بنام حق

1. بنام حق A-kiani

2. Immuno Assay(IA) • روشهایی هستند که از آنتی بادی ها و آنتی ژنها بعنوان فاکتور شناساگراستفاده میشود. • Yalow&Bersonدر سال 1959 از آنتی ژن نشاندار و آنتی بادی برای شناسایی انسولین استفاده کردند. A-kiani

3. Enzyme Immuno Assay(EIA) EIA Ag* EIMA Ab* A-kiani

4. Heterogenous method ( جدا سازی مولکول نشاندار از غیر نشاندار( • Homogenous method (نیاز به جداسازی ندارد.) A-kiani

5. Enzyme – Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) • الایزا نامی عمومی برای روشهای آنزیم ایمنواسی است. • آنتی ژن یا آنتی بادي بر روی یک فاز جامد coat شده است. A-kiani

6. A-kiani

7. عوامل ایجاد کننده خطا و مشکلات احتمالی • عوامل قبل از انجام آزمایش - محکم بستن ویا طولانی بسته بودن گارو - تاثیر ضد انعقاد ها هنگام استفاده از پلاسما(EDTA روی آنزیم آلکالین فسفاتاز ) - نمونه همولیز(افزایش Hb و باقی ماندن آن در محیط بعداز شستشودر سنجش هایی که از آنزیم پراکسیداز استفاده میشود تداخل ایجاد میکند) A-kiani

8. عوامل ایجاد کننده خطا و مشکلات احتمالی - نمونه لیپمیک باعث کدر شدن و شیری شدن سرم میشود - نمونه ایکتریک( سرم زرد تیره – بیلیروبین بعنوان دترژنت عمل کرده - واکنش با قسمتهای هیدروفوب آنتی ژن و آنتی بادی) - تاثیر مواد نگهدارنده (اثر سدیم آزاید روی آنزیمهای پراکسیداز) A-kiani

9. ELISATROUBLESHOOTING A-kiani

10. تصحیح ایراد در هنگام شستشو از سر ریز شدن محلول شستشو از چاهكهای پلیت به یكدیگر اجتناب كنید. دلایل احتمالی آلوده شدن چاهك های كنترل منفی با كنترل مثبت مقادیر بالای كنترل منفی و یا بك گراند A-kiani

11. تصحیح ایراد - همیشه ابتدا كنترل منفی را در چاهكها ریخته و بعد كنترل مثبت را بریزید - برای هر نمونه برداری از نوك سمپلر جدید استفاده كنید - توجه داشته باشید كه نوك سمپلر به اندازه كافی بلند باشد تا نمونه ها با انتهایلوله سمپلرتماس پیدا نكند - تست را با مواد كیت تازه تكرار كنید دلایل احتمالی آلوده شدن ویال كنترل منفی مقادیر بالای كنترل منفی و یا بك گراند A-kiani

12. تصحیح ایراد - در هنگام شستشو مطمئن شوید كه تمامی باقیمانده هایآنزیم كنژوگه از چاهك ها خارج شده اند - تمامی نمونه ها و مواد را در مركز كف چاهك ها بریزید و از تماس نوك سمپلر بادیواره و لبه چاهك ها بپرهیزید دلایل احتمالی مقادیر بالای كنترل منفی و یا بك گراند شستشوی ناكافی و یا آلوده شدن كنترل منفی با آنزیمكنژوگه A-kiani

13. تصحیح ایراد مطمئن شوید كه تمامی اجزای كیت به دمای اتاق رسیده اند(20تا 25 درجه سانتی گراد) مطمئن شوید كه نوك سمپلرها خوب و محكم فیت شده اندلوله سمپلرها را چك كنید تا گرفته نشده باشندكالیبراسیون سمپلرها را چك كنید و در صورت عدم كالیبره بودن آنها باید كالیبرهشوند دلایل احتمالی مقادیر پائین كنترل مثبت یاابزوربنسهای پائین در زمان تست مواد داخل كیت به دمای اتاق رسانده نشدهاند مقدار نمونه كمتر از مقدار لازماست A-kiani

14. تصحیح ایراد دلایل احتمالی مقادیر پائین كنترل مثبت یاابزوربنسهای پائین محلول كروموژن - سوبسترا را درست قبل از استفاده آمادهكنید طرز تهیه محلول كروموژن - سوبسترا را در بروشور مطالعه كرده و به آنعمل كنید محلول كروموژن – سوبسترا بدرستی تهیه نشده است آلودگی سوبسترا به اسید و یا آلودگی كنترل مثبت بهباكتری مجدداً تست را با یك كیت جدید تكرار كنید A-kiani

