TRANSFUSION

1. TRANSFUSION Groupes sanguins érythrocytaires (système ABO, système RH et système KELL Les examens en immuno-hématologie

2. 1900 Landsteiner découvre le 1er système des groupes sanguins : le système ABO • 1940 valide le système Rhésus • 1952 Dausset met en évidence le système HLA des GB

3. Les groupes sanguins érythrocytaires • Les groupes sanguins érythrocytaires sont déterminés pas des antigènes présents (ou non) à la surface des globules rouges • Certains antigènes sont situés dans la Mb lipidique (Rhésus), d’autres dans les glycolipides sur la face externe de la Mb du GR (ABO)

4. Les groupes sanguins érythrocytaires • Génétiquement induits et déterminés indépendants les uns des autres • Antigènes allotypiques cad caractères propres à un groupe d’individus dans une espèce donnée • 29 systèmes de groupes sanguins liés au globule rouge • Le plus connu et le plus ancien : le système ABO, le plus important du fait de son implication en transfusion sanguine et pour la transplantation d’organe

6. Tableau de concordance entre nomenclature internationale (ISBT) et nomenclature utilisée en France (Fischer et Race)

7. Le système ABO • Le système ABO présente deux caractéristiques qui sont à l’origine des méthodes de groupage et expliquent son rôle important en transfusion et lors des transplantations : • La présence ou l’absence des antigènes A et/ou B à la surface des GR • La présence ou l’absence des anticorps naturels anti-A et/ou anti-B dans le plasma correspondants aux antigènes absents sur les GR

8. Les antigènes du système ABO

9. Les antigènes du système ABO

10. Répartition des Ag ABH dans l’organisme • à la surface des GR, PN, lymphocytes, monocytes et des plaquettes • présents sur de nombreuses cellules de l’organisme (cellules épithéliales, endothélium vasculaire, secrétions salivaires, cellules rénales) à l’exception de l’os, des neurones et de la cornée

11. Les anticorps naturels,réguliers • Naturels : Présents dans le plasma d’un sujet en dehors de toute stimulation antigénique reconnue (transfusion ou grossesse) • Sont dirigés contre les antigènes que le sujet ne possèdent pas sur leur GR • Réguliers : existent constamment chez les individus ne possédant pas l’antigène correspondant • Apparaissent chez l’enfant entre 0 et 6 mois (suite à l’hétéro immunisation par les bactéries de la flore intestinale) • Intérêt primordial en transfusion sanguine en raison du risque d’incident dès la 1ère transfusion incompatible

12. Les anticorps immuns, irréguliers • N’existent pas à l’état naturel • Apparaissent à la suite d’une immunisation préalable : grossesse ABO incompatible

13. Détermination du groupe ABO Le groupage ABO repose sur deux épreuves qui doivent être concordantes : Epreuve globulaire dite de Beth-Vincent consiste à rechercher par une technique d’agglutination les antigènes présents sur les hématies GR à tester (antigènes à déterminer) + sérums tests connus (anticorps monoclonaux anti-A et anti-B)

14. Réaction d’agglutination Agglutination Formation d’un réseau

16. Absence d’agglutination Agglutination

17. Interprétation difficile : Double population avec le sérum test anti-A - Patient A transfusé en O - Patient ayant subi une allogreffe de moelle (A/O ou O/A)

19. Détermination du groupe ABO Epreuve sérique dite de Simonin Consiste à identifier les anticorps naturels réguliers dirigés contre les antigènes absents Plasma à tester (anticorps naturels) + GR tests connus Le groupe ne sera définitif qu’à la suite de 2 déterminations réalisées à partir de 2 prélèvements sanguins différents

20. Groupage ABO BETH VINCENT anti-A anti-B SIMONIN GR A GR B

21. Règles de compatibilité ABO POUR LES GLOBULES ROUGES • SYSTEME ABO A identité A compatibilité Ac anti-B AB AB O O compatibilité donneur universel Ac anti-A Ac anti-B receveur universel pas d'Ac Ac anti-A B identité B

22. Règles de compatibilité ABO POUR LE PLASMA A O AB B

23. Le système RH (Rhésus) • Système complexe de groupe sanguin • On compte 52 antigènes appartenant à ce système • En pratique courante seuls 5 sont à connaître : D, C, c, E, e • La présence de l’antigène D défini le groupe Rhésus positif (85%) • son absence le groupe Rhésus négatif • Le phénotype Rhésus est déterminé par la présence ou l’absence des 5 antigènes : D, C/c, E/e

24. Le système Rhésus comprend 52 antigènes situés sur la membrane du GR

25. Les antigènes

27. Les Anticorps du système Rhésus • Toujours acquis, secondaires à une allo-immunisation, lors d’une transfusion ou d’une grossesse • Probabilité d’apparition fonction de l’immunogénicité • L’antigène Rh standard (D) est le plus immunogène puis dans l’ordre E, c et e • de classe IgG, hémolysants, capables de traverser le placenta, responsables de la symptomatologie présentée par un nouveau-né Rhésus + né de mère Rhésus - : maladie hémolytique du nouveau-né

28. Règles de compatibilité Rhésus POUR LES GLOBULES ROUGES Rh - Rh + = Ag D+

29. Les autres systèmes érythrocytaires • Importance transfusionnelle car certains de leurs antigènes sont fortement immunisants • Système KELL: l’Antigène K est un puissant immunogène pour les sujets K- (91% de la population K-) • Système Duffy : antigène Fya et Fyb • Système MNS : antigène S et s • Système Kidd : antigène Jka et JKb

