1 / 53

Mr.sc. Željko Šundov drd.

Vrijednost imunohistokemijskog određivanja gustoće novostvorenih krvnih i limfnih žila, ciklooksigenaze-2 i matriks metaloproteinaze-2 u karcinomima kolona. Mr.sc. Željko Šundov dr.med. Epidemiologija.

cale
Download Presentation

Mr.sc. Željko Šundov drd.

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Vrijednost imunohistokemijskog određivanja gustoće novostvorenih krvnih i limfnih žila, ciklooksigenaze-2 i matriks metaloproteinaze-2 u karcinomima kolona Mr.sc. Željko Šundov dr.med.

  2. Epidemiologija • Na 3. mjestu po učestalosti među zloćudnim novotvorinama kod muškaraca, a na 2. mjestu iza karcinoma dojke kod žena. • Godišnje u svijetu umire oko 550 000 ljudi.1 • Incidencija raste sa starošću, nakon 40-te godine života, a doseže vrh u dobi od 50 do 75 godina. • Stopa incidencije u RH za 2006. godinu iznosi 48,0/100 000.2 1Jemal A i sur. CA Cancer J Clin, 2006. 2 Strnad M i sur. Bilten HZJZ 2008.

  3. Klinička slika abdominalna bol rektalno krvarenje - promjene u pražnjenju stolice

  4. Prognostički pokazatelji • klinički stadij bolesti • stupanj histološke diferencijacije tumora • histološki tip • broj metastazama zahvaćenih limfnih čvorova • nalaz tumora u ekstramuralnim krvnim žilama • perineuralna invazija • peritumorska limfocitna infiltracija • stanični i molekulski pokazatelji

  5. Model kolorektalne kancerogeneze • Kolorektalna je karcinogeneza stupnjevit proces u kojem kumulativne mutacije gena dovode do promjena na fenotipskoj razini koje se manifestiraju rastom crijevne sluznice, displastičnim promjenama i konačno invazivnim potencijalom neoplastične lezije. Fearon E, Vogelstein B. Cell 1990.

  6. Osnovne odrednice ishoda bolesti oboljelih od karcinoma kolona su: • invazivnost tumora • metastatski potencijal Čimbenici uključeni u ove procese kandidati su za nove prognostičke pokazatelje.

  7. Angiogeneza je uključena u: Tumorsku progresiju Tumorsku invaziju Metastaze Folkman J. N Engl J Med, 1971. Angiogeneza 1-2 mm debljine

  8. Proangiogeni čimbeniciAngiogeni inhibitori Trombospondini-1,2 Angiostatin Endostatin Interferon a Vazostatin Fumagillin/TNP-470 IL-12 NSAR-i VEGF- A-D FGF-1,2 Angiopoietini-1,2 IL-8 Estrogeni

  9. Limfangiogeneza Vincent and Rafii, Cancer Cell, 2004

  10. CIKLOOKSIGENAZA (COX-1 i -2) Interes za istraživanje COX pojavio se kad je u nekoliko epidemioloških studija zamijećena niža incidencija kolorektalnog karcinoma među ljudima koji su uzimali NSAR. Giardiello FM. N Engl J Med, 1993., Giovannuccci E. Ann Intern Med, 1994.

  11. Porast razine COX-2 nađen je u 40 % kolorektalnih adenoma i 60-80 % kolorektalnih karcinoma u ljudi Ebehart i sur. Gastroenterology 1994 • Primjenom COX-2 inhibitora u FAP-u smanjenje broja polipa Steinbach i sur. N Engl J Med, 2000. • Ekspresija COX-2 povezana je s kliničko-patološkim osobitostima povezanih s lošijom prognozom Masunaga i sur. Clin Canc Res, 2000.

  12. Matriksne metaloproteinaze (MMP) MMP-e su proteolitički enzimi koji imaju glavnu ulogu u diseminaciji malignih tumora. Poremećena regulacija ovih enzimskih sistema povezana je s tumorskom progresijom. Egebald M.Nat Rev Cancer, 2002.