15. تصحیح ایراد دقت در زمان انکوباسیون دلایل احتمالی مقادیر پائین كنترل مثبت یاابزوربنسهای پائین زمان انكوباسیون خیلی كوتاه است عملكرد صحیح نم گیر داخل كیسه پلیت را بررسی كنید استریپهائی كه مصرف نمی شوند را در كیسهقرارداده و در آن را محكمببندید ورود رطوبت به كیسه حاوی پلیت بررسی دمای انكوباتور یا اتاق دمای نامناسب در مدت انكوباسیون A-kiani

16. تصحیح ایراد دلایل احتمالی مقادیر پائین كنترل مثبت یاابزوربنسهای پائین دمای اتاق برای انكوباسیون سوبسترا خیلی پائیناست بررسی دمای اتاق خشك شدنچاهكهادر خلال انجام تست انجام تمام مراحل تست بدون وقفه افزودن ناكافی آنزیم كنژوگه غلیظ به محلول رقیق كنندهبرای ایجاد محلول آماده كار كنژوگه را دوباره با صحت كامل تهیه كنید A-kiani

17. تصحیح ایراد دلایل احتمالی در تمام خانه های پلیت رنگ ظاهر شدهاست استفاده ازحجم کم محلول شستشو و واكنش سوبسترابا ذرات باقی مانده آنزیم كنژوگه پر کردن چاهكها هنگام شستشو - بررسی لوله سمپلر ازنظر وجود ذرات مایع یا خشك شده - نوك سمپلر به حد كافی بلند باشد كه مایع با انتهای لوله سمپلر تماس پیدانكند محلول سوبسترا با كنژوگه آلوده است ظروف  را قبل از استفاده چك كنید ظرف محتوی سوبسترا آلوده و كثیف است پس از ریختن محلول سوبسترا پلیت را در تاریكیقرار دهید در خلال انكوباسیون سوبسترا پلیت در مقابل نور قرارگرفته A-kiani

18. تصحیح ایراد دلایل احتمالی واكنشهای مثبت كاذب شستشوی نا كافی یامسدود شدن كانالهای واشر الایزا اطمینان از صحت عملکرد واشرالایزا انجام كالیبراسیون و تعمیرات روتین وجود گلبولهای قرمزدر نمونه نمونه را قبل از استفاده سانتریفوژ نمائید تبخیر نمونه آنزیم كنژوگه در خلال انكوباسیون 37 درجه پلیترا با برچسب مخصوص بپوشانید دمای اتاق یا انكوباتور را چك كرده و در میزان موردنظر كالیبره كنید دمای انكوباسیون بالا A-kiani

19. تصحیح ایراد دلایل احتمالی واكنشهای مثبت كاذب آنزیم كنژوگه را با دقت در مركز كف چاهكها اضافه نمودهو از تماس نوك سمپلر با دیواره ها و لبه های چاهكها بپرهیزید آلوده شدن چاهكها با آنزیم كنژوگه آلوده شدنسوبسترا به آنزیم كنژوگه بازرسی لوله سمپلر ازنظر عدم وجود ذرات مایع یا خشك شده خارجی و استفاده از نوكسمپلر بلند غلظت بالای آنزیم كنژوگه در محلول رقیقكننده از روی دستور كار كیت یك محلول  كنژوگه آماده كار تازهبسازید A-kiani

20. تصحیح ایراد دلایل احتمالی قدرت تكرار پذیریضعیف یا دو پلیكیت  ناهمخوان دستگاه دیسپنسور را چك نمائید اشتباه در تقسیم مواد و نمونه ها برای از بین بردن حبابها از سوزناستفاده كنید ( برای هر چاهك از یك سوزن) وجود حباب در چاهكها با محلول شستشو اثر انگشت را پاك  كرده و سپس پلیت راخشك كنید اثر انگشت بر روی پلیت هرچاهك را کاملا با محلول شستشو پر كنید؛ محلول شستشو سر ریز نشود، پس از خالی كردنمحلول شستشو، پلیت را خوب خشك كنید تكنیك شستشوی ضعیف یا غلط A-kiani

