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杂谈学习和科研 阮康成 中科院上海生化细胞所

杂谈学习和科研 阮康成 中科院上海生化细胞所. 一把利斧和两把钝斧 严仁荫 发表好论文 G. Weber 仪器设备和科研水平的辨证法 G. Weber 冰糖葫芦和分析化学实验 张锡谕. Dr. Gregorio Weber MD, PhD. Univ. of Cambridge Professor of Univ. of Illinois at Urbana

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杂谈学习和科研 阮康成 中科院上海生化细胞所

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Presentation Transcript

  1. 杂谈学习和科研阮康成中科院上海生化细胞所

  2. 一把利斧和两把钝斧 严仁荫 发表好论文 G. Weber 仪器设备和科研水平的辨证法 G. Weber 冰糖葫芦和分析化学实验 张锡谕

  3. Dr. Gregorio Weber MD, PhD. Univ. of Cambridge Professor of Univ. of Illinois at Urbana Member National Academy of Sciences of USA

  4. Weber’s Contribution to Fluorescence Polarization Tryptophan fluorescence in protein Lifetime revealed by phase-modulation Red edge effect Energy transfer ANS….. Fluorescence quenching Conformational drift High pressure-fluorescence

  5. 关于SCI 文章 ISI 美国科学信息研究所 SCI Science Citation Index impact factor: 影响因子 总引用次数 / 过去2年该杂志发表文章总数 Stupid Chinese Idea

  6. 激发 发光 t 极短 荧光 fluorescence λex 物质 λem λem > λex

  7. 一把利斧和两把钝斧 严仁荫 发表好论文 G. Weber 仪器设备和科研 G. Weber 冰糖葫芦和分析化学实验 张锡谕

  8. 异常血红蛋白(HbM)构象的研究

  9. 血红蛋白

  10. Β-chain

  11. 异常血红蛋白HbM(上海青浦） His --Tyr

  12. 正常Hb和异常血红蛋白HbM(上海青浦）的异同 正常 Hb HbM Fe2+ - heme Fe3+ - heme Hb-- Fe2+ — O2 Hb- Fe3+ α- 87 Hisα- 87 Tyr ？？？？？？

  13. 异常血红蛋白(HbM)构象的研究 • ANS 荧光特性 • 毫微秒荧光仪器

  14. 1。ANS的量子产率与环境的极性有关

  15. 溶剂 水 甲醇 乙醇 丙醇 丁醇 辛醇 二恶烷 τ (ns) 0.55 6.05 8.85 10.2 10.9 12.3 15.0 Φ .004 0.2 0.36 0.47 0.51 0.65 0.85 ANS 的荧光寿命和环境介质的关系

  16. 正常：Fe++ 能携 O2 不正常： Fe+++ 不能携 O2 盐酸丙酮 + ANS

  17. Binding affinity : Heme >ANS

  18. τ 疏水性 ANS-apoHb 12.9 强 ANS-apoHbM 8.0 弱

  19. τ 疏水性 ANS-apoHb 12.9 强 ANS-apoHbM 8.0 弱 Fe2+的 稳定性(价态) 与介质极性(疏水性)有关 疏水性 强 稳定 Fe2+ 疏水性 弱 不 稳定 Fe2+ Fe3+

  20. 异常血红蛋白(HbM)构象的研究 • ANS 荧光特性 • 毫微秒荧光仪器 测试荧光寿命

  21. 荧光发生的机制

  22. 测 τ 的仪器： • 脉冲法 • Phase-modulation • 脉冲光源 • 光脉冲宽度： 毫微秒 (10 -9秒） • 光脉冲强度： • 光脉冲光谱： • 重复频率： • 快速信号检测

  23. Principle of free running discharge lamp Rc 20000 V Ro C Rd

  24. 光脉冲宽度：2毫微秒 (10 -9 秒） 光脉冲强度：109 – 1011光子 光脉冲光谱：200 –600nm 重复频率： 20 kHz

  25. Hybridization between subunits of phosphorylase A and Bdetected by depoloarization induced by homogeneous energy transfer

  26. phosphorylase A -(142)Ser-PO4 phosphorylase B -(142)Ser ? ?

  27. 高压力对生物大分子的影响 ---（无变性）解离寡聚蛋白亚基 Fluorecsnece polarization 荧光偏振 Homogeneous energy transfer G. Weber

  28. Le Chatelier’s Principle: A + B C + D △ V △ V Dissociation of Oligomeric protein < 0 Dissociation of DNA(RNA)-protein < 0

  29. 施加压力 释放压力 寡聚体蛋白 亚基 无变性解离寡聚蛋白亚基

  30. 荧光偏振 P （0 - 0.5）与分子大小正相关 荧光探针 P1 P2 P1 >P2 P2 P1 P1 >P2 P2 P1 P1 < P2 Depolarzation by Energy Transfer

  31. P5 P4 P1 P3 P1 < P2 <P3 <P4 P1<P5 P2

  32. x1 1000bar x10 解离 50% Subunit of phosphorylase a Subunit of phosphorylase b

  33. 1000bar 解离 50% Labeled subunit of phosphorylase a

  34. x1 1000bar x10 解离 50% Labeled subunit of phosphorylase a Subunit of phosphorylase a

  35. 世上无难事，只要肯登攀。

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