1 / 21

DNR pirštų antspaudų procedūra

DNR pirštų antspaudų procedūra. Mėgintuvėliai kiekvienai grupei. Tiriamieji 1 – 5 Mėgintuvėliai su 10 µl DNR pavyzdžiu. 70 µl Fermentų mišinio. 10 µl CS DNR. 0,24 g Agarozės. 80 µl Buferinio užpildo. 10 µl žymeklio. 1. Pasiruošimas restrikcijai. Dėmesio!.

christian-kennedy
Download Presentation

DNR pirštų antspaudų procedūra

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. DNR pirštų antspaudų procedūra DNA-Fingerprint

  2. Mėgintuvėliai kiekvienai grupei DNA-Fingerprint

  3. Tiriamieji 1 – 5 Mėgintuvėliai su 10 µl DNR pavyzdžiu 70 µl Fermentų mišinio 10 µl CS DNR 0,24 g Agarozės 80 µl Buferinio užpildo 10 µl žymeklio DNA-Fingerprint

  4. 1. Pasiruošimas restrikcijai DNA-Fingerprint

  5. Dėmesio! • Kiekvienam medžiagų įpilimui naudoti švarią pipetę, kad išvengtumėte nereikalingo medžiagų susimaišymo. • Lengvai sprigtuokite kiekvieną mėgintuvėlį mažiausiai 30 sekundžių,kad gerai susimaišytų juose esančios medžiagos. DNA-Fingerprint

  6. 1. Mėgintuvėliai su DNR mėginiais CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNR 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl DNA-Fingerprint

  7. 1.1 Įdėkite po 10 µl fermentų mišinio į kiekvieną mėgintuvėlį CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Fermentų- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl mišinys (ENZ) DNA-Fingerprint

  8. 2. Restrikcijos fermentavimasis Patalpinkite mėgintuvėlius į 37 °C vandens vonelę ir laikykite joje 20 minučių. DNA-Fingerprint

  9. 3. Pasiruošimas elektroforezei DNA-Fingerprint

  10. 3.1 Gelio elektroforezės paruošimas Šukos Metaliniai strypeliai Padėkliukas Įdėkite padėkliuką, metalinius strypelis ir šukas į elekroforezės kamerą DNA-Fingerprint

  11. 3.2Agarozės gelio (0,8%) paruošimas • Įdedame 0,24 g agarozės + 30 ml TAE-buferio į 250 ml Erlenmėjerio kolbą. • Pakaitinti Erlenmejerio kolbą mikrobangų korsnelėje, pamaišome ją ir vėl pakaitiname. DNA-Fingerprint

  12. 3.3 Gelio įpilimas Įpilame 55 °C gelio į gelio dėžutę. Dėmesio: • Išmatuojame temperatūrą su ranka. • Nejudinkite gelio iki tol, kol jis netaps vientisas. DNA-Fingerprint

  13. 3.4 Kameros paruošimas • Kai gelis pasidaro vientisas, išimkite metalinius strypelius iš kameros • Užpildykite kamerą 270 ml of TAE-buferio, kad apsemtų gelį. • Išimkite šukas. DNA-Fingerprint

  14. 4. DNR žymeklio paruošimas • Įdėkite 10 µl buferio užpildo (LB) į 10 µl DNR žymeklį (M). DNA-Fingerprint

  15. 5. 10 µl buferio užpildymas Įdėkite 10 µl buferio į CS ir S1 – S5. 10 µl 10 µl 10 µl DNA-Fingerprint

  16. 6. Šulinėlių turinys Kairysis perėjimas turi likti tuščias. Įdėkite 20 µl kiekvieno pavyzdžio ir 20 µl DNR žymeklio (M) į šulinėlius. Atsiminkite seką! Užpildykite iš kaires į dešinę DNA-Fingerprint

  17. 6. Šulinėlių užpildymas Dėmesio: Gelio maišeliai negali būti praduriami. DNA-Fingerprint

  18. 7. Gelio elektroforezė (naudojant 120 V) (30min) Sustabdykite elektroforezę, kuomet mėlyna juosta pasislinks 1cm iki gelio apačios. DNA-Fingerprint

  19. 8. DNR ryškinimas • Perkelkite gelį į ryškinimo dubenį ir užpilkite jį 60 ml dažomojo tirpalo. • Nupilkite atgal dažomąjį tirpalą, į kolbą DNA-Fingerprint

  20. CSS1S2S3S4S5 M 9. Išanalizuokite gelį Kuris tiriamasis yra nusikaltėlis? DNA-Fingerprint

  21. 9. Rezultatai DNA-Fingerprint

More Related