21. تصحیح ایراد دلایل احتمالی حساسیت ضعیف در تهیه آنزیم كنژوگه آماده كار از مقدار مناسب و كافیآنزیم كنژوگه غلیظ در محلول رقیق كننده آن استفاده نشده تهیه محلول آماده كار تازه با استفاده از بروشور كالیبراسیون سمپلرها را چك كنید اشتباه در سمپلینگ آنزیم كنژوگه آماده كار زمان انكوباسیون ناكافی تكرار تست با زمان انكوباسیون مناسب دما مناسب نیست یا پلیت بعداز انكوباسیون اول مدت زیادی باقی مانده تا عملیات بعد روی آن صورتگیرد انجام تست طبق بروشور و بدون وقفه های اضافی A-kiani

22. تصحیح ایراد دلایل احتمالی ابزوربنس كالیبراتورها ( استانداردها ) بالا ست پلیت بعد از انكوباسیون اول مدت زیادی در دمای بالاتراز آنچه سازنده كیت سفارش كرده باقی مانده تا عملیات بعد روی آن صورتگیرد تست را طبق دستور بروشور و بدون وقفه های اضافیانجام دهید مقادیر كافی از نمونه ها در چاهك ها ریختهنشده كالیبراسون سمپلرها را بازرسی كنید A-kiani

23. تصحیح ایراد دلایل احتمالی نمونه ابزوربنس خارج از رنجكالیبراتورها دارد نمونه را با كالیبراتور صفر رقیق كرده و تست را تكرار كنید غلظت در نمونه بسیار بالاست A-kiani

24. تصحیح ایراد دلایل احتمالی كلیه جذبهای نوری پائین است حفظ دمای آزمایشگاه بین 20 تا 25 درجه دمای اتاق زیر 20 درجه سانتی گراداست A-kiani

25. تصحیح ایراد دلایل احتمالی كنترل از رنج خارج است تكرار تست با كنترل جدید آلودگی كنترل آلودگی كالیبراتورها تكرار تست با كالیبراتورهای جدید A-kiani

26. تصحیح ایراد دلایل احتمالی كروموژن آبی رنگ شده است استفاده از كروموژن تازه آلودگی کروموژن A-kiani

27. تصحیح ایراد دلایل احتمالی بعد از تركیب كروموژنو سوبسترا محلول آبی رنگ می شود آلودگی كروموژن وسوبسترا استفاده از كروموژن وسوبسترای تازه A-kiani

28. تصحیح ایراد دلایل احتمالی محلولمتوقف كننده واكنش ( Stop Solution) زرد رنگ شده آلودگی محلولمتوقف كننده استفاده از محلول متوقف كننده تازه A-kiani

29. تصحیح ایراد دلایل احتمالی رسوب و ذرات سیاه درچاهكها قبل از خواندن ابزوربنس رعایت زمان توصیه شده واكنش آنزیم كنژوگه وسوبسترا طولانی شدن زمان واكنش آنزیم كنژوگه و سوبسترا A-kiani

30. تصحیح ایراد دلایل احتمالی پس از انكوباسیون سوبسترا رنگی ظاهر نمی شود تهیه محلول تازه بانسبتهای صحیح استفاده از نسبتهای نامناسب كروموژن و سوبسترا استفاده از سوبسترای سالم سوبسترا خراب شده است A-kiani

31. تصحیح ایراد دلایل احتمالی رنگزایی با سرعت كم و با تاخیرایجاد میشود تكرار تست با محلول آنزیمكنژوگه جدید آنزیم كنژوگه ضعیف است اثر منفی برخی نگهدارنده ها بر فعالیت آنزیم (سدیم آزاید) عدم استفاده از نگهدارنده های بازدارنده دمای آزمایشگاه و سوبسترا را چك كنید. ( دما باید بین 20 تا25 درجه باشد.) دمای پائین آزمایشگاه و یا دمای پائین سوبسترا A-kiani

32. نكاتی مهم در شستشو: - مراحل تهیه محلول شستشو را به دقت انجام دهید . - صحت عمل دستگاه شستشو را روزانه و به صورت روتین چك كنید. - از طراز بودن سطح پلیت در هنگام شستشو اطمینان حاصل كنید . - مطمئن شوید كه چاهكها در هنگام شستشو كاملاً پر می شوند -ازخروج باقی مانده های كنژوگه در هنگام شستشو اطمینان حاصل كنید . - در هنگام شستشو از سر ریز شدن محلول شستشو و ورود آن به چاهكها ی مجاور بپرهیزید .- در دستگاه واشر فشار شستشو را كاهش داده و از فشارهای بالا استفاده نكنید . A-kiani

