Серологическая диагностика ревматоидного артрита

1. Серологическая диагностика ревматоидного артрита Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду: высокоспецифичный маркер заболевания

2. «Окно возможностей» Терапия ревматоидного артрита Без лечения Начало терапии Позднее начало Раннее начало лечения Первый визит к ревматологу Идеальный курс Время Первые симптомы Начало деструкции сустава Через 2 года: Эрозивное поражение суставов у90%больных Через 5 лет: Инвалидность у40%больных

3. Ревматоидный артрит:специфические аутоантигены Антитела к цитруллинированным пептидам или белкам: • Анти-перинуклеарный фактор (АПФ) • Кератин • Филаггрин • ЦЦП (циклические цитруллиновые пептиды) • Sa-антиген, MCV(цитруллинированный виментин) • Фибриноген, фибрин • -Енолаза • CEP-1 (цитруллиновый пептид 1 альфа-енолазы)

4. Классификация РАКритерии ACR/EULAR, 2010 год Aletaha et al, Ann Rheum Dis, 2010

5. Специфические аутоантитела:анти-филаггрин Анти-перинуклеарный фактор (1964 г.) Антитела к кератину, 1979 г. Клеткиэпителиящеки Эпителий слизистой щек Аутоантитела к филаггрину Чувствительность: 35-80% Специфичность: 70-99% ЭПИТОПЫ?

6. Цитруллин Дезиминирование остатков аргинина Цитруллин Аргинин АНТИГЕННЫЙ ЭПИТОП

7. Антигенный эпитоп: цитруллин Цитруллин – важная составляющая часть эпитопов аутоантител, выявляемых при ревматоидном артрите Walther J. van Venrooij Department of Autoimmune Biochemistry University of Nijmegen, Nijmegen, The Netherlands

8. Цитруллинированные пептиды:история ИФА тест-системы Выявляемые при ревматоидном артрите антитела распознают цитруллин-содержащие пептиды (ЦП) Выявление аутоантител к линейному ЦП Специфичность > 98%, но чувствительность 35-49% Выявление аутоантител к циклическому ЦП Специфичность > 98%, чувствительность > 70% Поиск оптимальных пептидов – тест-система 2 поколения – Anti-CCP2

9. Цитруллинированный пептид CCP = CyclicCitrullinatedPeptide Линейный пептид (из молекулы филаггрина:) Чувствительность для РА: 49% Циклический пептид: 68% = Цитруллин Schellekens et al., Arthritis Rheum, 2000

10. Table 1 Specificity and sensitivity of the CCP2 test for RA van Venrooij, W. J. et al.(2011) Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future Nat. Rev. Rheumatol. doi:10.1038/nrrheum.2011.76

11. Анти-CCP2 положит. Время до появления симптомов, годы Антитела к ЦЦП: выявляются задолго до появления симптомов РА 83 больных РА, все бывшие доноры крови Образцы сыворотки получены из банка крови – вплоть до 10 лет до появления первых симптомов Rantapäa-Dahlqvist et al., Arthritis Rheum, 2003

12. Анти-ЦЦП, тест 2 поколения:чувствительность и специфичность

13. EUROIMMUN ИФА тест-система фирмы EUROIMMUN КАЛИБРОВКА : НАДЕЖНО И ЭКОНОМИЧНО О Калибратор 1- верхняя граница измеряемого диапазона Калибратор 2- верхняя граница нормальных значений Калибратор 5- граница чувствительности теста

14. - калибратор 1 - положительный контроль - калибратор 2 - отрицательный контроль - калибратор 3 - калибратор 4 - калибратор 5 EUROIMMUN ИФА тест-система фирмы EUROIMMUN МЕТОДИКА :УДОБНО И БЫСТРО Инкубация:60 30  15 мин.(комн. темп.)

15. Серологическая диагностика РА • Схема, принятая в Германии • При подозрении на РА: определение антител к ЦЦП (Anti-ССP-2) • Рекомендуется: дополнительно – определение ревматоидного фактора, особенно класса IgM • Определение анти-ЦЦП полезно: • для прогнозирования эрозивного течения РА • Определение анти-ЦЦП не слишком пригодно: • - для мониторинга прогрессирования РА • - для мониторинга ответа на терапию • Может быть, более полезны: Anti-MCV? Anti-Sa?

16. Серологическая диагностика РА Anti-MCV: чувствительность несколько выше, специфичность ниже

17. Серологическая диагностика РА (Bizzarro et al., Clinical Chemistry, 2007)

18. Серологическая диагностика РА • Что дает определение антител к ЦЦП? • Диагностика РА: высокая специфичность и чувствительность • Прогнозирование появления симптомов (у асимптоматических доноров крови, при недифференцированных артритах и т.д.) • Прогнозирование эрозивных форм • Но: • Низкая степень корреляции с активностью процесса • Sa-антиген?

19. Sa-антиген Стрипы 3-4 – анти-Sa-антиген Kindly provided by H. Ménard

20. Анти-SA:тест-система EUROIMMUN Сходимость: 98.5% Lora et al., 9th Dresden Symposiumon Autoantibodies, Germany, 2.-5. September 2009

21. Анти-Sa и анти-CCP:чувствительность и специфичность Исследование: проф. Й. Венковски, Пражский университет / EUROIMMUN

22. Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА Группы риска (модифицированный счет Виссера):RG 1: благоприятный прогноз (вероятность эрозивного РА <25%)RG 2: умеренный прогноз(25% to <50%)RG 3: неблагоприятный прогноз (50% to <75%)RG 4: плохой прогноз (75% to 100%) Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

23. Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА Положительное прогностическое значение (PPV) для плохого прогноза: анти-Sa 90% анти-CCP80% анти-MCV49% Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

24. Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА • РЕЗЮМЕ • Анти-Sa обнаружены только у больных с неблагоприятным и плохим прогнозом (10% в группе риска 3, 90% в группе риска 4) • PPV для плохого прогноза (группа риска 4): 90% анти-Sa, 80% анти-CCP, 49% анти-MCV • 20% положительных на анти-Sa образцов были отрицательны как на анти-CCP, так и на анти-MCV. • 1) Анти-Sa: преимущество в прогнозировании тяжелого течения РА2) Анти-Sa позволяет выявить ряд больных, отрицательных на анти-CCP и анти-MCV Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

25. Анти-CCP и анти-Sa Выводы Чувствительность: анти-ЦЦП>> анти-Sa Специфичность: анти-Sa> анти-ЦЦП Прогноз тяжелого течения: анти-Sa> анти-ЦЦП Анти-ЦЦП– основной диагностический маркер Анти-Sa – дополнительный показатель ИФА наборы EUROIMMUN для выявления IgG к ЦЦП и Sa-антигену

26. СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ! Зайко Сергей Дмитриевич Сентябрь 2011 г.