  13. Matriks metaloproteinaza 2 (MMP-2) • MMP-2 pripada porodici gelatinaza • Cijepa kolagen tip IV, sudjeluje u remodeliranju epitelnih i vaskularnih bazalnih membrana pri čemu nastaju proteolitički fragmenti koji potiču mobilnost stanica. Nakajima i sur. Cancer Res,1988. • Cijepa i laminin 5 koji je neophodan za invaziju i metastaziranje. Egebald i sur. Nat Rev Cancer, 2002.

  14. Problematika istraživanja In vitro studije i studije na životinjskim modelima objašnjavaju moguću ulogu COX-2 i MMP-2 proteina u nastanku karcinoma: • poticanjem angiogeneze, • inhibicijom apoptoze, • poticanjem stanične proliferacije i • povećanjem invazivnosti tumorskih stanica degradacijom i remodeliranjem staničnog matriksa.

  15. Gustoća novostvorenih krvnih žila –mean vascular density (MVD) U karcinomima kolona broj novostvorenih krvnih žila uglavnom povezan sa uznapredovalim kliničkim stadijem, pojavom metastaza i kraćim preživljavanjem. Guetz GD i sur. 2006. • Osnovni nedostatak studija: • neujednačena metodologija • primjena antitijela različite specifičnosti, • brojenje krvnih žila unutar tumora a ne na invazivnim rubovima tumora.

  16. Gustoća novostvorenih limfnih žila - lymphovascular density (LVD) • Vrijednost gustoće novostvorenih limfnih žila (LVD) kao potencijalnog prognostičkog pokazatelja u karcinomima kolona neistražena je. • Samo jedna studija u kojoj je nađena povezanost LVD-a primjenom imunohistokemijskog bojenja preparata tumora antitijelom LYVE-1 s metastazama u limfne čvorove i kraćim preživljavanjem. Duff SE i sur. Colorectal Dis,2007.

  17. COX-2 i MMP-2 vs. MVD/LVD • Prema početnim istraživanjima COX-2 i MMP-2 povezani su s porastom MVD-a • Povezanost s LVD do sada nije istraživana

  18. U prikazanom istraživanju prvi puta je ispitivana: • povezanost imunohistokemijskog profila COX-2/MMP-2 proteina s angiogenezom i limfangiogenezom mjerenom (MVD i LVD) • povezanost ovih biomarkera s kliničkopatološkim osobitostima tumora

  19. Ciljevi istraživanja • Odrediti imunohistokemijski profilCOX-2/MMP-2 2. Odrediti stupanj angiogeneze (MVD) i limfangiogeneze (LVD) • Odrediti povezanost imunohistokemijskog profila COX-2/MMP-2 sa MVD i LVD • Odrediti povezanost COX-2/MMP-2 i MVD i LVD s kliničko-patološkim osobitostima karcinoma kolona • Povezanost COX-2/MMP-2 profila, MVD i LVD s dužinom preživljavanja (uzimajući u obzir primijenjene metode liječenja) • Procijeniti vrijednost COX-2/MMP-2 profila, MVD i LVD kao potencijalnih nezavisnih prognostičkih pokazatelja

  20. Hipoteza Određivanjem imunohistokemijskog COX-2/MMP-2 profila i gustoće novostvorenih krvnih i limfnih žila (MVD i LVD) uz definiranje granične vrijednosti broja krvnih/limfnih žila izdvojit će se skupina bolesnika sa: biološki agresivnijim karcinomom kolona povećanim rizikom nastanka recidiva pojavom limfogenih i hematogenih metastaza posebice bolesnika u terapijski i dijagnostički najslabije definiranom kliničkom stadiju Dukes B.

