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实验五　叶绿体的分离与荧光观察

实验五　叶绿体的分离与荧光观察. 一 . 实验目的. 1 ． 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解 差速离心 Differential centrifugation 特点与用途 2 ． 了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量 。. 二　实验原理. 采用差速离心分离细胞器； 沉降顺序：核 —— 线粒体 —— 溶酶体与过氧化物酶体 —— 内质网与高基体 —— 核蛋白体； 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态和分布；. Differential centrifugation. High speed.

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实验五　叶绿体的分离与荧光观察

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Presentation Transcript

  1. 实验五　叶绿体的分离与荧光观察

  2. 一. 实验目的 • 1 ．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途 • 2 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。

  3. 二　实验原理 • 采用差速离心分离细胞器； • 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体； • 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 • 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态和分布；

  4. Differential centrifugation High speed Low speed

  5. 三、实验用品 • 1．器材 • 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片 • 2．材料 • 新鲜菠菜叶 • 3．试剂 • 0.35mol/L氯化钠溶液

  6. 四、实验方法 • （一）叶绿体的分离与观察 • 取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 • 加入0.35mol/L氯化钠溶液， 共150ml，研磨，制成匀浆； • 将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中； • 取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清； • 上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体； • 加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀； • 取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片： • 普通光镜下观察；荧光显微镜下演示 • （二）菠菜叶徒手切片观察 • 新嫩菠菜叶斜切面１片，0.35mol/L氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。

  7. 五　实验结果与分析 • 1．简述：叶绿体的分离原理和方法； • 2 ．绘图：菠菜叶肉细胞的形态，显示叶绿体。

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