230 likes | 444 Views
Ο Ρόλος της Κυτταρομετρίας Ροής. Γιώργος Ρασιδάκης Λέκτορας Παθολογικής Ανατομικής. Σύγχρονο αιμοπαθολογοανατομικό εργαστήριο. Μορφολογία Ιστοχημεία Ανοσοϊστοχημεία In situ υβριδισμός. Μοριακή διαγνωστική (PCR, Southern, RT-PCR, Real Time PCR κτλ.). Κυτταρογενετική. Κυτταρομετρία ροής.
E N D
Ο Ρόλος της Κυτταρομετρίας Ροής Γιώργος Ρασιδάκης Λέκτορας Παθολογικής Ανατομικής
Σύγχρονο αιμοπαθολογοανατομικό εργαστήριο Μορφολογία Ιστοχημεία Ανοσοϊστοχημεία In situ υβριδισμός Μοριακή διαγνωστική (PCR, Southern, RT-PCR, Real Time PCR κτλ.) Κυτταρογενετική Κυτταρομετρία ροής Κλασσική κυτταρογενετική FISH
Η κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιεί την αρχή της υδροδυναμικής εστίασης των κυττάρων. Το δείγμα ενίεται σε ειδικό διαμέρισμα όπου υδροδυναμικά η ροή στενεύει σε διάμετρο αναγκάζοντας το κύτταρο να διέλθει ένα-ένα από οπή πριν συναντήσει τη δέσμη laser. Η δέσμη σκεδάζεται και εκπέμπονται φωτόνια σε φάσμα μοναδικό ως προς το χρησιμοποιούμενο φθοριόχρωμα.
Different cell populations of bone marrow aspirate
Αξιολόγηση γραφήματοςκυτταρομετρίας ροής Α+ Α- Β+ Β+ Αντίσωμα Α Α+ Α- Β- Β- Αντίσωμα Β
Διαγνωστική κυτταρομετρία ροής ΥΛΙΚΟ Αναρρόφηση μυελού Λεμφαδενικός ιστός FNA Περιφερικό αίμα
Κλινικές εφαρμογές κυτταρομετρίας ροής • Διάγνωση και υπο-τυποποίηση αιματολογικών κακοηθειών (π.χ. λευχαιμιών) • Παρακολούθηση υπολειπόμενης νόσου • Μέτρηση λεμφοκυτταρικών πληθυσμών σε ανοσοανεπάρκειες (π.χ. HIV) • Ανάλυση λειτουργικότητας ή ενεργοποίησης λεμφοκυττάρων (π.χ. CD11b/CD18, CD154) • Μέτρηση CD34+ κυττάρων μετά από BMT • Ανάλυση πλοειδικότητας DNA • Ανίχνευση εμβρυϊκών κυττάρων στο μητρικό αίμα
Ερευνητικές εφαρμογές κυτταρομετρίας ροής • Ανίχνευση έκφρασης/συνέκφρασης αντιγόνων σε κυτταρικές σειρές, μοντέλα πειραματοζώων κ.τ.λ. • Ανάλυση φάσεων κυτταρικού κύκλου (π.χ. PI ή BrdU assay) και απόπτωσης (π.χ. Annexin V binding)in vitro • Διαχωρισμός κυτταρικών πληθυσμών (cell sorting) • Μελέτες αρχέγονων κυττάρων (stemcells) • …και πολλές άλλες…
ΟΞΕΙΑ ΛΕΜΦΟΒΛΑΣΤΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ • Λέμφωμα-λευχαιμία από κύτταρα-βλάστες • Τ-ή Β- κυτταρικής προέλευσης που πρωτοπαθώς • προσβάλλει • το περιφερικό αίμα και μυελό των • οστών (λευχαιμία) ή • λεμφαδένες και εξωλεμφαδενικές εντοπίσεις • (λέμφωμα) (<25% διήθηση μυελού) 75% Β-κύτταρα 85% Β-κύτταρα παιδιών ενηλίκων Λεμφοβλαστική Λευχαιμία/λέμφωμα 25% Τ-κύτταρα 15% Τ-κύτταρα
Childhood B-ALL Bright expression of CD10 and CD19 GATE: Blasts
Τ – ΟΞΕΙΑ ΛΕΜΦΟΒΛΑΣΤΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ
Τ – ΟΞΕΙΑ ΛΕΜΦΟΒΛΑΣΤΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ Περιφερικό αίμα TDT+, CD19- CD3+
CD4+CD56+ BT: The classical entity Clinical presentation: Skin or LN presentation, with rapid BM/PB dissemination Morphology: lymphoid (+/- blastoid), large cell, DC2-like Immunophenotype: CD4+, CD43+, CD56+, DR+