  21. Ispitanici • Oboljeli od karcinoma kolona operirani na Klinici za kirurgiju KB Split od 1997. do 2000. godine • Iz povijesti bolesti i protokola liječenja prikupljeni su klinički podaci: dob, spol, datum operacije, lokalizacija tumora, postojanje udaljenih metastaza i klinički stadij. • Prema dobnim skupinama bolesnici su svrstani u dvije kategorije : ≤60 i >60 godina. • Prema lokalizaciji karcinoma bolesnici će biti svrstani u pet kategorija : cekum, uzlazni kolon, poprečni kolon, silazni kolon i sigma

  22. Isključeni su bolesnici s karcinomom kolona: - kod kojih je učinjen palijativni kirurški zahvat • kod kojih je pregledano manje od 6 limfnih čvorova • koji su prije operacije zračeni ili su primali kemoterapiju • bolesnici u kliničkim stadijima Dukes A, C i D • bolesnici kod kojih je karcinom bio lokaliziran u rektumu.

  23. Patohistološka analiza Iz patohistološkog izviješća prikupljeni su patohistološki podaci: - kliničko-patološki stadij - veličina tumora • histološki tip • stupanj diferencijacije • nalaz vaskularne invazije • tip limfocitnog upalnog infiltrata • broj tumorom zahvaćenih limfnih čvorova/broj izoliranih limfnih čvorova.

  24. KLASIFIKACIJA DUKES

  25. Niski gradus( 50% žlijezda) Visoki gradus(< 50% žlijezda) Stupanj diferencijacije

  26. Vaskularna invazija Nakupine tumorskih stanica unutar endotelom obloženih prostora na invazivnom rubu tumora.

  27. Podatke o primijenjenom onkološkom liječenju dobili smo uvidom u povijesti bolesti bolesnika liječenih u Centru za onkologiju KBC Split. • Bolesnici kod kojih je uz kirurško primjenjivano i adjuvantno liječenje svrstani su prema primijenjenom liječenju u dvije kategorije: • adjuvantna kemoterapija, • liječenje metastaza.

  28. Podatke o preživljavanju dobili smo iz povijesti bolesti, uvidom u smrtne listiće i direktnim kontaktom s liječnicima bolesnika. • Periodom praćenja dužine bolesti smatrano je vrijeme od datuma operacije (datum postavljanja dijagnoze) do datuma zadnje kontrole ili datuma smrti (do 31.12.2007.)

  29. Imunoreaktivnost na COX-2: - nalaz smeđe obojenosti citoplazme tumorskih stanica - analiziranje intenzitet bojenja i postotak obojenih stanica. COX-2

  30. Pozitivna ekspresija MMP-2 proteina smatrana je: - citoplazmatska i/ili membranska obojenost više od 10% tumorskih stanica MMP-2

  31. Novostvorene krvne ilimfne žile obilježene su antitijelima na CD34 i LYVE-1, a područja najgušće neovaskularizacijena invazivnim rubovima tumora tzv. vruće točke određena su pregledom histoloških preparata pod malim povećanjem (x40). Potom su brojene na površini od 0,25mm2 pod povećanjem od 200x. MVD i LVD izraženi kao broj novostvorenih krvnih i limfnih žila na površini od 0,25mm2 MVD i LVD

  32. Imunohistokemijski profil 1. MMP-2 – / COX-2 – 2. MMP-2 + / COX-2 – 3. MMP-2 – / COX-2 + 4. MMP-2 + / COX-2 +

  33. Statistička obrada • χ2 test povezanosti varijabli • multipla logistička regresija • analiza preživljavanja (Kaplan-Meierova krivulja, Log rank test) • univarijatna Cox-ova regresija ( Cox stepwise Forward: Wald) • multivarijatna Cox-ova regresija (Cox stepwise Forward: Wald) • razina značajnosti p < 0,05 • statistička obrada s programom SPSS for Windows

  34. REZULTATI

  35. Multipla logistička regresija

  36. Cox-2 61vs 87 mj

  37. MMP-2 45 vs 100 mj

  38. MVD <25 - 92 mj 25-38 – 77 39-52 – 64 ≥53 – 40

  39. LVD <6 - 94 mj 6-10 - 86 11-17 - 57 ≥18 - 45

  40. ZAKLJUČCI

More Related