实验一　中和剂的选择

实验一　中和剂的选择 一　教学要求　　了解中和剂的作用、类型及选择方法。二　实验原理　　某些有机或无机化合物与消毒剂作用后不仅能及时终止消毒剂的杀灭微生物作用，且这些化合物本身及其与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基亦无不良影响。在进行消毒实验时，这些化合物可作为中和剂用来终止消毒剂杀菌作用，以便能准确获得消毒剂在一定时间内的杀菌结果。　　某一种消毒剂要用什么化合物中和，需要经过实验选择。实验时，将拟选择的中和剂样品加入测定管（该管含消毒剂和指示菌并已作用一定时间）中，经充分中和作用后，取样测定含菌数，测定结果与对照组的测定结果进行比较后，即可确定那种试剂可用作该消毒剂的中和剂。

三　实验材料与器材 • 器材：恒温培养箱，菌落计数器，电热恒温水浴锅，平皿（直径9cm）、锥形烧瓶、量筒、无菌刻度吸管（1.0，5.0，10.0mL）。 • 指示菌：大肠杆菌（8099或ATCC 25922），枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽胞。

四实验步骤 • 1、大肠杆菌菌悬液的制备 • 经活化过的大肠杆菌菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养24h。 • 加入5mL 无菌PBS洗下菌苔。 • 用无菌脱脂棉过滤。 • 经过滤的菌液用PBS稀释成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的菌悬液。 • 2、芽胞悬液的制备 • 经活化过的枯草杆菌黑色变种菌种转接于营养琼脂培养基斜面， 37℃下培养3~5d，取出室温下放置5~7d，以促使其芽胞形成（要求芽胞数达90%以上）。 • 用适量的PBS洗下菌苔，菌苔液置旋涡混合器上振荡1~2 min。 • 用无菌脱脂棉过滤。 • 将过滤液离心（3000r/min）10 min，沉淀用PBS洗涤3次。 • 用PBS制成适当浓度的芽胞悬液。 • 芽胞悬液置于45℃水浴中保温24h后，取出，放入80℃水浴中加热10 min（或60℃，30 min），杀死未形成芽胞的菌体。 • 将经过处理的芽胞悬液离心（3000r/min）10 min，沉淀（芽胞）再用PBS稀释成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的芽胞悬液。 • 2、测定 • 分4组进行测定：

3、结果处理 • 将计数结果填入表 • 分析实验结果是否符合以下标准： • 3、4、5号管菌数相似，其误差率≤10％。 • 6号管无菌生长。 • 2号管菌数明显少于3、4、5组。 • 1号管不长菌或明显少于2组。 • 符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指示菌的作用，中和剂及其与消毒剂的中和产物对指示菌无毒害，判定为该消毒剂的中和剂。

五思考题 • 中和剂有什么作用？

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