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Introduction à l’Hématologie

Introduction à l’Hématologie. Cellule souche hématopoïétique. Progéniteur myéloïde. Progéniteur lymphoïde commun. Mastocyte. Plaquettes. Monocyte. Lymphocyte B. Lymphocyte T. Erythrocyte. Polynucléaires. L’hématopoïèse. Erythropoïèse. Granulopoïèse. Lymphopoïèse.

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Introduction à l’Hématologie

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Presentation Transcript

  1. Introduction à l’Hématologie

  2. Cellule souche hématopoïétique Progéniteur myéloïde Progéniteur lymphoïde commun Mastocyte Plaquettes Monocyte Lymphocyte B Lymphocyte T Erythrocyte Polynucléaires L’hématopoïèse Erythropoïèse Granulopoïèse Lymphopoïèse

  3. Une cascade de divisions asymétriques Autorenouvellement & Différenciation Cellule Souche Hématopoïétique : Rare, morph. non discernable, G0, autorenouvellement et différenciation, résistante aux cytotoxiques, reconstitution à long terme de l’hématopoïèse  Fraction ciblée en greffe Progéniteurs engagés : Mise en évidence par culture à court terme : BFU-E, CFU-E, CFU-GM, CFU-GEMM Cellules matures : Processus de maturation final avec acquisition des éléments de spécificité. Diapédèse- Chimiotactisme-Adressage

  4. Multiples lignées avec spécificité fonctionnelle L.B Plasmocytes  Ac Mégacaryopoïèse • Cellules dédiées à l’hémostase : • Fragmentation cellulaire  plaquettes • Processus mitotique très particulier •  Polyploïdie physiologique • Acquisition de protéines spécifiques : • prot. Ca2+, héparine • - Capacité d’agrégation  clou niveau brêche Macrophage Ostéoblaste

  5. Modifications morphologiques- gain de fonctions - Granulopoïèse • Durée 5-7 jours : • Diminution de taille • Condensation nucléaire, perte des pptés • de division • Acquisition de protéines spécifiques : • enzyme de la phagocytose Hémoblaste Myéloblaste Promyélocyte Polynucléaire N Métamyélocyte N Myélocyte N

  6. Modifications morphologiques- reconnaissance cytologique- Erythropoïèse Cytoplasme change du bleu vers l’orange Diminution de l’ARN Augmentation de l’Hb Proérythroblaste E. Basophile E. polychromatophile E. acidophile Réticulocyte • En 5 jours : • Diminution de taille, perte du matériel nucléaire • Processus utilisant l’activation des caspases

  7. Une cascade de divisions asymétriques Autorenouvellement & Différenciation Cellule Souche Hématopoïétique : Cette cascade nécessite des facteurs de croissance qui seront spécifiques et indispensables à l’hématopoïèse *) IL3, TLy, précoce & tardif *) GM-CSF, TLy+fibro+endo, CFU-GM, CFU-MK, BFU-E *) G-CSF, TLy+fibro+endo, différenciation term des PNN *) EPO, rein, BFU&CFU-E&diff ter des GR *) Stem cell factor BFU-E CFU-E CFU-GM CFU-MK EPO+

  8. METHODES D’EXPLORATIONS EN HEMATOLOGIE

  9. METHODES D’EXPLORATIONS EN HEMATOLOGIE • La cellule Explorations cytologique, cytochimique, phénotypique, cytogénétique et moléculaire et fonctionnelle 2. L’environnement Histologie (BOM, Biopsie ganglionnaire…) • Les voies métaboliques Fer, Folates, B12 • Les données immunologiques (IG,ELP…) • Morphologie (os, TEP scan) • Explorations Isotopiques

  10. 1 6 étapes Cytologie 2 Cytochimie Sang Ganglion Moelle osseuse autres 3 Histologie 4 Cytométrie 5 4 DNA/RNA Moléculaire 6 Caryotype Chromosome

  11. Aspect cytologique • Frottis sanguin • Adénogramme/Liquide cellulaire (plèvre-ascite…) • Myélogramme

  12. Hémogramme

  13. DG?

  14. DG?

  15. Myélogramme Richesse: 0 à 5 Présence de mégacaryocytes Lignée érythroblastique: 10 à 30% Lignée Myéloide: 60 à 80% ( Blastes < 5%) Lignée Lymphoides (Lymphocytes et plasmocytes) < 20%