30. Les autres systèmes érythrocytaires L’absence d’un Antigène dans l ’un de ces systèmes ne s’accompagne pas d’anticorps naturels, comme dans le système ABO, mais une transfusion ou une grossesse peuvent provoquer la formation d’anticorps immuns (allo-immunisation) responsables ultérieurement d’accidents transfusionnels ou de MHNN

31. Les examens immunohématologiques • Groupage ABO RH1 (RhD) • Phénotypage RH et Kell • Phénotypage étendu • Recherche d’anticorps irréguliers (RAI) • Epreuve de compatibilité au laboratoire • Tests de Coombs

32. Exigences relatives aux échantillons : Qualité et quantité : • Identification du patient : Nom patronymique / Nom marital / Prénom(s) / Date de naissance / Sexe. • Exigences relatives aux documents accompagnateurs : • Etablissement de soins : service demandeur / ligne téléphonique directe • Prescripteur : nom, signature du médecin prescripteur, date de prescription • Préleveur : nom et qualité du préleveur, signature, date et heure du prélèvement • Identification du patient : nom patronymique, nom marital, sexe et date de naissance • Nature des analyses demandées • Renseignements cliniques éventuels • Si une transfusion est envisagée, date et heure prévues, niveau d’urgence.

33. Les examens immunohématologiques Groupage ABO RH1 • correspond à la détermination du groupe ABO indissociable de la recherche du Rhésus standard D • le groupage est considéré comme définitif si les résultats sont concordants sur deux déterminations sur 2 prélèvements différents • Contexte pré-transfusionnel avéré ou potentiel et contexte périnatal • La transmission électronique des résultats est la règle pour la délivrance des PSL

34. Phénotype Rhésus Kell • Recherche grâce à l’utilisation de sérums tests anti-C, anti-E, anti-c, anti-e et anti-K la présence ou l’absence à la surface des hématies des 5 antigènes suivants : C (RH2), E (RH3), c (RH4), e (RH5) et K (KEL1) • Contexte prétransfusionnel avéré ou potentiel • Contexte pré et périnatal • Validation de l’identification d’anticorps anti-érythrocytaires

35. Phénotype étendu • Recherche de la présence ou l’absence des antigènes : Jka, Jkb (système Kidd), Fya, Fyb (système Duffy), S, s (système MNS) • Champ d’application : - patient présentant un anticorps irrégulier dans l’un des systèmes concernés - à titre préventif chez patients devant recevoir des transfusions itératives - patients en instance de greffe

36. Recherche d’Anticorps Irréguliers (RAI) NB : Les anticorps immuns sont décelables avec un maximum de probabilité du 7ème au 15ème jour après la transfusion • Examen consistant à dépister et identifier les anticorps dirigés contre les antigènes érythrocytaires autres que A et B dans le sérum à étudier grâce à une gamme d’hématies tests • Délai de réalisation de 45 mn à plusieurs heures • Validité 72H

37. Recherche d’Anticorps Irréguliers (RAI) Champ d’application : • Obligatoire chez tout patient susceptible d’être transfusé • Contexte de greffe ou de transplantation • Contexte pré ou périnatal • Chez le patient transfusé itératif en bonne place au cours des séries de transfusion • Chez le patient transfusé dans le cadre du suivi post-transfusionnel (dans un délai de 1 mois après le dernier épisode transfusionnel)

38. CAT en cas d’urgence hémorragique Urgence vitale immédiate : distribution sans délai Prélèvement 2 déterminations groupe + RAI pas de groupe ni de RAI si non disponibles CGR O sans hémolysines Urgence vitale : délai de distribution inférieur à 30 minutes Prélèvement 2 déterminations groupe + RAI pas de RAI si non disponible nécessité de groupe ABO conforme Urgence « relative » : délai de distribution de 2 - 3 heures Prélèvement 2 déterminations groupe + RAI nécessité de groupe et RAI conformes

39. CHOIX DES CGR EN URGENCE VITALE Dans le cadre d’un dépôt d’urgence ayant en stock des CGR : O- (D-C-E-c+e+K-) non réservé à la transfusion isogroupe O+ (D+C+E-c-e+K-) non réservé à la transfusion isogroupe En fonction de D et Rhésus-Kell

40. Epreuve directe de compatibilité au laboratoire EDCL • Qualification biologique du don • Consiste à tester le sérum du receveur vis-à-vis du CGR à transfuser (l’objectif étant de détecter certains Ac masqués par la présence d’autres Ac, ou des Ac rares) • Validité 72H • Champ d’application : Receveur présentant ou ayant présenté un ou plusieurs allo-anticorps anti-érythrocytaires Nouveau-né présentant un test de Coombs positif ou né de mère allo-immunisée

41. Test de Coombs • Permet la mise en évidence de la sensibilisation in vivo des hématies humaines par des anticorps grâce à l’utilisation d’un réactif appelé antiglobuline humaine • Champ d’application : Maladie hémolytique du nouveau-né Incident transfusionnel Anémie hémolytique autoimmune

42. Recherche d'anticorps fixés sur les hématies Ac non spontanément agglutinables + anti-gammaglobulines humaines complexe agglutinant Hématies fœtales ayant fixé l'Ac