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实验三 大肠杆菌感受态细胞的 制备及质粒转化和检测

实验三 大肠杆菌感受态细胞的 制备及质粒转化和检测. 指导老师：苏 乔 副教授 电话 ： 84706356-606. 概 述. 1 、感受态细胞 具有摄取外源 DNA 的能力 冰预冷的 Cacl 2 溶液处理；短暂热休克 DH5α JM109 2 、转化率 衡量感受态细胞的质量 菌落数 / μ g 质粒 DNA 通常为 10 5 -10 8. 3 、设立对照： 受体菌对照组（只加入受体菌） DNA 对照组（只加入 DNA ） 阳性对照（加入标准的质粒 DNA 制品）

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实验三 大肠杆菌感受态细胞的 制备及质粒转化和检测

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Presentation Transcript

  1. 实验三 大肠杆菌感受态细胞的 制备及质粒转化和检测 指导老师：苏 乔 副教授 电话：84706356-606 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

  2. 概 述 1、感受态细胞 具有摄取外源DNA的能力 冰预冷的Cacl2溶液处理；短暂热休克 DH5α JM109 2、转化率 衡量感受态细胞的质量 菌落数/μg质粒DNA 通常为105-108 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

  3. 3、设立对照： 受体菌对照组（只加入受体菌） DNA对照组（只加入DNA ） 阳性对照（加入标准的质粒DNA制品） 4、蓝、白斑筛选 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

  4. 技术要点及注意事项 1、掌握好细胞密度，一般在A600为0.4左右为好 2、无菌操作 3、0-4℃条件下进行操作 4、热激时间要严格掌握 5、将X-gal和IPTG涂布于平板表面需至少提前3-4h准备 6、于4℃将平板放置数小时，可使蓝色充分显现 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

  5. 思 考 题 1、如何检测感受态细胞的质量？ 2、为什么转化后要在37℃摇床上温育45min再将菌悬液涂布到含有Amp的LB琼脂平板上？ 3、pUC118质粒和pUC118-GUS质粒的转化结果有何不同？ 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

  6. 经典失误集锦 1、未在超净工作台上取菌离心 2、玻璃涂布器过热 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

  7. 再 见 ！ 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室

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