33. ادامه: - در هنگام شستشو باید طبق دستور كیت به تعداد دفعاتی كه ذكر شده عملیات شستشو را انجام داد . - بین هر مرحله شستشو پس از ریختن محلول شستشو 20 ثانیه وقفه ایجاد كنید . - در هنگام خالی كردن و یا آسپیره كردن محلول شستشو اطمینان حاصل كنید كه تمامی آن خارج میشود . - پس از اتمام مراحل شستشو با برگرداندن پلیت بر روی كاغذ نم گیر ذرات باقی مانده را خارج كنید . A-kiani

34. نكاتی مهم در سمپلینگ • -سمپلرها را طبق دستور سازنده آنها مرتباً كالیبره كنید. • - جلوگیری ازایجاد كف و حباب در هنگام افزودن نمونه. • -از پاشیده شدن نمونه ها وسایر محلولها به اطراف و سایر چاهكها بپرهیزید . • - برای هر نمونه یا محلول از نوك سمپلر جدید استفاده كنید . • - لوله سمپلر را جهت وجود قطرات و یا مواد خشك شده چك كرده و در صورت وجود • آنها را پاك كنید. • - اطمینان از محكم شدن نوك سمپلرها بر سر سمپلر A-kiani

35. نكاتی مهم درمورد میكروپلیت : -قبل از باز كردن درب كیسه حاوی میكروپلیت آنرا به دمای اتاق برسانید . - بعد از افزودن سوبسترا پلیت را در جای تاریك قرار دهید. - در هنگام خالی كردن پلیت باید دو طرف آنرا طوری فشار دهید كه استریپها نتوانند خارج شوند.- اگر استریپها در هلدر خوب فیت نمی شوند ابتدا آنها را 180 درجه چرخانده و جا بزنید و اگر باز هم فیت نشدند از هلدر مناسب استفاده كنید . - استریپهای استفاده نشده را همراه با نم گیر به داخل كیسه مخصوص برگردانده و در آنرا خوب ببندید. A-kiani

36. ادامه: • درزمان باز كردن درب پلیت در بار اول تاریخ را روی كیسه پلیت یادداشت كنید . - اثر انگشت ها را توسط محلول شستشو از روی پلیت پاك كنید و آنرا خشك كنید. - توجه كنید كه در هنگام انجام مراحل تست مانند شستشو ،ریختن محلولها در چاهك ها و قرائت ابزوربنس چاهكها در جای خود باشند . - قبل از قرائت ابزوربنس زیر پلیت را با دستمال مخصوص بدون ذرات پخش شوندهپاك كنید . - در خلال انجام تست نباید اجازه داد كه كف چاهك خشك شوند. A-kiani

37. نكاتی مهم در مورد آماده سازی سوبسترا: -از محلولهای تازه كروموژن و سوبسترااستفاده كنید . - طرز تهیه محلول سوبسترای آماده كار را به دقت مانند دستور كیت اجرا كنید .- دمای محلول در نتیجه تست بسیارمهم است زیرا در تولید رنگ تاثیر بسزائی دارد. - برای نگهداری محلول، سوبسترای تازه را با محلول قدیمی در یك ظرف مخلوط نكنید . - برای استفاده مجدد از ظروف سوبستراهای كهنه آنها را با محلول اسید سولفوریك شسته چند بار با آب مقطر شستشو دهید. A-kiani

38. نكاتی مهم در مورد آنزیم كنژوگه: - كنژوگه را در دمای ذكر شده در كیت نگهداری كنید . - كنژوگه رقیق شده را برای مدت طولانی جهت انجام تستهای دیگر نگهداری نكنید. و همیشه به اندازه نیاز برای تستی كه انجام می دهید محلول كنژوگه را آماده كنید - هرگز برای مدت طولانی محلول كنژوگه را در روی میز كار باقی نگذارید A-kiani

39. نكاتی مهم در مورد دما : -تقریباً نیم ساعت قبل از شروع تست تمامی اجزای كیت را به دمای اتاق ( 20 تا 25 درجه سانتی گراد ) برسانید . - دمای انكوباتوررا بطور مرتب چك کنید. دمای پائین تر از حد لازم می تواند باعث كاهش ابزوربنس شده و دمای بالاتر از آن باعث افزایش ابزوربنس میشود . - دمای مناسب برای انكوباسیون در دمای اتاق 20 تا 25 درجه سانتی گراد می باشد

40. پایان با تشکر از حضور شما سروران گرامی A-kiani