210 likes | 510 Views
Институт аналитического приборостроения Российской академии наук В.Е. Курочкин. СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ АНАЛИЗА НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ – ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ И СЕКВЕНИРОВАНИЕ ДНК. 28 марта, 2013 г. Санкт-Петербург. Основные этапы молекулярно-генетических исследований.
E N D
Институт аналитического приборостроенияРоссийской академии наукВ.Е. Курочкин СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ АНАЛИЗА НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ – ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ И СЕКВЕНИРОВАНИЕ ДНК 28 марта, 2013 г. Санкт-Петербург
Основные этапы молекулярно-генетических исследований Пробоподготовка Инактивация Выделение ДНК и РНК Ручное Автоматизированное Количественный анализ методом ПЦР-РВ Определение последовательности (секвенирование) ДНК
Полимеразная цепная реакция в реальном времени – ПЦР-РВ
Приборы для ПЦР-РВ • Основные характеристики: • Принцип и скорости нагрева/охлаждения • Формат термоблока • Числоканалов измерения флуоресценции • Источникизлучения • Детектор • Нагревкрышки термоблока • Алгоритмы обработки данных • Программное обеспечение
Уникальная оптико-тепловая схема ФЭУ Оптическое световолокно Элемент Пелтье
Основные области приложения наших разработок • Диагностика возбудителя туберкулеза • Диагностика возбудителей особо-опасных инфекций • Судебно-медицинская генетика • Диагностика однонуклеотидных полиморфизмов • Диагностика возбудителей заболеваний растений и животных • Научно-исследовательские работы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и др.
Диагностика возбудителя туберкулеза Образец Пробоподготовка, инактивация Выделение ДНК Анализ ПЦР-РВ Протокол • выявление ДНК МБТ • дифференциация • количественный • анализ • устойчивость МБТ • Мокрота • Культура клеток • Осадок • Биологические • жидкости • Ручное • Автоматическое Время исследования – 1 день
Первый этап – количественная оценка содержания ДНК МБТ в образце
Автоматический анализ по шаблону
Второй этап – определение множественной лекарственной устойчивости (МЛУ)
Автоматический анализ МЛУ по шаблону Для образца 751 необходимо проведение исследования на устойчивость МБТ к антибиотикам 2-ого ряда (широкую лекарственную устойчивость)
География лабораторий для диагностики туберкулеза методом ПЦР-РВ Регионы РФ, оснащенные лабораториями ИАП РАН и ООО «Синтол», отмечены зеленым цветом.
Вариант ПЦР-РВ лаборатории в мобильном исполнении Диагностика возбудителей карантинных и особо опасных заболеваний
Секвенирование ДНК в приборе капиллярного электрофореза
Приборы для секвенирования ДНК на основе капиллярного электрофореза
Идентификация личности по следам ДНК Сравнение результатов, полученных на приборе Нанофор-05М (ИАП РАН) и ABIPrism3500 DNA Sequencer (США) Нанофор-05М
Динамика роста лабораторий молекулярно-генетических исследований Ежегодно в России появляется несколько сотен лабораторий МГИ Целевые группы: НИИ, ВУЗы, Университеты медицинского, биологического и сельскохозяйственного профилей Медицинские центры (КДЛ) Противотуберкулезная служба Онкологические центры Центры крови Роспотребнадзор Россельхознадзор ФМБА МЧС ФСБ Минобороны И т.д.