  16. Cultures de moelle osseuse • CFU-GEMM • CFU-GM • CFU-E, CFU-MK

  17. 1 6 étapes Cytologie 2 Cytochimie Sang Ganglion Moelle osseuse autres 3 Histologie 4 Cytométrie 4 5 DNA/RNA Moléculaire 6 Caryotype Chromosome

  18. Histologie médullaire Biopsie médullaire Etude histologique par def: - Richesse de la moelle - répartition graisse/cellules myéloides 50% chacun

  19. C F CS A M e e e e e e SANG Hématopoïèse & Microenvironnement A : adipocyte C collagène CS : cellule souche F : fibroblaste M : macrophage e : cellule endothéliale facteurs de croissance matrice extra-cellulaire

  20. Architecture de la moelle osseuse Espaces: vasculaires, graisseux & hématopoïétiques Cellule originelle: cellule pluripotente, cellule souche hématopoïétique donne lieu aux différents progéniteurs  lignées Différenciation: moelle osseuse –structure & microenvironnement-

  21. Biopsie ganglionnaire

  22. DG?

  23. 1 6 étapes Cytologie 2 Cytochimie Sang Ganglion Moelle osseuse autres 3 Histologie 4 Cytométrie 4 5 DNA/RNA Moléculaire 6 Caryotype Chromosome

  24. Cytométrie en flux: outil indispensable dans l’étude de l’hématopoïèse

  25. Réfraction à 90° Structure interne Rayon incident Réfraction à 180° Taille Cytométrie en flux: outil indispensable dans l’étude de l’hématopoïèse

  26. 1 6 étapes Cytologie 2 Cytochimie Sang Ganglion Moelle osseuse autres 3 Histologie 4 Cytométrie 5 4 DNA/RNA Moléculaire 6 Caryotype Chromosome

  27. Etudes Moléculaires • Identifications de transcripts (PCR/ RT.PCR) de gènes mutés • Réarrangement de gènes codant pour le TCR/IGs • Intérêt: • Dg • Détection de la maladie résiduelle • Pronostique (Quantification) • Thérapeutique (adaptation du TT)

  28. METHODES D’EXPLORATIONS EN HEMATOLOGIE • La cellule Explorations cytologique, cytochimique, phénotypique, cytogénétique et moléculaire et fonctionnelle 2. L’environnement Histologie (BOM, Biopsie ganglionnaire…) • Les voies métaboliques Fer, Folates, B12 • Les données immunologiques (IG,ELP…) • Morphologie (os, TEP scan) • Explorations Isotopiques

  29. EXPLORATIONS ISOTOPIQUES EN HEMATOLOGIE • Mesure du volume sanguin • Durée de vie des hématies • Cinétique du fer 59 • Scintigraphie médullaire • Durée de vie des plaquettes • Scintigraphie splenique • Test de schilling

  30. ISOTOPE VECTEUR Cr 51 Chromate de sodium - pas d'imagerie - élution faible : 0,8 %/j - adaptée à la cinétique In 111 - imagerie Oxine - élution notable : 5 à 6 %/j Tc 99m - imagerie pyrophosphate - élution élevée même après marquage in vitro - période inadaptée à la cinétique TECHNIQUE DE MARQUAGE DES HEMATIES

  31. APPLICATIONS CLINIQUES DES HEMATIES MARQUEES Tc99m- en cardiologie, calcul de la fraction d'éjection - recherche de saignement digestif - imagerie de la rate (traumatique ou accessoire) Cr51 - mesure de référence du volume globulaire - étude de la durée de vie des hématies In111 - étude de la durée de vie des hématies avec imagerie

  32. METHODE DE SEPARATION ET DE MARQUAGE DES HEMATIES Cr 51 ou In 111 prélèvement10 ml de sang + 200 Ui héparine séparationcentrifugation 400 g, 10 mn, 25°C --> culot hématies marquage 0,6 à 2 MBq chromate sodium Cr 51 ou 3 à 5 MBq oxinate In 111 15 à 20 min à 37°C lavage5 ml de sérum physiologique, 400 g, 5 mn, 25°C resuspension5 ml de sérum physiologique pour réinjection

  33. VOLUME SANGUIN

  34. VOLUME SANGUIN

  35. EXPRESSION DES RESULTATSDU VOLUME SANGUIN

  36. EXPRESSION DES RESULTATSDU VOLUME SANGUIN ( ICSH ) H adulte VGml = 1485 S – 825 VPml = 1578 S S surface corporelle F adulte VGml = 1.06 age x 822 S VPml = 1395 S Valeurs normales:+/- 25% ( intervalle de confiance 98% ) Limites superieures classiques VG F : 32 ml/kg VG H : 36 ml/kg

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