要有： 1.结合常数 Ka 包括解离常数、吸附常数、竞争参数、抑制参数等 2.热动力学参数：可用于判断结合作用力（疏水 氢键 静电 范德华力 ） 3.结合位点研究 4.结合对蛋白质二级及更高级结构的影响

6. 1 3 2 光谱分析法 固定化蛋白 亲和色谱法 药物与蛋白结合作用研究 按方法分类

7. 1 光谱分析法 光谱分析方法包括：荧光分析法、紫外分析法、圆二色谱法、红外、共振光散射、 荧光分析法：蛋白质本身能吸收270-300nm，发出荧光，采用荧光滴定，由荧光光谱可以得到药物蛋白结 合常数、结合位点数、结合部位、作用力类型。 新的荧光技术：时间分辨荧光光谱、同步荧光光谱技术等 其中同步荧光光谱可以单独的检测酪氨酸、色氨酸荧 光变化 举例：荧光分析法 研究5-羟基喜树碱与BSA相互作用。 始

8. 1 光谱分析法 荧光分析法： BSA 1*10^-5 M 分析？ 狭缝宽度 5 nm 低浓度 5-HCPT ：340 nm 淬灭 408 nm 等发射点（复合物峰） 狭缝宽度 2.5 nm 高浓度 5-HCPT，动态淬灭。 BSA荧光发射峰的位置与其色氨酸残基的微环境有关，蓝移说明BSA腔内疏水环境的极性减弱，疏水性增强，肽链收缩。

9. 2 亲和色谱法 Frontal Chromatography. Non linear chromatography

10. 3 固定化蛋白 A new Approach to Determine Camptothecin and Its Analogues Affinity to Human Serum Albumin

11. 1 2 3 4 Introduction Experiment Result and discussion Conclusion A new Approach to Determine Camptothecin and Its Analogues Affinity to Human Serum Albumin

12. 1 Introduction Camptothecin (CPT) is mainly from Camptotheca acuminata. A potential treatment for lung cancer, colorectal carcinoma, non-Hodgkin’s lymphoma, and cervical cancer. 1.Solubility issues. 2.Adverse effects. 3.Not stable in physiological pH. Inactive Bound to HSA PROBLEM

13. 1 Introduction Irinotecan and Topotecan treat for metastatic colorectal cancer and refractory ovarian cancer, respectively. Optical biosensor and spectroscopic techniques Surface plasmon resonance. Affinity chromatography …… Ka Method by

14. For calculate Ka BCA Binding 2 Experiment procedure MB-HSA Super- natant Ka

15. 2 Experiment 25 mg MB (1 um ) 5% C5H8O2 HAS (10 mg) 3 h 7 DAYS PBS 1 M Gly Distribute

16. 紫蓝色 2 Experiment 562nm

17. 2 Experiment 试剂A：1％BCA二钠盐 2％无水碳酸钠 0.16%酒石酸钠 0.4％氢氧化钠 0.95％碳酸氢钠 混合调PH值至11.25。 试剂B：4％硫酸铜。 BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml， 微量BCA测定范围在0.5-10μg/ml 29.5 ug HAS / 2.5 mg MB 440 pmol HSA/ 2.5 mg MB

18. 2 Experiment 5 uM ligand 350 ul 2.5 mg MB (29.5 ug HSA) 1 ml Incubated 5 min Separation 1 min LC-MS-ESI Change the concentration of the ligand:1~ 15 uM All of the Rof lactone and carboxylic form of CPT 10-OH-CPT SN-38 AND DB-67 are more than 0.99.

19. 2 Experiment The free ligand The blank (MB) HSA MB

20. 2 Experiment

21. 3 Result and discussion

22. 3 Result and discussion Camptothecins Short-Term Stability Test: PBS pH = 7.4 at 18 and 37 ℃

23. 3 Result and discussion 1. hydrophobic 2. ionic interaction Bmax= 212 ±15 pmol

24. 4 Conclusion • This study confirmed lower binding of inactive carboxylic forms of • hydroxycamptothecins analogues to HSA in comparison with CPT. • Their lactone analogues could be used as anticancer activity. • 2. MB with appropriate immobilized proteins can be used in early stage of durg • development. • Additionally, the application of this novel technique as a routine method to • accurately qualify interaction between ligand and protein has to be preceded by • numerous experiments.

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